test d'endotoxine bactérienne

Le test aux endotoxines bactériennes a pour but de déterminer si l'endotoxine bactérienne contenue dans l'article à l'essai répond aux exigences. L'endotoxine est un lipopolysaccharide de la paroi cellulaire de bactéries à Gram négatif dont le composant toxique est le lipide A. La bactérie est morte après la désintégration. Le test des endotoxines bactériennes comprend deux méthodes, une méthode sur gel et une méthode photométrique, cette dernière comprenant une méthode turbidimétrique et une méthode sur substrat chromogène. Lors du test du test, n'importe laquelle des méthodes peut être utilisée pour le test. Lorsque les résultats des mesures sont controversés, sauf indication contraire, les résultats de la méthode sur gel prévalent. Informations de base Catégorie de spécialiste: Inspection Catégorie: Examen microbiologique pathogène Sexe applicable: si les hommes et les femmes appliquent le jeûne: le jeûne Résultats d'analyse: En dessous de la normale: Valeur normale: Non Au-dessus de la normale: Négatif: Le gel ne reste pas intact et est négatif de la paroi du tube. Positif: Les enregistrements positifs qui n'ont pas glissé du mur étaient positifs. Conseils: Le test aux endotoxines bactériennes a pour but de déterminer si l'endotoxine bactérienne contenue dans l'article à tester répond aux exigences. Valeur normale Le type et la proportion de la flore dans le corps sont normaux et le corps humain est dans un équilibre dynamique. Signification clinique Le pyrogène est principalement une endotoxine libérée par une bactérie. Il pénètre dans la circulation sanguine du corps et provoque une série de réactions indésirables telles que la fièvre. Par conséquent, le test d'injection de pyrogène ou d'endotoxine bactérienne est un indice de qualité important pour assurer la sécurité de l'injection. Résultat anormal Cliniquement, lorsqu’une grande quantité de perfusion est administrée par voie intraveineuse, le patient présente des symptômes de frissons, une forte fièvre, une transpiration, des évanouissements, des vomissements en l'espace de 0,5 à 1 heure en raison de la présence de pyrogènes dans la solution médicamenteuse. La température corporelle peut atteindre 40 ° C en cas de forte fièvre. Ils peuvent même choquer. Le résultat positif peut être une maladie: Considérations sur l'entérite à Bacillus licheniformis Lors de l’établissement de la méthode de test des endotoxines bactériennes, lors du calcul de la limite d'endotoxine L, MVD et MVC, il est nécessaire de prêter attention aux paramètres importants tels que la dose humaine maximale, les spécifications du produit, la sensibilité du réactif pour l'expectoration, etc., car les erreurs de calcul nécessiteront des efforts ultérieurs. Tout a échoué. Les problèmes courants sont les suivants: 1. La dose clinique est déterminée de manière incorrecte. Seule la dose conventionnelle est utilisée. La dose maximale possible et la voie d'administration du corps humain ne sont pas prises en compte. Dans la formule de calcul limite L = K / M, en raison de la définition des valeurs K et M. Le flou rend l'attribution des valeurs K et M inexactes, ce qui conduit finalement à un calcul incorrect des limites. Par exemple, une injection d'un adulte clinique reçoit 40 à 80 mg par perfusion intraveineuse et un nourrisson (trois mois ou plus) est administré par voie intraveineuse à raison de 10 à 20 mg à chaque fois. La limite de la dose chez l'adulte (poids corporel 60kg) est de 3,75EU / mg, alors que le poids du nourrisson n'est que d'environ 5 kg, la limite calculée est d'environ 1,25EU / mg, si la dose maximale par kilogramme de poids corporel n'est pas prise en compte, la limite d'endotoxine bactérienne Il y aura une grande différence. 2. La limite d'endotoxines bactériennes de certaines variétés déclarées n'est pas calculée en fonction de la posologie clinique, mais en fonction de la dose du même type de test pyrogène, ce qui entraîne une erreur limite. 3. La limite d'endotoxines bactériennes de certaines variétés a été copiée de la pharmacopée étrangère et la différence entre la dose d'utilisation clinique du marché intérieur et le poids des Chinois et des étrangers n'a pas été prise en compte et la limite n'a pas été déterminée correctement. 4. Faux calcul de la dose journalière (doses multiples par jour). 5. Lorsque la spécification de la variété (concentration) change, le calcul du MVD n'est pas ajusté. 6. La dose maximale à utiliser pour établir la méthode a dépassé la dose utilisée dans la clinique. Processus d'inspection Tout d'abord, la détermination du titre Les étalons d'endotoxines bactériennes sont étalonnés en tant que points de repère pour déterminer la puissance équivalente du poids de base. Le titre pour 1 mg d'étalon de travail ne devrait pas être inférieur à 2 UE, pas plus de 50 UE, et les données expérimentales avec uniformité et stabilité. Le titre est déterminé comme suit: au moins 4 échantillons de chaque lot d'étalon de travail sont utilisés, et le même lot de réactif pour l'expectoration et le même étalon sont utilisés. Chaque étalon de travail est dilué avec de l'eau d'essai d'endotoxines * en fonction du poids et du produit standard. Une série de dilutions au double de la solution d'endotoxine est préparée et mise à réagir avec le réactif à l'hydrazine. Lorsque l'écart type (S) de la moyenne est inférieur à 0,365, la moyenne géométrique (en ng / mg) des paramètres de réaction des quatre étalons de travail et le paramètre de réaction (en UE / mg) de l'étalon sont calculés. Deuxièmement, la préparation du test 1. Les ustensiles utilisés dans cette méthode sont traités pour éliminer toute endotoxine exogène qui pourrait être présente.Vous pouvez également utiliser un rôtissage à sec à 30 ° C ou à 30 ° C ou à 2 ° C. D'autres méthodes appropriées peuvent également être utilisées. L'opération de test devrait empêcher la contamination microbienne. 2. Vérifiez la valeur de l'étiquette de sensibilité du numéro de lot 鲎 réactif avant le test, ce qui devrait répondre aux exigences. Ajouter la quantité de solvant réactif à l’hydrazine. Après dissolution, il s'agit d'une solution de réactif à base de guanidine prête à l'emploi. 3. Dilution de l’échantillon à tester: Lorsque le repère de sensibilité du numéro de lot 鲎 réactif est inférieur à la limite de poison interne de l’échantillon à tester, calculez-le à l’aide de la formule suivante et utilisez l’eau d’essai pour endotoxines * pour diluer le réactif à inspecter. Facteur de dilution de l'échantillon à tester = X / λ X: limite d'endotoxines limitées aux endotoxines (UE / ml) λ: valeur de sensibilité de l'agent de test pour l'agent de test (UE / ml) Troisièmement, vérifiez Tube à essai de 4 × 75 mm (ou 0,1 ml / jeu d'ampoule d'origine pour le réactif de l'expectoration) contenant 0,1 ml de solution de réactif pour l'expectoration, dont 2 sont ajoutées à 0,1 ml pour le tube à essai et 1 pour le standard de travail à 2 endotoxines X On a utilisé 0,1 ml comme tube de contrôle positif et 0,1 ml d'une solution de réactif pour l'expectoration a été ajouté comme tube de contrôle négatif. Après avoir mélangé doucement les tubes à essai, le tube a été fermé et placé verticalement dans un bain d'eau à 37 ± 1 ° C pendant 60 ± 2 minutes. Faites attention lorsque vous tenez le tube et prenez le tube pour éviter des résultats négatifs dus aux vibrations. (4) Jugement des résultats Le tube a été doucement retiré du bain-marie et lentement inversé à 18 h 00. Le gel dans le tube n'a pas été déformé, le tube positif n'a pas été glissé de la paroi du tube. (+) Le gel ne pouvait pas rester intact et était négatif de la paroi du tube. (1). Si l’éprouvette 2 correspond à (1), elle doit être considérée comme conforme aux règlements et l’essai de la méthode d’essai au pyrogène (méthode du lapin) ne doit pas être effectué. Si les deux tubes sont (+), ils doivent être considérés comme non conformes à la réglementation. Par exemple, 1 tube dans 2 tubes correspond à (+) et 1 tube à (1). Selon la méthode décrite, 4 tubes sont réanalysés, un tube sur 4 tubes représente (+), ce qui signifie qu’il n’est pas conforme à la réglementation. Sauf indication contraire dans le texte, les articles d’essai qui répondent aux exigences doivent être testés selon la méthode d’essai au pyrogène (méthode de lapin) et évalués en fonction des résultats. La limite d'endotoxine bactérienne dans l'article d'essai doit être conforme aux dispositions des articles respectifs. Le contrôle positif était (1) ou le contrôle négatif était (+) et le test était inefficace. Pièce jointe: Test aux endotoxines bactériennes pour eau stérile pour préparations injectables, eau pour préparations injectables, injection de chlorure de sodium, injection de glucose à 5% et 10%. Ne convient pas à la foule Généralement pas de tabous. Effets indésirables et risques Généralement pas de mal.