Test di tossicità linfocitaria

Quando i linfociti T effettori specifici vengono contattati con cellule bersaglio in vitro, possono esibire la proprietà di distruggere e lisare le cellule bersaglio, chiamate tossicità dei linfociti. La cellula bersaglio può essere una cellula tumorale o altra cellula tissutale. Il modo in cui i linfociti uccidono le cellule bersaglio può distruggere le cellule bersaglio uccidendo direttamente o producendo linfochine. Questo è il test di tossicità dei linfociti. Alcuni linfociti, come CTL, NK, LAK, ecc. Hanno un effetto di uccisione diretta sulle cellule bersaglio e, a seconda della natura delle cellule effettrici da rilevare, è possibile selezionare le cellule bersaglio corrispondenti, come cellule tumorali, cellule donatrici di trapianti, ecc. Questo esperimento può essere utilizzato nella ricerca sull'immunità tumorale, sul rigetto del trapianto, sull'infezione virale e simili. I metodi includono: metodo di rilascio di cromo, metodo di rilascio di lattato deidrogenasi e saggio di cellule apoptotiche. Informazioni di base Classificazione specialistica: Classificazione dell'esame oncologico: esame immunitario Genere applicabile: se uomini e donne applicano il digiuno: il digiuno Risultati dell'analisi: Al di sotto del normale: Valore normale: no Sopra normale: negativo: Normale. positivo: Nessun dato rilevante al momento. Suggerimenti: mantenere una mentalità normale. Valore normale Il metodo di esame morfologico è stato confrontato tra il gruppo di test e il gruppo di controllo, P <0,05. Metodo 125I o 51Cr P> 0,05. Significato clinico Risultati anormali: questo test può essere utilizzato come indicatore per misurare l'immunità cellulare in pazienti con tumore in vitro; può anche determinare la prognosi dei pazienti con tumore misurando la capacità delle cellule immunitarie di uccidere le cellule tumorali e identificare anche sottopopolazioni funzionali di linfociti. Popolazione da esaminare: il test incrociato sulla tossicità dei linfociti è anche chiamato test di citotossicità dipendente dal complemento (CDC). Deve verificare se esiste un donatore nel ricevente del trapianto di organi o l'anticorpo HLA del donatore contro il ricevente e deve eseguire un test CDC prima del trapianto di organi. precauzioni (1) Nel misurare la capacità dei linfociti del soggetto di attaccare le cellule tumorali, le cellule tumorali e i linfociti del soggetto sono stati aggiunti al gruppo sperimentale e le cellule bersaglio del tumore e il terreno di coltura sono stati aggiunti al gruppo di controllo. Se nell'immunità cellulare sono coinvolti altri campioni come antigeni o immunogeni tumorali, farmaci terapeutici, ecc., Si dovrebbe aggiungere un terzo gruppo: in questo gruppo di test, i linfociti possono innanzitutto reagire con il campione da testare, quindi lavati e quindi osservati. L'effetto citotossico dei linfociti sensibilizzati sulle cellule bersaglio del tumore. I primi due gruppi sono diventati il ​​gruppo di controllo in questo momento. (2) Il tasso di sopravvivenza delle cellule bersaglio e dei linfociti dovrebbe essere in uno stato ottimale, generalmente> 90%. (3) Il siero di vitello aggiunto alla soluzione di coltura deve prima essere testato per la tossicità. (4) Il conteggio delle cellule bersaglio inoculate e dei linfociti dovrebbe essere accurato. (5) Il gruppo sperimentale e il gruppo di controllo dovrebbero essere disposti sulla stessa scheda per ridurre l'errore. (6) Il pH della soluzione di coltura è preferibilmente da 6,8 a 7,2. Processo di ispezione (1) Inoculazione delle cellule bersaglio: selezionare le cellule tumorali che possono crescere in modo aderente, lavarle con una soluzione di Hank, digerire con 2,5 g / L di tripsina per 2-3 minuti, versare la soluzione di tripsina (le cellule sono ancora attaccate alla parete del flacone) e usare Hank. Le cellule sono state leggermente lavate 3 volte e la soluzione di Hank è stata versata. Le cellule aderenti sono state lavate con una soluzione RPMI1640 contenente siero di vitello dal 10% al 20% e il pellet di cellule è stato rimosso mediante filtrazione attraverso un filtro a 100 mesh per preparare una singola sospensione di cellule tumorali di 1 × 10 6 / ml e la sospensione di cellule è stata pipettata con un contagocce. Cadere in una piastra di coltura da 40 pozzetti, 1 goccia per pozzetto (circa 100-150 cellule) e posizionare la piastra in un incubatore al 5% di CO2 a 37 ° C per 20 ore. La piastra di coltura è stata rimossa e la soluzione di coltura è stata rimossa. Dopo la colorazione di Wright, è stato contato il numero medio di cellule tumorali aderenti per 10 pozzetti. Se la differenza tra i due gruppi era> 1/3, l'errore era troppo grande per essere utilizzato e l'errore non era grande. La piastra di coltura può essere formalmente testata. (2) Separazione dei linfociti: prendere l'anticoagulazione con eparina 3 ml del soggetto, separare i linfociti con la soluzione di lisciviazione con saccarosio e diazepam, quindi lavarli con la soluzione di Hank 3 volte, quindi mescolarli con la soluzione RPMI1640 (2 ~ 3) ) × 105 / ml sospensione cellulare. (3) Test di citotossicità: i linfociti e le cellule target vengono miscelati con un rapporto di 200: 1 e (2 ~ 3) × 104 linfociti (in volume di 0,1 ml) vengono aggiunti a ciascun pozzetto e viene aggiunto circa il 20% di siero di vitello per pozzetto. 0,1 ml di soluzione RPMI 1640 sono stati posti in un incubatore al 5% di CO 2 al 37 ° C per 40 ore. La piastra di coltura è stata rimossa e la soluzione di coltura è stata rimossa Dopo la colorazione di Wright, il numero di cellule bersaglio rimanenti sul fondo della piastra è stato contato al microscopio. Non adatto alla folla Non ci sono tabù. Reazioni e rischi avversi Non ci sono complicazioni e pericoli correlati.