Examen chromosomique de culture cellulaire du liquide amniotique

En raison de produits chimiques nocifs, exposition aux rayons X, facteurs environnementaux, grossesse avancée, proches parents, etc., provoquant des maladies causées par la variation du nombre, de la morphologie, de la structure et de la combinaison des chromosomes pendant la grossesse. L'examen chromosomique des cellules du liquide amniotique revêt une grande importance pour le diagnostic prénatal des maladies chromosomiques. Informations de base Catégorie de spécialiste: Vérification de l'examen maternel Catégorie: Test génétique (ADN) Sexe applicable: si les femmes jeûnent: jeûner Résultats d'analyse: En dessous de la normale: Valeur normale: Non Au-dessus de la normale: Négatif: Nombre total de chromosomes: 46. Autosome: 22 paires (numéro 1-22). Chromosomes sexuels: XY chez les hommes et XX chez les femmes. Caryotype masculin: 46 ans, XY. Caryotype féminin: 46, XX. Positif: Des résultats différents des valeurs normales sont positifs, suggérant une malformation congénitale ou une autre maladie congénitale. Conseils: L'examen chromosomique doit prendre des échantillons de liquide amniotique à 16-20 semaines de gestation. Valeur normale Le nombre total de chromosomes est de 46. 22 paires d'autosomes (numérotés de 1 à 22). Le chromosome sexuel masculin est XY et la femelle, XX. Caryotype masculin 46, XY. Caryotype féminin 46, XX. Signification clinique Nombre de chromosomes anormal tel que syndrome de Down (trisomie 21), trisomie 18, trisomie, trisomie 38, trisomie 21, syndrome d'hypoplasie testiculaire congénitale, synthèse XXY Sign, syndrome de Turner, syndrome de trisomie X et syndrome du corps X multiple. Structure chromosomique anormale telle que syndrome de monomère partiel 4p, syndrome de monomère partiel 5p, syndrome de trisomie partielle 9p, syndrome de monomère partiel 9q, syndrome de monomère partiel 21q, syndrome de monomère partiel 22q, trisomie partielle 22q Syndrome, etc. Les résultats positifs peuvent être des maladies: hypoplasie ovarienne congénitale, paralysie cérébrale chez l'enfant, syndrome de Down chez l'enfant, paralysie cérébrale chez l'enfant, syndrome de pascal chez l'enfant, syndrome de Diggolger, syndrome du miaou de l'enfant, développement du testicule congénital chez l'enfant Considérations incomplètes sur les maladies génétiques 1. L’examen chromosomique doit prendre des échantillons de liquide amniotique entre 16 et 20 semaines de gestation. 2, ces maladies génétiques congénitales ont augmenté, manquent, translocation, inversion et autres anomalies quantitatives et structurelles, souvent manifestées comme un syndrome. La plupart des cas, tels que les malformations multiples, le retard de croissance et le retard mental, entraînent un avortement fœtal, une naissance prématurée ou une mortinaissance. Processus d'inspection (1) Prendre 15 à 30 ml de liquide amniotique pendant 16 à 20 semaines de grossesse et centrifuger à 1 000 tr / min pendant 10 min. (2) Jeter le surnageant en excès, laisser 1 ml de liquide amniotique et de cellules précipitées et disperser doucement dans une suspension cellulaire. (3) Transférer dans un ballon de culture carré de 25 ml, ajouter 3 ml d'un milieu ayant un pH de 6,5 à 6,8 (contenant 100 U / ml de pénicilline, 100 µg / ml de streptomycine) et 1 ml de sérum de veau, puis incuber dans un incubateur à 37 ° C. (4) Un grand nombre de colonies de cellules ressemblant à des fibroblastes ou épithélioïdes ont été observées après 7 à 10 jours de culture. Le milieu frais peut être échangé à ce moment. (5) Lorsque les colonies de cellules sont développées en fragments et qu'il existe de nombreuses cellules de division circulaires translucides, de la colchicine peut être ajoutée pour obtenir une concentration finale de 0,1-0,3 µg / ml, puis cultivée dans un incubateur à 37 ° C pendant 5-6 h. (Les procédures ci-dessus sont toutes effectuées dans des conditions d'asepsie). Normes de récolte: 1 avec les fibroblastes comme type principal, la croissance des cellules, 2 avec 10 oculaires et 20 fois d'observation objective, les clones de cellules en croissance couvrent un ou plusieurs champs de vision complets, 3 voir plus de 10 translucides Cellules rondes et plus de 10 doubles cellules de division brillantes rondes. (6) Si les cellules ne se développent pas vigoureusement, si le cycle de croissance n'est pas uniforme ou si les cellules vieillissent et si le standard de récolte n'est pas atteint, la sous-culture peut être poursuivie dans la bouteille d'origine. Méthode: Dans des conditions stériles, la solution de culture a tout d'abord été versée et quelques gouttes d'une solution de trypsine stérile à 2,5 g / L ont été ajoutées, puis le mélange a été agité et versé. En outre, 5 à 10 gouttes de trypsine ont été ajoutées et secouées doucement à 37 ° C pendant environ 5 minutes pour provoquer la chute des cellules adhérentes. On ajoute 4 ml de milieu frais contenant du sérum de veau et on laisse la culture reposer à 37 ° C pendant 4 à 5 heures. Changer soigneusement le milieu de culture et poursuivre la culture, elle peut être récoltée 3 à 5 jours après le passage. (7) Transférer la solution de culture dans un tube à centrifuger gradué, ajouter 1 ml de solution de trypsine ED-TA au ballon, placer dans un incubateur à 37 ° C pendant 5 min, puis rincer les cellules adhérentes avec une pipette à coude (2,5 g / peut également être utilisé). Digestion de la solution de trypsine). Les cellules détachées de la paroi de la bouteille ont été versées dans un tube à centrifuger, mélangées à la phase liquide de culture initiale et le flacon de culture a été lavé avec une petite quantité de solution saline physiologique chaude. Les cellules lavées ont également été versées dans le tube à centrifuger et centrifugées à 1000 tr / min pendant 10 min. (8) Aspirer le surnageant, ajouter 3 à 5 ml de solution hypotonique à 0,075 mol / L de KCl préchauffée à 37 ° C et fixer à 37 ° C pendant 10 à 15 min. (9) La pré-fixation, la fixation et la préparation sont identiques à la méthode de préparation des échantillons de chromosomes de cellules sanguines périphériques. Ne convient pas à la foule 1. Il y avait des signes d'avortement pendant la grossesse. 2. Lorsque la température corporelle dépasse 37,5 ° C. 3. Exfoliation précoce du placenta, infection abdominale et purulente. Effets indésirables et risques (1) Blessure maternelle: piqûre d'aiguille à piquer dans les vaisseaux sanguins causée par un hématome de la paroi abdominale, un hématome sous-séreux utérin. De temps en temps, le liquide amniotique pénètre dans la circulation sanguine maternelle à partir du trou de ponction et provoque une embolie du liquide amniotique. La vessie n'a pas été vidée avant la ponction et la vessie a été blessée. (2) Blessure du fœtus, du placenta et du cordon ombilical: l'aiguille de ponction peut endommager le fœtus et provoquer un saignement. Le placenta et le cordon ombilical peuvent également provoquer un saignement ou un hématome. Par conséquent, la source du saignement doit être identifiée lors de la prise de liquide amniotique hémorragique. Si vous pensez que vous êtes un fœtus, vous devez continuer à écouter le cœur du fœtus. (3) Fuite de liquide amniotique: le liquide amniotique postopératoire fuit du trou d'épingle, causant trop peu de liquide amniotique, affectant le développement du fœtus et même provoquant une fausse couche ou une naissance prématurée. (4) avortement ou naissance prématurée: l'incidence d'avortement ou d'accouchement prématuré est de 0,1% à 0,2%, se produit souvent dans la semaine qui suit la chirurgie, même après la ponction, une rupture prématurée de la membrane entraîne un accouchement prématuré. (5) infection intra-utérine: il peut y avoir une fièvre maternelle après la chirurgie. Une infection intra-utérine peut provoquer un développement fœtal anormal, voire la mort du fœtus. Par conséquent, l'amniocentèse doit être strictement aseptique.