β-N-acetyloglukozaminidaza

β-N-acetyloglukozaminidaza (NAG) hydrolizuje β-N-acetyloglukozaminid, a także hydrolizuje β-N-acetylogalaktozaminę. Enzym jest szeroko obecny w różnych tkankach, narządach, płynach ustrojowych i komórkach krwi i jest kwasową hydrolazą w lizosomach. Metodami pomiaru są kolorymetria i fluorometria. Podstawowe informacje Klasyfikacja specjalistyczna: klasyfikacja badania moczu: badanie biochemiczne Obowiązująca płeć: czy mężczyźni i kobiety stosują post: post Wyniki analizy: Poniżej normy: Rzadko Wartość normalna: Β-N-acetyloglukozaminidaza w surowicy: 15,14–27,94 U / L Powyżej normalnego: Choroby kanalików nerkowych metale ciężkie (rtęć, ołów, kadm itp.) Oraz uszkodzenie nerek wywołane przez leki, niedokrwienie, niedotlenienie, utrata krwi, wstrząs itp. Mogą powodować wzrost aktywności NAG. Negatywne: Pozytywne: Wskazówki: W zależności od stanu odżywienia całego ciała w posiłku podaje się mleko, jaja, owoce, mleko sojowe itp. Wartość normalna 1, metoda kolorymetryczna p-nitrofenolu: NAG21,54 ± 6,4U / L w surowicy, NAG w moczu jest normalnie dystrybuowany, mediana wynosi 9,13U / g kreatyniny, górna granica 95 percentyla wynosi 16,10U / g Kreatynina 2. Metoda fluorescencyjna: Surowica dla dorosłych: 9,94 ± 2,O7U / L. Mocz dla dorosłych: 6,39 ± 3,19 U / LCre. Znaczenie kliniczne Oznaczanie aktywności NAG we krwi i moczu jest wrażliwe na zmiany zmian miąższowych nerek, szczególnie ostre urazy i czynne choroby, i jest głównie stosowane do wczesnego monitorowania uszkodzenia nerek i obserwacji choroby. 1, choroby kanalików nerkowych metale ciężkie (rtęć, ołów, kadm itp.) I wywołane przez lek uszkodzenia nerek, niedokrwienie, niedotlenienie, utrata krwi, wstrząs itp. Mogą powodować wzrost aktywności NAG. 2, zespół nerczycowy NAG w moczu często znacznie wzrósł, okres remisji zmniejszył się, szybki powrót do zdrowia po nawrocie, może być stosowany jako wskazanie do obserwacji klinicznej. Ostra faza kłębuszkowego zapalenia nerek jest bardzo różna, ale zmiana jest mniejsza niż zmiana uszkodzenia kanalików nerkowych. 3, lokalizację rozpoznania infekcji dróg moczowych ostrego i przewlekłego odmiedniczkowego zapalenia nerek wzrost NAG w moczu można odróżnić od zwykłego zapalenia pęcherza. Może być stosowany do diagnozowania wczesnych infekcji górnych dróg moczowych. 4, monitorowanie odrzucania przeszczepu nerki wczesne odrzucenie przeszczepu nerki może być zwiększone, bardziej wrażliwe niż białko moczu, kreatynina w surowicy, klirens kreatyniny. 5, wczesna diagnoza nefropatii cukrzycowej, nefropatia cukrzycowa, podwyższony NAG w moczu, wczesna diagnoza tej choroby jest lepsza niż albuminy w moczu i β2-mikroglobulinie. Wysokimi wynikami mogą być choroby: zespół nerczycowy, infekcje dróg moczowych (1) metoda kolorymetryczna p-nitrofenolu: 1 Substrat p-nitrofenol należy oczyścić i wstępnie uformować w temperaturze 50 ° C przez 24 godziny. Stężenie doprowadzono do 0,04 mmol / L za pomocą 10 mmol / L NaOH, a krzywą absorpcji skanowano za pomocą spektrofotometru o wąskim paśmie, λmax = 401 nm, zgodnie ze standardem IFCC, Aλmax = 0,7316 do 0,7388 i Eλmax = 18380 ± 90 (25 ° C). 2 Rozpuszczalność substratu jest niewielka, przy przygotowywaniu należy go dostosować do pasty z odpowiednią ilością buforu o pH 4,6, a następnie stopniowo dodawać bufor do wymaganej ilości. 3 Gdy wyniki pomiaru mieszczą się w zakresie ultra-liniowym, próbkę należy rozcieńczyć solą fizjologiczną i ponownie zbadać, a wynik pomnożyć przez współczynnik rozcieńczenia. 4 Na stężenie enzymu w moczu ma duży wpływ objętość moczu, należy zachować 24-godzinną objętość moczu. Jeśli szybkość wydalania enzymu oblicza się na podstawie stosunku NAG / g kreatyniny, to znaczy nie ma na nią wpływu stężenie lub rozcieńczenie moczu i nie ma potrzeby opuszczania 24 godzin moczu. (2) Metoda fluorescencyjna: 1 Fluorescencyjna metoda pomiaru NAG ma zestaw domowy, który ma wysoką czułość i nie ma na nią wpływu mocz. 2 Można go również używać z fabryką instrumentów analitycznych w Szanghaju nr 3 do produkcji fotometru fluorescencyjnego 930, filtra wzbudzającego 360 i kompozytu z filtrem emisyjnym (400 + 450), z zadowalającymi wynikami. 3 Stężenie każdego składnika w enzymatycznym roztworze reakcyjnym wynosi: 1,33 mmol / L substratu, 20 mmol / L kwasu cytrynowego i 432 mmol / L Na2HPO. 4 Rozpuszczalnikami stosowanymi w odczynnikach powinna być woda destylowana, podłoże powinno być wolne od 4-MU, BSA powinno być wolne od enzymu lub ogrzewane w temperaturze 50 ° C przez 2 godziny. 5 NAG w surowicy jest stabilna przez kilka godzin do kilku dni w temperaturze 4 ° C i stabilna przez kilka miesięcy w temperaturze -20 ° C. Próbka moczu była stabilna w 4 ° C przez 1 tydzień, a także zastosowano antykoagulowane osocze cytrynianowe. 6β-N-acetyloglukozaminid może być katalizowany przez dwa enzymy, jeden to β-N-acetyloglukozaminidaza (EC 3.2.1.30), a drugi to β-N-acetyloglukozozydaza (EC3) .2.1.52) Dla oczyszczonych enzymów można zdefiniować tylko EC3.2.1.30 lub EC3.2.1.52. NAG, o którym często mówi się w literaturze domowej, jest ściśle nazwany na podstawie użytego substratu, a nie swoistości enzymu dla substratu. Dlatego obecna obca literatura jest często określana jako β-N-acetyloglukozaminidaza. Proces kontroli (1) mieszanie kolorymetryczne p-nitrofenolu przy długości fali 405 nm, ścieżce optycznej 1 cm, wodzie destylowanej zero, odczytać absorbancję każdej probówki i sprawdzić krzywą standardową z różnicą (AU-AC). 1 Substrat p-nitrofenol należy oczyścić i wstępnie uformować w temperaturze 50 ° C przez 24 godziny. Stężenie doprowadzono do 0,04 mmol / L za pomocą 10 mmol / L NaOH, a krzywą absorpcji skanowano za pomocą spektrofotometru o wąskim paśmie, λmax = 401 nm, zgodnie ze standardem IFCC, Aλmax = 0,7316 do 0,7388 i Eλmax = 18380 ± 90 (25 ° C). Molowy współczynnik absorpcji według p-nitrofenolu 2 Rozpuszczalność substratu jest niewielka, przy przygotowywaniu należy go dostosować do pasty z odpowiednią ilością buforu o pH 4,6, a następnie stopniowo dodawać bufor do wymaganej ilości. 3 Gdy wyniki pomiaru mieszczą się w zakresie ultra-liniowym, próbkę należy rozcieńczyć solą fizjologiczną i ponownie zbadać, a wynik pomnożyć przez współczynnik rozcieńczenia. 4 Na stężenie enzymu w moczu ma duży wpływ objętość moczu, należy zachować 24-godzinną objętość moczu. Jeśli szybkość wydalania enzymu oblicza się na podstawie stosunku NAG / g kreatyniny, to znaczy nie ma na nią wpływu stężenie lub rozcieńczenie moczu i nie ma potrzeby opuszczania 24 godzin moczu. (2) Spektrofotometria fluorescencyjna: najpierw rozcieńczyć surowicę lub mocz buforem nie zawierającym albuminy surowicy bydlęcej (BSA), Mieszać, długość fali wzbudzenia wynosi 364 nm, długość fali emisji wynosi 448 nm, aby zatrzymać korektę zerowego poziomu cieczy, a intensywność fluorescencji rurki 6 μmol / L 4-MU ustawia się na 100, a intensywność fluorescencji rurki ślepej i rurki pomiarowej odpowiednio mierzy się. 1 Fluorescencyjna metoda pomiaru NAG ma zestaw domowy, który ma wysoką czułość i nie ma na nią wpływu mocz. 2 Można go również używać z fabryką instrumentów analitycznych w Szanghaju nr 3 do produkcji fotometru fluorescencyjnego 930, filtra wzbudzającego 360 i kompozytu z filtrem emisyjnym (400 + 450), z zadowalającymi wynikami. 3 Stężenie każdego składnika w enzymatycznym roztworze reakcyjnym wynosi: 1,33 mmol / L substratu, 20 mmol / L kwasu cytrynowego i 432 mmol / L Na2HPO. 4 Rozpuszczalnikami stosowanymi w odczynnikach powinna być woda destylowana, podłoże powinno być wolne od 4-MU, BSA powinno być wolne od enzymu lub ogrzewane w temperaturze 50 ° C przez 2 godziny. 5 NAG w surowicy jest stabilna przez kilka godzin do kilku dni w temperaturze 4 ° C i stabilna przez kilka miesięcy w temperaturze -20 ° C. Próbka moczu była stabilna w 4 ° C przez 1 tydzień, a także zastosowano antykoagulowane osocze cytrynianowe. 6β-N-acetyloglukozaminid może być katalizowany przez dwa enzymy, jeden to β-N-acetyloglukozaminidaza (EC 3.2.1.30), a drugi to β-N-acetyloglukozozydaza (EC3) .2.1.52) Dla oczyszczonych enzymów można zdefiniować tylko EC3.2.1.30 lub EC3.2.1.52. NAG, o którym często mówi się w literaturze domowej, jest ściśle nazwany na podstawie użytego substratu, a nie swoistości enzymu dla substratu. Dlatego obecna obca literatura jest często określana jako β-N-acetyloglukozaminidaza.