chilomicroni

I chilomicroni sono le più grandi particelle di lipoproteine ​​nel plasma umano e CM è la maggior parte dei TG dietetici erogati dal sito di assorbimento dell'intestino tenue alla circolazione sistemica. La velocità di eliminazione del CM è elevata, l'emivita è di 10 minuti e la persona normale non può rilevarla dopo 12 ore di digiuno Quando la lipoproteina viene elettroforizzata, il CM è all'origine. Va notato che il campione deve essere fresco durante l'elettroforesi sierica delle lipoproteine ​​e non deve essere conservato congelato. Informazioni di base Classificazione specialistica: Classificazione dell'esame digestivo: esame del sangue Genere applicabile: se uomini e donne applicano il digiuno: il digiuno Risultati dell'analisi: Al di sotto del normale: Valore normale: no Sopra normale: negativo: Normale. positivo: Iperlipoproteinemia tipo I, iperlipoproteinemia tipo V. Suggerimenti: prima dell'esame, la dieta è leggera e l'alcol è vietato. Valore normale Negativo. Significato clinico Iperlipoproteinemia positiva di tipo I, iperlipoproteinemia di tipo V. I risultati positivi possono essere malattie: iperlipoproteinemia di tipo I, precauzioni di iperlipoproteinemia di tipo V. 1. Metodo di torbidità immunoturbidimetrica: (1) Per quanto riguarda l'antisiero: il dosaggio turbidimetrico ha requisiti di antisiero più elevati rispetto ad altri metodi. Il metodo turbidimetrico è preferibilmente un anticorpo policlonale. L'anti-siero deve essere privo di anti-siero. È necessario prestare grande attenzione all'apo-I estratto dal siero umano per ottenere immunopurità, purezza cromatografica e purezza dell'elettroforesi, cosa impossibile nel laboratorio generale. Il titolo dell'antisiero (titolo) non deve essere inferiore a 16. Al momento, in alcuni reagenti commerciali nazionali, l'antisiero apoA-I ha un titolo molto basso, quindi è necessario prestare attenzione quando si acquista il kit. Se non si ha esperienza nell'identificazione della qualità degli antisieri prima dell'acquisto, è necessario chiedere all'unità qualificata di identificarla. (2) Il campione nel metodo superiore (siero) viene diluito 200 volte per il funzionamento manuale (100 μl di campione) e, se si tratta di un campionatore di precisione, può essere diluito 20 volte (usando 10 μl). Al fine di adattarsi alle condizioni di diversi laboratori (come diversi tipi di strumenti automatizzati), è necessario prestare attenzione alla proporzione di antigene-anticorpo quando si apportano le opportune modifiche. Va notato che non dovrebbe esserci un eccesso di antigene nel sistema di reazione e il limite superiore lineare non deve essere inferiore a 2,5 g / L. In altre parole, la quantità di antisiero deve essere sufficiente, altrimenti i risultati sono bassi quando l'apoA-I è alto nel campione. Allo stato attuale, alcuni kit di farmaci domestici non hanno solo un basso titolo anti-siero, ma il dosaggio dei campioni nell'operazione è troppo grande (come 3 ~ 5μl), l'anticorpo è ovviamente insufficiente e i risultati misurati sono inevitabilmente inaccurati. (3) Per ottenere una misurazione accurata, i risultati del calcolo della curva di calibrazione devono essere effettuati nella misurazione turbidimetrica apoA-I e B (metodo del punto finale). Una certa concentrazione di intervallo (basso dosaggio del campione) (X) è sostanzialmente lineare con torbidità (Y) e la regressione lineare calcola una certa intercettazione sull'asse Y (valore A <0,1), quindi la deviazione del risultato del calcolo viene calcolata mediante calibrazione a punto singolo. Più grande, i risultati misurati non possono riflettere accuratamente il livello di alto (alto basso, basso alto). Non trascurare l'accuratezza della misurazione a causa della semplicità del metodo a punto singolo. Indipendentemente dal tipo di strumento automatizzato, devi prima provare la curva di calibrazione. Se il test viene ripetuto nelle condizioni dello strumento e nelle condizioni specifiche, l'intercettazione della linea di regressione non è evidente, quindi è possibile utilizzare il metodo di calibrazione a punto singolo. Quando la quantità del campione è compresa tra 3 e 5 μl, anche se la quantità di antisiero viene aumentata, la concentrazione e la torbidità non sono lineari e possono essere calcolate solo dopo la conversione lineare della curva. (4) Il principale fattore di interferenza è la torbidità del siero stesso (come siero ad alto contenuto di grassi) e i metodi di pretrattamento come ultracentrifugazione o idrolisi della lipasi non sono pratici. Anche l'effetto della torbidità con i tensioattivi è limitato, quindi nel test deve essere realizzato un tubo bianco. Oltre al metodo a due punti utilizzato nell'analisi automatizzata, è un errore utilizzare manualmente un singolo reagente senza sottrarre il bianco del campione. Al fine di ridurre l'effetto degli effetti della matrice sulla risposta alla torbidità, è necessario utilizzare un siero a valore fisso come calibratore. Inoltre, è necessario escludere interferenze quali particelle di polvere e graffi di piatti torbidi. (5) Alcuni kit commerciali (compresi alcuni prodotti importati) hanno valori di sieri di calibrazione imprecisi, che sono importanti fonti di errore. 2. Elettroforesi del razzo: (1) La selezione del fattore di diluizione dell'antigene e la quantità di antisiero devono essere chiare, la pendenza della curva di calibrazione è moderata e la curva di allineamento è appropriata. Il metodo misura contemporaneamente apoA-I e apoB e la quantità dei due antisieri deve essere regolata in modo tale che le altezze dei picchi dei due siano diverse e l'altezza del picco apoB non sia inferiore a 1 cm. (2) Antisieri di diversi tipi di fonti (come conigli e pecore), testati a un prezzo equivalente, i risultati saranno diversi. Il saggio apoA-I è preferibilmente un antisiero di coniglio. Quando si usa il siero di coniglio, la forma del picco è nitida e il picco prodotto dal siero di pecora è spesso, la punta del picco è rotonda e smussata, e talvolta appare un'immagine fantasma prima del picco. Anche la pendenza della curva di calibrazione per il siero di calibrazione è diversa. Tuttavia, indipendentemente dall'antisiero utilizzato, i risultati quantitativi non sono molto diversi. (3) L'elettroforesi in determinate condizioni, l'altezza di picco del siero di calibrazione di diverse diluizioni non cambierà in modo significativo e l'inclinazione della curva di calibrazione è sostanzialmente la stessa. Se l'altezza del picco del campione supera l'intervallo della curva di calibrazione, è necessario regolare e ripetere il test del fattore di diluizione del campione. Il CV inter board è in genere inferiore al 5%. (4) I risultati dell'elettroforesi del razzo possono essere visti mediante colorazione o osservazione visiva diretta del picco del razzo. Il primo usa meno campioni e salva l'antisiero, ma se i campioni e l'antisiero vengono opportunamente aumentati, è più conveniente non macchiare. L'agarosio utilizzato dovrebbe essere elettroosmotico o ipotonico standard L'aggiunta di una quantità adeguata di destrano o glicole polietilenico al gel renderà più chiaro il picco del razzo. (5) La misurazione del picco del razzo può calcolare l'area o l'altezza del picco e l'area è l'altezza del picco moltiplicata per la larghezza del picco (la larghezza a metà altezza del picco). L'accuratezza della misurazione è preferibilmente fino a 0,1 mm. Devono essere utilizzate apparecchiature di amplificazione meccaniche o elettroniche. L'altezza del picco nell'intervallo della curva standard è preferibilmente da 1 a 4 cm. (6) La presente legge si applica all'analisi di un numero limitato di esemplari. Adatto anche per la determinazione di apoAII, CI, CII, CIII, D, E e Lp (a). Processo di ispezione 1. Metodo di torbidità immunoturbidimetrica: (1) Il campione deve essere un siero a separazione rapida che può essere separato nel tempo e può essere conservato in frigorifero a 2-6 ° C, misurato entro 1 settimana e conservato a -20 ° C per sei mesi. (2) Quando si utilizza un analizzatore completamente automatico, il rapporto tra antigene e anticorpo e tempo di reazione dovrebbe essere ragionevolmente selezionato in base ai diversi parametri di progettazione dello strumento. Può anche essere usato come nefelometria a dispersione di frequenza CM come il turbidimetro Beckman ICS o il sistema proteinarray). (3) Strumenti utilizzati nel metodo manuale: fotometro di precisione con filtro (o splitter) da 340 nm, il volume del campione è preferibilmente 0,5 ml (per risparmiare l'antisiero), preferibilmente con la coppa di flusso, la diluizione del campione è meglio diluita Campionatore corretto. (4) Trattamento del campione: il campione di siero e il siero di controllo qualità sono diluiti 1: 200 con un diluente del campione, cioè prima diluito 1:20 (5,0 μl di siero + 95 μl di diluente), quindi diluito 1:10 ( Siero in eccesso 1:20 per la determinazione di apoB). Dopo la miscelazione, è stato lasciato riposare da 25 a 37 ° C per 30 minuti ed è stato torbido a una lunghezza d'onda di 340 nm. Il risultato è stato letto su una curva standard in base al valore A di U-UB. Questo metodo ha un CV <5%. (5) Curva di calibrazione: per ogni lotto di operazione manuale e semiautomatica, è necessaria una curva di calibrazione e il siero di calibrazione può essere diluito in quattro concentrazioni di 1: 100, 1: 200, 1: 300 e 1: 400, che sono uguali al campione. Operazione, calcolare la concentrazione CM di ciascun tubo standard in base al valore fisso e tracciare la concentrazione (X) con il corrispondente valore A (Y) (calcolato mediante regressione lineare), che è sostanzialmente diritto, ma ha una certa intercettazione sull'asse Y. Quindi non è possibile utilizzare un singolo punto standard. Quando l'operazione è accurata, il coefficiente di correlazione tra la concentrazione e il valore A dovrebbe essere superiore a 0,985. Se sono presenti tre sieri di calibrazione a concentrazioni alte, medie e basse, può essere utilizzato allo stesso modo del campione e può essere utilizzato per la calibrazione a tre punti. Può anche essere utilizzato per la calibrazione a cinque punti (ovvero siero con concentrazione medio-alta uguale miscelazione, medio e basso Le concentrazioni di siero sono state miscelate in uguali quantità per diventare gli altri due sieri di calibrazione). La gamma lineare di questo metodo: 0,4 ~ 2,5 g / L. 2. Elettroforesi del razzo: (1) piastra di versamento: 10 g / l di agarosio 10 ml per piastra, sciogliere a bagnomaria bollente, mescolare bene, aggiungere 50 μl di antisiero CM e antisiero apoB 8 μl quando freddo a 50 ~ 55 ° C (la quantità dipende dal titolo dell'antisiero) ), mescolare rapidamente e versare sulla lastra di vetro preimpostata sulla piattaforma dell'acqua, raffreddare e quindi posizionare a 4 ° C, dopo 20 minuti, praticare dei fori, il foro è all'estremità del catodo della piastra, il diametro del foro è di 3 mm, la spaziatura del foro è di almeno 5 mm e la capacità del foro è di 5 μl. Posizionare la piastra nel serbatoio dell'elettroforesi e colmare con carta da filtro. (2) Diluizione dell'antigene: il siero di calibrazione è stato diluito a 1: 100, 1: 150, 1: 200, 1: 300 e 1: 400 (per curva di calibrazione) con soluzione NaCl 0,15 mol / L e il campione di siero era 1: Diluito in 200, mettere il frigorifero a 4 ° C per non più di 3 giorni. (3) Caricamento: 5 μl (accurati) di siero diluito e campioni sono stati prelevati in uno stato a bassa corrente (10 mA / piastra) e aggiunti al pozzetto del campione di gel di agarosio. Ogni scheda deve fare una serie di standard. (4) Accensione: flusso costante 24 mA / piastra, tensione terminale 6 ~ 8 V / cm, raffreddamento con acqua corrente per mantenere l'agarosio 15 ° C, elettroforesi 3 ~ 4 ore. (5) Deproteinizzazione e film secco: la piastra di agarosio dopo elettroforesi è stata immersa in 0,15 mol / L di NaCl per 30 minuti e il film è stato posizionato sul film di poliestere ed essiccato mediante leggera pressione sotto una carta da filtro multistrato. L'umidità nella colla viene quindi essiccata naturalmente con la carta da filtro, il film e il film di poliestere, oppure essiccata da una soffiante ad aria calda.Dopo l'essiccazione, il film viene naturalmente separato dalla carta da filtro e dal film di poliestere. (6) Tintura: il film di agarosio è stato immerso nella soluzione di colorazione per 20-30 minuti. (7) Decolorazione: immergere il film colorato con una soluzione decolorante fino a quando il picco del razzo è chiaro e lo sfondo è sostanzialmente incolore. Può essere bloccato in due pezzi di cellophane in acqua e può essere conservato a lungo dopo l'essiccazione. Può anche essere immerso in acqua corrente per rimuovere lo sfondo. NOTE: 1 Il rapporto di diluizione dell'antigene e la quantità di antisiero devono essere selezionati in modo tale che il picco del razzo sia chiaro, l'inclinazione della curva di calibrazione sia moderata e la linea sia adatta. Il metodo misura contemporaneamente apoA-I e apoB e la quantità dei due antisieri deve essere regolata in modo tale che le altezze dei picchi dei due siano diverse e l'altezza del picco apoB non sia inferiore a 1 cm. 2 Diversi tipi di antisieri (come conigli e pecore) vengono testati a un prezzo equivalente e i risultati saranno diversi. Il saggio apoA-I è preferibilmente un antisiero di coniglio. Quando si usa il siero di coniglio, la forma del picco è nitida e il picco prodotto dal siero di pecora è spesso, la punta del picco è rotonda e smussata, e talvolta appare un'immagine fantasma prima del picco. Anche la pendenza della curva di calibrazione per il siero di calibrazione è diversa. Tuttavia, indipendentemente dall'antisiero utilizzato, i risultati quantitativi non sono molto diversi. 3 Elettroforesi in determinate condizioni, l'altezza di picco del siero di calibrazione di diverse diluizioni non cambierà in modo significativo e l'inclinazione della curva di calibrazione è sostanzialmente la stessa. Se l'altezza del picco del campione supera l'intervallo della curva di calibrazione, è necessario regolare e ripetere il test del fattore di diluizione del campione. Il CV inter board è in genere inferiore al 5%. 4 I risultati dell'elettroforesi del razzo possono essere osservati mediante colorazione o osservazione visiva diretta del picco del razzo. Il primo usa meno campioni e salva l'antisiero, ma se i campioni e l'antisiero vengono opportunamente aumentati, è più conveniente non macchiare. L'agarosio utilizzato dovrebbe essere elettroosmotico o ipotonico standard L'aggiunta di una quantità adeguata di destrano o glicole polietilenico al gel renderà più chiaro il picco del razzo. 5 La misurazione del picco del razzo può calcolare l'area o l'altezza del picco e l'area è l'altezza del picco moltiplicata per la larghezza del picco (la larghezza a metà altezza del picco). L'accuratezza della misurazione è preferibilmente fino a 0,1 mm. Devono essere utilizzate apparecchiature di amplificazione meccaniche o elettroniche. L'altezza del picco nell'intervallo della curva standard è preferibilmente da 1 a 4 cm. 6 Questo metodo è applicabile all'analisi di una piccola quantità di campioni. Adatto anche per la determinazione di apoAII, CI, CII, CIII, D, E e Lp (a). Non adatto alla folla Nessuno. Reazioni e rischi avversi Nessuno.