Aktywność telomerazy

Telomery są specjalną strukturą na końcu chromosomu u eukariontów i składają się z powtarzającej się sekwencji DNA bogatej w guaninę i związane z nią białka. Telomery są niezbędne dla stabilności końców chromosomów. Utrzymanie długości telomerów wymaga obecności aktywności telomerazy. Endogenne cytokiny odgrywają ważną rolę w długoterminowym przeżyciu unieśmiertelnionych komórek i komórek nowotworowych. Telomeraza jest kompleksem RNA i białka, jest swoistą zależną od RNA odwrotną transkryptazą. Może syntetyzować telomerowy DNA na końcu chromosomu z własnego RNA w celu uzupełnienia telomeru podczas podziału komórki. Utrata DNA, utrzymanie długości telomerów, utrzymanie dynamicznej równowagi chromosomów i unieśmiertelnienie komórek. Od czasu ustanowienia wysoce czułych metod wykrywania telomerazy opartych na PCR, telomeraza cieszy się szerokim zainteresowaniem. Stwierdzono, że telomeraza ma ścisły związek z proliferacją komórek, różnicowaniem i nieśmiertelnością i stała się jednym z głównych punktów badań podstawowych nad guzem i starzeniem się. Podstawowe informacje Klasyfikacja specjalistyczna: Klasyfikacja badań onkologicznych: badanie immunologiczne Obowiązująca płeć: czy mężczyźni i kobiety stosują post: nie na czczo Wyniki analizy: Poniżej normy: Wartość normalna: Nie Powyżej normalnego: Negatywne: Wartość normalna jest ujemna. Pozytywne: (1) Pacjenci z rakiem wątroby mają wyższy wskaźnik pozytywnej telomerazy (85%). (2) Telomeraza jest silnie wyrażana w większości złośliwych tkanek nowotworowych, takich jak nerwiak niedojrzały (94%), rak piersi (93%), rak jelita grubego (93%), rak żołądka (85%), rak prostaty. (84%), rak płuc (80%) itp. Aktywność telomerazy jest ściśle związana ze stanem klinicznym i rokowaniem nowotworu. (3) Może występować słaba aktywność telomerazy w kilku łagodnych zmianach (takich jak zapalenie wątroby, marskość wątroby, łagodny oponiak itp.). Wskazówki: Może występować słaba aktywność telomerazy w kilku łagodnych zmianach (takich jak zapalenie wątroby, marskość wątroby, łagodny oponiak itp.). Wartość normalna Negatywne Znaczenie kliniczne 1, pacjenci z rakiem wątroby mają wyższy wskaźnik pozytywnej telomerazy (85%), dodatnie poziomy aktywności AFP telomerazy są znacznie wyższe niż ujemne działanie telomerazy. Aktywność telomerazy nie była istotnie związana z wielkością guza, stopniem histologicznym i przerzutami do guza. Telomeraza może być markerem nowotworowym do diagnozowania raka wątroby. 2. Telomeraza jest silnie wyrażana w większości złośliwych tkanek nowotworowych, takich jak nerwiak niedojrzały (94%), rak piersi (93%), rak jelita grubego (93%), rak żołądka (85%) i rak prostaty ( 84%), rak płuc (80%) itp. Aktywność telomerazy jest ściśle związana ze stanem klinicznym i rokowaniem nowotworu. Dlatego telomeraza jest obecnie najbardziej specyficznym i uniwersalnym markerem nowotworowym. 3. Może występować słaba aktywność telomerazy w kilku łagodnych zmianach (takich jak zapalenie wątroby, marskość wątroby, łagodny oponiak itp.). Pozytywnymi wynikami mogą być choroby: nerwiak niedojrzały, rak jelita grubego, rak piersi, rak żołądka, rak wątroby, rak prostaty, rak okrężnicy, rak komórek nerkowych, rak tarczycy W ostatnich latach „hipoteza telomeru, telomerazy” została potwierdzona przez coraz więcej badań, wykorzystując poziom aktywności telomerazy jako biomarker i wskaźnik prognostyczny w diagnostyce nowotworów. 1. Zwróć uwagę, aby zapobiec zanieczyszczeniu laboratoryjnemu i wynikowi fałszywie dodatniemu lub fałszywie ujemnemu. 2. Zwróć uwagę, aby usunąć inhibitor polimerazy zawarty w próbce tkanki, aby zmniejszyć liczbę fałszywie ujemnych wyników. 3. Technologia analizy scyntylacyjnej, metoda ELISA, metoda hybrydyzacji in situ są bardziej niezawodne niż metoda TRAP. Proces kontroli Sprawdź działanie: Genomowy DNA wynosił 0,1 μg; bufor zawierający 50 mmol / L chlorku potasu, 10 mmol / LTris-HCl (pH 8,4), 1,5 mmol / L chlorku magnezu, 100 μg żelatyny; każdy starter miał 0,25 μmol / L; dATP, dCTP, dGTP Każdy dTIP wynosił 200 μmol / l; polimeraza DNA wynosiła 2,5 U, a końcowa objętość wynosiła 100 μl. Dodaj kilka kropel ciekłej parafiny, aby zapobiec parowaniu. Cykl reakcji: 1 denaturacja: 90 ° C 30 ~ 60 s; 2 temperatura startera i matrycy: 40 ~ 60 ° C 30 ~ 60s; 3 wydłużenie: 72 ° C 1-2 min. Po powtarzanych cyklach 30 do 40 razy ostatnie wydłużanie startera w 7 ° 72 ° C zostało zakończone na 7 minut. Po usunięciu ciekłej parafiny produkt jest dostępny do analizy. Po elektroforezie na żelu agarozowym wybarwiono go bromkiem etydyny i zaobserwowano pasek fluorescencyjny o oczekiwanej długości amplifikacji przez napromieniowanie lampą UV. Produkt można także hybrydyzować z metodą Southern blot lub spot blot z radioznakowaną lub nieroznakowaną radioaktywnie sondą oligonukleotydową. Bardziej wygodne jest użycie automatycznego urządzenia PCR Po dodaniu odczynnika reakcyjnego, matrycy DNA i polimerazy Taq-DNA do probówki poddaje się ją skorygowanej procedurze, tj. Wymaganej temperaturze, czasowi i przedłużeniu odpowiedniej temperatury i czasu oraz liczby cykli. Reakcja jest przeprowadzana w automatycznym urządzeniu, aby uzyskać zadowalający produkt amplifikacji. Nie nadaje się dla tłumu Ci, którzy nie mają odpowiedniego testu, nie powinni być badani. Działania niepożądane i ryzyko 1. Zakażenie: Podczas pobierania krwi należy zwrócić uwagę na aseptyczne działanie, unikać zanieczyszczenia wody i innych części w miejscu pobierania krwi, aby uniknąć miejscowego zakażenia. 2, krwawienie: po podaniu pełnego czasu kompresji, szczególnie koagulopatii, tendencji do krwawień, w celu uniknięcia miejscowego podskórnego sączenia, zasinienia i obrzęku.