bêta-lactamase

La β-lactamase est une enzyme inactivant capable de catalyser l'hydrolyse d'une liaison amide dans un cycle β-lactame dans une biomolécule. La production bactérienne de β-lactamase est le principal mécanisme de résistance bactérienne aux antibiotiques β-lactames. Les antibiotiques-lactamases, notamment les pénicillines, les céphalosporines, les β-lactames atypiques, etc., sont les médicaments les plus largement utilisés, les plus étudiés et les plus largement utilisés. Informations de base Classification de spécialiste: Inspection et classification des maladies infectieuses: examen biochimique Sexe applicable: si les hommes et les femmes appliquent le jeûne: pas le jeûne Conseils: Selon le statut nutritionnel de tout le corps, du lait, des œufs, des fruits, du lait de soja, etc. sont donnés au repas. Valeur normale Le type et la proportion de la flore dans le corps sont normaux et le corps humain est dans un équilibre dynamique. Signification clinique Le mécanisme de résistance bactérienne: 1. Enzymes inactivées - principalement les bêta-lactamases (plus de 200 types), qui rendent les antibiotiques inefficaces. 2, changements de cible - la cible change avec les antibiotiques, de sorte que le rôle des antibiotiques a diminué. 3, le changement de la perméabilité de la membrane bactérienne - de sorte que les antibiotiques ne peuvent pas ou rarement entrer dans la bactérie pour atteindre la cible. Développement de résistances bactériennes de souches hospitalières (telles que Enterobacteriaceae, Staphylococcus aureus) à des souches extra-hospitalières (telles que Streptococcus pneumoniae, Streptococcus pyogenes, Neisseria gonorrhoeae), résistance à la résistance à un seul médicament Le médicament développe une résistance à plusieurs médicaments, telle que la résistance à la pénicilline de Staphylococcus aureus; la souche de BLSE est résistante à une variété d’antibiotiques couramment utilisés. Résultats anormaux Enterobacteriaceae, Staphylococcus aureus, Streptococcus pneumoniae, Streptococcus pyogenes, Neisseria gonorrhoeae et d’autres infections, mais l’utilisation d’antibiotiques n’est pas efficace ou l’effet n’est pas évident, les bactéries produisent une résistance aux médicaments. Les personnes nécessitant un examen ont des patients avec les conditions ci-dessus. Précautions Foule inappropriée: Non. Interdit avant l'examen: Faites attention aux habitudes alimentaires normales et à l'hygiène personnelle. Conditions d'inspection: coopérer activement avec le médecin. Processus d'inspection Détection de β-lactamase Dans les échantillons cliniques, Staphylococcus aureus, Haemophilus influenzae, Neisseria gonorrhoeae et quelques souches d’Enterococcus se sont récemment révélées résistantes à la pénicilline et à l’ampicilline. Etant donné que la souche ci-dessus produit de la β-lactamase, l'antibiotique susmentionné est hydrolysé. Les méthodes suivantes sont utilisées pour détecter l'enzyme: 1. Méthode de disparition de l'activité microbienne Cette méthode est une souche indicatrice de Bacillus subtilis très sensible à la pénicilline Si la souche à tester produit de la β-lactamase et détruit la pénicilline, il se produit une croissance de Bacillus subtilis des deux côtés de la ligne, sinon l'indicateur est toujours très grand. Anneau antibactérien. 2, détermination de l'amidon-iode La bêta-lactamase détruit le cycle bêta-lactame et l'iode se combine au cycle bêta-lactame ouvert pour convertir le complexe d'amidon bleu-iode en un produit incolore. Méthodes: Une suspension de 6000 μg / ml de pénicilline a été préparée avec une solution tampon de phosphate à pH 6,0, dans laquelle on a placé 0,1 ml de la solution dans un puits d'une plaque de microdilution .On a sélectionné et mis en suspension plusieurs colonies de la souche à tester, puis agité pendant 30 minutes à la température ambiante. Ajoutez 2 gouttes de solution d'amidon, ajoutez 1 goutte de solution d'iode, mélangez et observez immédiatement le changement de couleur. Lorsque la personne positive ajoute la solution d'iode, elle apparaît immédiatement en bleu, telle que sa couleur bleue disparaît dans les 10 minutes, ce qui suggère que la bactérie produit du Amidase. 3. Mesure d'acide La pénicilline est hydrolysée par la β-endase en acide de la pénicilline, le pH tombe en dessous de 6,8, avec un indicateur rouge phénol, à partir de la couleur rouge (violette) (solution mère: tampon citrate pH 8,5) → jaune (pH 6,8). Le suivant). 4, réaction de couleur céphalosporine thiophène Le cycle β-lactame de la nitrocefine est ouvert par la β-lactamase et la matrice passe du jaune au rouge. Méthode liquide: 10 mg de cefa nitrothiophene ont été dissous dans 1 ml de diméthylsulfoxyde, puis dilués à 1:20 avec du PBS à 0,1 mol / L (pH 7,0), et la concentration était finalement de 500 µg / m1 et la solution était jaune ou orange pâle. Conserver 4 à 10 ° C pendant plusieurs semaines. Prenez 0,05 ml de solution dans le puits de la plaque de micro-dilution ou dans le petit tube à essai, choisissez la colonie à tester, créez une suspension épaisse, mélangez avec le liquide de matrice dans le trou concave et modifiez le céphalosporine nitrothiophène de la température ambiante à la température ambiante pendant 10 à 30 minutes. Le rouge est positif Si la couleur n'est pas évidente, l'observation peut être prolongée de 6 heures. Il a été rapporté que les résultats de la méthode sur papier pour la détection de β-lactamase par Haemophilus influenzae et Neisseria gonorrhoeae sont précis, mais que pour certaines souches, une petite quantité de β-lactamase, étroitement liée aux cellules bactériennes, telles que la saprophyte Staphylocoque, etc., mieux par voie liquide. Le contrôle de la qualité est appliqué à l’une des méthodes de détection ci-dessus. Ne convient pas à la foule Généralement pas de tabous. Effets indésirables et risques Généralement pas de complications et de dommages.