Ensayo de formación de guirnaldas de eritrocitos de rata

Los linfocitos B están involucrados en la síntesis de anticuerpos y son células efectoras de las respuestas inmunes humorales. La superficie de las células B transporta inmunoglobulina de la superficie de la membrana (SmIg), receptores Fc y receptores del complemento. Se une fuertemente a la porción Fc del complejo antígeno-anticuerpo. Los glóbulos rojos de pollo u oveja se seleccionan y sensibilizan en complejos de EA con los correspondientes anticuerpos anti-eritrocitos. El receptor Fc de las células B puede formar una guirnalda con EA, que se llama corona de EA. Si el complejo EA se agrega al complemento y se une al receptor del complemento de las células B, se forma una roseta EAC. Hay receptores murinos de glóbulos rojos en la superficie de las células B, que pueden unirse a los eritrocitos de ratón para formar rosetas de eritrocitos de ratón (M-RFC), que se unen principalmente a las células B con receptores de IgM, y las M-RFC son en su mayoría células B ingenuas. Esta prueba se usa principalmente para detectar la cantidad de linfocitos B y para determinar el nivel de inmunidad humoral. Información básica Clasificación del especialista: clasificación del examen: examen de sangre Género aplicable: si los hombres y las mujeres aplican el ayuno: ayuno Resultados de análisis: Debajo de lo normal: Sin embargo, el porcentaje de rosetas ME fue reducido o ausente sin agammaglobulinemia e inmunodeficiencia combinada severa. Valor normal: Porcentaje de EM en sangre periférica femenina: 5% -10% Por encima de lo normal: El porcentaje de coronas ME en la sangre periférica de pacientes con leucemia linfocítica crónica es tan alto como 60% a 80%. Negativo: Positivo: Consejos: Por favor relájese cuando revise. Valor normal Resultados Se contaron 200 linfocitos bajo el microscopio. Los linfocitos que adsorbieron 3 o más glóbulos rojos de ratón fueron linfocitos B, y se calculó el porcentaje de guirnaldas de células de ratón (coronas ME). El porcentaje de roseta ME en la sangre periférica humana normal es del 5% al ​​10%. Importancia clínica El porcentaje de coronas ME en la sangre periférica de pacientes con leucemia linfocítica crónica es tan alta como 60% a 80%, pero no hay gamma globulinemia, inmunodeficiencia combinada severa, etc., y el porcentaje de guirnaldas ME está reducido o ausente. Los resultados bajos pueden ser enfermedades: no-gammaglobulinemia ligada al cromosoma X en niños, la alta incidencia de inmunodeficiencia secundaria en niños puede ser enfermedad: precauciones para la leucemia linfocítica crónica (1) Tiempo de incubación: el porcentaje de ME aumentó gradualmente con el tiempo de incubación. Después de la incubación durante 1 h, el porcentaje de EM fue de 7.4 ± 3.1%, y la incubación se incrementó a 18.3 ± 3.8% después de 18 h. Después de 72 h de incubación, se aumentó el número de coronas. Gradualmente cayó a 3.4 ± 7.1%. (2) Solución de cultivo: es más adecuado usar la solución de cultivo Tc199, y los resultados y la repetibilidad son buenos. El lavado y la resuspensión de linfocitos y glóbulos rojos con medio RPMl1640 tamponado con Hepes dio como resultado células que tienden a agregarse y formar células grandes, lo que da como resultado resultados poco confiables. (3) Cuando la proporción óptima de glóbulos rojos a linfocitos es de aproximadamente 35: 1, la proporción es> 60: 1, o la proporción es <25: 1, el número de coronas ME puede reducirse. (4) Conservación de la solución de cultivo MRBC: en la solución Alsever, el MRBC almacenado a 4 ° C durante 1 semana todavía produce un número estable de guirnaldas, mientras que el MRBC almacenado en PBS, solución salina o medio de cultivo Tc199, con el tiempo de almacenamiento prolongado, el número de coronas Gradualmente, después de 72 horas de almacenamiento, solo se pueden ver células pequeñas o formadoras de guirnaldas. Proceso de inspección (1) Tome 1 ml de la suspensión de glóbulos rojos de ratón anterior, agregue 3 ml de solución salina fisiológica, mezcle bien, 1500r / min, centrifugue durante 10 minutos, lave un total de 3 veces y finalmente prepare 1% de suspensión de glóbulos rojos de ratón con solución salina fisiológica (aproximadamente 1.4 × 108 Celda / ml). (2) Se tomaron 1,5 ml de heparina para la anticoagulación, los linfocitos se separaron por estratificación de linfocitos y la concentración celular se ajustó a 2 x 10 7 / ml con solución de Hank de suero de ternera al 20%. (3) Tome 0.1 ml de suspensión de linfocitos, agregue una cantidad igual de suspensión de glóbulos rojos de ratón al 1%, mezcle y coloque en un baño de agua a 37 ° C durante 10 min, 500 r / min, centrifugue durante 10 min, ponga el refrigerador a 4 ° C durante 2 ~ 3 h. (4) Pipetee 0.05ml de sobrenadante, agregue 1 gota de solución azul 2g / L, gire suavemente para mezclar, tome 1 gota de la mezcla en el portaobjetos, cubra el cubreobjetos, después de que las células se hundan, Consulte con un microscopio de alta potencia. No apto para la multitud. No hay multitud inapropiada. Reacciones adversas y riesgos Es un control seguro y es inofensivo para el cuerpo.