Test de toxicité lymphocytaire

Lorsque des lymphocytes T effecteurs spécifiques sont mis en contact avec des cellules cibles in vitro, ils peuvent présenter la propriété de détruire et de lyser les cellules cibles, appelées toxicité lymphocytaire. La cellule cible peut être une cellule tumorale ou une autre cellule tissulaire. La façon dont les lymphocytes tuent les cellules cibles peut détruire les cellules cibles en tuant directement ou en produisant des lymphokines. C'est le test de toxicité lymphocytaire. Certains lymphocytes, tels que CTL, NK, LAK, etc., ont un effet de destruction direct sur les cellules cibles et, en fonction de la nature des cellules effectrices à détecter, les cellules cibles correspondantes, telles que les cellules tumorales, les cellules de donneur de greffe, etc., peuvent être sélectionnées. Cette expérience peut être utilisée dans la recherche sur l'immunité tumorale, le rejet de greffe, l'infection virale, etc. Les méthodes comprennent: une méthode de libération de chrome, une méthode de libération de lactate déshydrogénase et un dosage de cellules apoptotiques. Informations de base Classification de spécialiste: Classification d'examen d'oncologie: examen immunitaire Sexe applicable: si les hommes et les femmes appliquent le jeûne: le jeûne Résultats d'analyse: En dessous de la normale: Valeur normale: Non Au-dessus de la normale: Négatif: Normal Positif: Aucune donnée pertinente pour le moment. Conseils: Gardez un état d'esprit normal. Valeur normale La méthode d'examen morphologique a été comparée entre le groupe test et le groupe témoin, p <0,05. Méthode 125I ou 51Cr P> 0,05. Signification clinique Résultats anormaux: ce test peut servir d'indicateur pour mesurer l'immunité cellulaire in vitro de patients atteints de tumeurs, ainsi que pour déterminer le pronostic des patients atteints de tumeur en mesurant la capacité des cellules immunitaires à détruire les cellules tumorales et également identifier des sous-populations fonctionnelles de lymphocytes. La population à examiner: Le test croisé de toxicité lymphocytaire est également appelé test de cytotoxicité dépendant du complément (CDC). C'est pour vérifier s'il y a un donneur dans le receveur de la greffe d'organe ou son anticorps anti-HLA contre le receveur, et il doit effectuer un test CDC avant la transplantation d'organe. Précautions (1) Pour mesurer la capacité des lymphocytes du sujet à attaquer les cellules tumorales, les cellules tumorales et les lymphocytes du sujet ont été ajoutés au groupe expérimental, et les cellules cibles tumorales et le milieu de culture ont été ajoutés au groupe témoin. Si d'autres échantillons tels que des antigènes tumoraux ou immunogènes, des médicaments thérapeutiques, etc. sont impliqués dans l'immunité cellulaire, un troisième groupe doit être ajouté: dans ce groupe de test, les lymphocytes sont d'abord autorisés à réagir avec l'échantillon à tester, puis lavés et observés. L'effet cytotoxique des lymphocytes sensibilisés sur les cellules cibles de la tumeur. Les deux premiers groupes sont devenus le groupe de contrôle à ce moment-là. (2) Le taux de survie des cellules cibles et des lymphocytes devrait être dans un état optimal, généralement> 90%. (3) Le sérum de veau ajouté à la solution de culture doit être préalablement testé pour la toxicité. (4) Le nombre de cellules cibles et de lymphocytes inoculés doit être précis. (5) Le groupe expérimental et le groupe témoin devraient être disposés sur le même tableau afin de réduire l'erreur. (6) Le pH de la solution de culture est le plus préférablement de 6,8 à 7,2. Processus d'inspection (1) Inoculation de cellules cibles: sélectionnez des cellules tumorales qui peuvent se développer de manière adhérente, lavez-les avec une solution de Hank, digérez-les avec 2,5 g / L de trypsine pendant 2 à 3 min, versez la solution de trypsine (les cellules sont toujours attachées à la paroi de la bouteille) et utilisez Hank. Les cellules ont été lavées légèrement 3 fois et la solution de Hank a été versée. Les cellules adhérentes ont été lavées avec une solution de RPMI1640 contenant 10% à 20% de sérum de veau et le culot cellulaire a été séparé par filtration à travers un filtre de 100 mesh pour préparer une seule suspension de cellules tumorales de 1 x 10 6 / ml, et la suspension de cellules a été pipetée avec un compte-gouttes. Déposer dans une plaque de culture à 40 puits, 1 goutte par puits (environ 100 à 150 cellules), et placer la plaque dans un incubateur à 5% de CO2 à 37 ° C pendant 20 h. La plaque de culture a été retirée et la solution de culture a été retirée. Après la coloration de Wright, le nombre moyen de cellules tumorales adhérentes par 10 puits a été compté. Si la différence entre les deux groupes était> 1/3, l'erreur était trop grande pour être utilisée et l'erreur n'était pas grande. La plaque de culture peut être formellement testée. (2) Séparation des lymphocytes: Prenez 3 ml d'anticoagulation de l'héparine du sujet, séparez les lymphocytes avec la solution de lixiviation saccharose-diazépam, puis lavez-les trois fois avec la solution de Hank, puis mélangez-les avec la solution de RPMI1640 (2 ~ 3). ) × 105 / ml de suspension cellulaire. (3) Test de cytotoxicité: les lymphocytes et les cellules cibles sont mélangés dans un rapport de 200: 1, et (2 ~ 3) x 104 lymphocytes (dans un volume de 0,1 ml) sont ajoutés à chaque puits et environ 20% de sérum de veau sont ajoutés par puits. 0,1 ml de solution de RPMI 1640 a été placé dans un incubateur à 37% à 5% de CO2 pendant 40 h. La plaque de culture a été retirée et la solution de culture a été retirée Après la coloration de Wright, le nombre de cellules cibles restant au fond de la plaque a été compté au microscope. Ne convient pas à la foule Il n'y a pas de tabous. Effets indésirables et risques Il n'y a pas de complications ni de risques associés.