Electroforesis de lipoproteínas séricas y lipoproteínas séricas

La electroforesis de lipoproteínas se usa principalmente para la clasificación de la hiperlipoproteinemia, y también es útil para comprender el estado de los lípidos en la sangre de la enfermedad coronaria y para guiar mejor el diagnóstico clínico y el tratamiento. Información básica Clasificación del especialista: clasificación del examen cardiovascular: examen bioquímico Género aplicable: si los hombres y las mujeres aplican el ayuno: ayuno Resultados de análisis: Debajo de lo normal: Se encuentra en baja lipoproteinemia y así sucesivamente. Valor normal: Lipoproteína de muy baja densidad: 0.06-0.3g / L Lipoproteína de baja densidad: 0-7 g / l Lipoproteína de alta densidad (masculina): 0.41-0.63g / L Alta densidad Zheng? .42-0.68g / L Por encima de lo normal: Se encuentra en hiperlipidemia primaria, etc. Negativo: Positivo: Consejos: Antes del examen, la dieta es ligera y el alcohol está prohibido. Busque un estómago vacío en la mañana. Valor normal Electroforesis en membrana de acetato de celulosa Partículas de cardo mariano 0g / L (0mg / dl); Lipoproteína de muy baja densidad 0.06 ~ 0.3g / L (6 ~ 30mg / dl); Lipoproteína de baja densidad <7 g / L (<700 mg / dl); Lipoproteína de alta densidad: Macho 0,52 ± 0,11 g / L (43 ± 18 mg / dl); Hembra 0.55 ± 0.13g / L (47 ± 2mg / dl). Importancia clínica 1, aumentado: visto en hiperlipidemia primaria. 2, inferior: visto en baja lipoproteinemia. Los resultados altos pueden ser enfermedades: hiperlipidemia, hiperlipoproteinemia tipo II, consideraciones de enfermedad coronaria 1. Muestra: la lipoproteína puede aislarse del suero fresco no congelado. El plasma no es adecuado para la electroforesis de lipoproteínas porque aparecerá una banda de fibrinógeno. 2. Los perfiles de lipoproteínas con componentes de separación claros son requisitos previos para una interpretación precisa. Si estas condiciones se cumplen bien, la electroforesis de lipoproteínas y el método de referencia (ultracentrifugación) pueden ser bastante consistentes. La precisión de cada componente es diferente, y se estima por el coeficiente de variación, que generalmente es inferior al 5%. 3. Ocasionalmente, las alfa-lipoproteínas desaparecerán y / o aparecerá una banda estrecha de alfa-lipoproteínas. Esto es porque los ácidos grasos libres están en. La acumulación en alfa-lipoproteínas hace que estas partículas tengan la misma carga. A medida que aumenta la densidad de la zona α, el resultado es alto. En comparación con las técnicas de precipitación, la electroforesis cuantitativa de lipoproteínas es costosa. Proceso de inspección Inmediatamente después de la extracción de sangre venosa, la operación de prueba: 1. Agregue el tampón al tanque de electroforesis y ajuste el tampón en los tanques a ambos lados para que estén en el mismo plano. 2. Preparación de la película de acetato de celulosa: tome una película de acetato de celulosa (2 cm × 8 cm) y dibuje una línea horizontal con un lápiz a 1,5 cm (un lado del lado negativo) de la superficie rugosa para hacer una marca punteada. Después de numerar e indicar los electrodos positivo y negativo, la película se sumergió en la solución de tampón de sodio barbiturato-barbital, y después de estar suficientemente saturada (generalmente 20 minutos), el exceso de tampón se eliminó intercalando el papel de filtro limpio. 3. El cabello de la película de acetato de celulosa se une al soporte del tanque de electroforesis y se endereza. Pipetee 3 ~ 5μl de suero no hemolítico con una micropipeta y agréguelo a lo largo de la línea horizontal en la línea horizontal. La muestra debe mantenerse a cierta distancia del borde de la película para evitar la deformación de la banda de proteína en el patrón de electroforesis. Después de que el suero penetra en la película, la película se invierte. Con el lado luminoso hacia arriba, pégalo en el soporte del tanque de electroforesis y conecta los dos extremos de la película al tampón con papel de filtro de doble capa o cuatro capas de gasa, y espera un momento. 4, encienda la alimentación, preste atención a los electrodos positivo y negativo en la película de acetato de celulosa, no conecte mal. Voltaje 90 ~ 150V, corriente 0.4 ~ 0.6mA / cm (se requiere un voltaje de electroforesis diferente, la corriente puede ser diferente, debe ser flexible), energía de verano 45 minutos, tiempo de encendido en invierno es un poco más largo, aproximadamente 60 minutos, expansión de la zona de electroforesis aproximadamente 25 ~ 35 mm puede ser. 5, teñido: después de completar la energía, retire la película y sumerja directamente en la solución de tinte Lichunhong S o la solución de tinción amino black 10B, manche durante 5 a 10 minutos (por la zona de albúmina), luego enjuague el resto en la solución de enjuague. Tinte hasta que el fondo sea incoloro. 6, cuantitativo: 1 método colorimétrico: seque la película enjuagada, corte el área de proteína teñida en el tubo correspondiente, agregue 0.6 ml / L de hidróxido de sodio 6 ml en el tubo de albúmina (calcule la absorbancia multiplicada por 2), el resto Agregue 3 ml a cada tubo, agítelo varias veces y colóquelo en un tanque de agua a 37 ° C durante 20 minutos para que su color se filtre. Tinción con Amino Black 10B Se leyó la absorbancia de cada tubo a 620 nm usando un espectrofotómetro, y luego se calculó el contenido de cada tubo (control simultáneo del tubo en blanco). Cuando el Lichunhong S se tiñó, el lixiviado se trató con hidróxido de sodio 0,1 mol / L, y la cantidad fue la misma que anteriormente. Después de 10 minutos, agregue 0.6 ml de ácido acético 400 ml / L al tubo de albúmina (multiplique la absorbancia por 2), y agregue 0.3 ml a los otros tubos para neutralizar parte del hidróxido de sodio para que el color sea más profundo. Si es necesario, centrifugue y tome el sobrenadante. La absorbancia de cada tubo se leyó a 520 nm mediante un espectrofotómetro (control de blanco simultáneo), y luego se calcularon los contenidos respectivos. 2 Método de escaneo del densitómetro: A. Transparente: aspire el líquido de enjuague en la película (para evitar que el líquido transparente se diluya para afectar el resultado transparente), sumerja la película en el líquido transparente durante 2 a 3 minutos, luego sáquela y aplánela rodando. Limpie y no raye los portaobjetos de vidrio (no cree burbujas), levante los portaobjetos por un tiempo, retire el exceso de líquido transparente, coloque en un horno a una temperatura constante de 90-100 ° C, hornee durante 10-15 minutos, retire y enfríe a temperatura ambiente. Las áreas de proteínas transparentes por este método son distintas, la película es plana y puede escanearse directamente y conservarse permanentemente (transparente con naftaleno de hidrógeno o parafina líquida. La película enjuagada debe secarse y ser transparente, y la película transparente no puede almacenarse. Largo y fácil de arrugar). 2 Cuantificación de escaneo: la película transparente se coloca en un densitómetro completamente automático u otra caja oscura de densitómetro para el análisis de escaneo. No apto para la multitud. Personas inapropiadas: generalmente no hay personas que no sean adecuadas. Reacciones adversas y riesgos 1, hemorragia subcutánea local: después de la extracción de sangre se debe presionar durante un tiempo suficiente, especialmente aquellos con tendencia a sangrar, para no causar exudación subcutánea y hematomas debido a la falta de coagulación de la sangre. 2, infección: atención a la operación aséptica durante la extracción de sangre venosa, para no causar infección local.