Eletroforese de proteínas séricas (SPE)

Biomoléculas como as proteínas carregam uma carga negativa ou positiva em um buffer e se movem em direção a um ânodo ou a um cátodo em um campo elétrico, o que é chamado de eletroforese. Devido a seus diferentes pontos isoelétricos, diferentes tamanhos moleculares, forma e razão carga / massa, diferentes moléculas de proteína têm mobilidade eletroforética diferente, e várias proteínas podem ser separadas em um determinado meio de suporte. As tnicas de electroforese vulgarmente utilizadas incluem electroforese em membrana de acetato de celulose, electroforese em gel de agarose, electroforese em gel de poliacrilamida e imunoelectroforese. Além disso, o mieloma múltiplo frequentemente apresenta bandas de globulina M entre a região da globulina beta e a região da gamaglobulina e a albuminemia dupla apresenta uma dupla banda de albumina. Informação básica Classificação especializada: classificação de verificação de crescimento e desenvolvimento: exame bioquímico Sexo aplicável: se homens e mulheres aplicam jejum: jejum Incluindo itens: β2 microglobulina sérica (β2-MG), α2-macroglobulina sérica, α1-microglobulina sérica Dicas: jejum de 12 horas, exame de sangue venoso, amostras devem ser sangue fresco. Antes do teste, você deve informar o médico sobre os medicamentos que você tomou recentemente e as recentes alterações fisiológicas. Valor normal Eletroforese de membrana de acetato de celulose albumina 0,61 ~ 0,71 (61% ~ 71%), α1 globulina 0,03 ~ 0,04 (3% ~ 4%), α2 globulina 0,06 ~ 0,10 (6% ~ 10%), globulina beta 0,07 a 0,11 (7% a 11%) e gamaglobulina 0,09 a 0,18 (9% a 18%). Significado clínico 1, a redução de albumina é encontrada na hepatite crônica, cirrose, câncer de fígado e assim por diante. 2, α1 globulina (glicoproteína) aumentou no câncer primário de fígado. Ela é reduzida em hepatite grave, cirrose e coma hepático, e está positivamente correlacionada com a albumina. A determinação de α1 globulina na doença hepática tem valor de referência para julgar a gravidade e o prognóstico da hepatite. Em geral, o aumento de α1 globulina indica que a condição é leve, e a diminuição de α1 globulina indica que a condição é mais pesada.Na insuficiência hepática grave, o teor de soro pode ser significativamente reduzido. 3. Não houve alteração significativa na fase inicial da hepatite viral com α2 globulina, e aumentou gradualmente após uma semana.A hepatite subaguda e a necrose hepática aguda e a cirrose descompensada foram reduzidas. 4, globulina beta aumentou no fígado gorduroso, hiperlipidemia, síndrome nefrótica, diabetes com hipercolesterolemia, icterícia obstrutiva, tumores malignos. Na doença hepática colestásica, seu conteúdo é aumentado, paralelamente ao aumento da globulina α2. Reduzida na hepatite aguda e crônica, a cirrose, especialmente a cirrose descompensada e a cirrose necrótica diminuíram significativamente. 5, gamaglobulina aumentou na hepatite crônica, cirrose, fígado e doença da vesícula biliar. A cirrose típica pode ser observada na fusão de bandas β e γ para formar uma ponte β-γ. Alterações na gamaglobulina em pacientes com doença hepática podem refletir a gravidade da doença. À medida que a condição melhora, seu conteúdo pode cair gradualmente para o normal, se continuar a cair em um nível alto, indica que a condição é séria, o prognóstico é ruim e há uma tendência a desenvolver hepatite crônica e cirrose. Além disso, a infecção, a esquistossomose, o mieloma múltiplo, a doença do tecido conjuntivo, etc. também podem ser elevados. Reduzir a incidência de deficiência de gamaglobulina, pacientes com quimioterapia parcial. Além disso, o mieloma múltiplo frequentemente apresenta bandas de globulina M entre a região da globulina beta e a região da gamaglobulina e a albuminemia dupla apresenta uma dupla banda de albumina. Baixos resultados podem ser doenças: resultados elevados de icterícia colestática podem ser doenças: cirrose hepática, câncer primário de fígado, mieloma múltiplo em idosos 1, jejum de 12 horas, teste de sangue venoso, as amostras devem ser sangue fresco. 2. Antes do teste, você deve informar o médico sobre os medicamentos que você tomou recentemente e as mudanças fisiológicas recentes. 3. A elevação fisiológica pode ocorrer nos seguintes casos: (1) O aumento da α1-globulina pode ser observado após 6 meses de gestação. (2) O aumento da α2-globulina pode ser observado em lactentes nascidos de 1 a 6 meses, com aumento moderado de 4 a 6 meses de gestação e aumento significativo de 7 a 9 meses. (3) a elevação da β-globulina é observada no bebê após o nascimento, 4 a 6 meses de gestação. (4) O aumento da γ-globulina é observado após a vacina de imunização de vacinação. Processo de inspeção 1. Adicione o tampão ao tanque de eletroforese e ajuste o tampão nos tanques de ambos os lados para torná-los no mesmo plano. 2. Preparação do filme de acetato de celulose: Pegue um filme de acetato de celulose (2 cm × 8 cm) e desenhe uma linha horizontal com um lápis a 1,5 cm (um lado do lado negativo) da superfície áspera para fazer uma marca pontilhada. Após a numeração e indicação dos eletrodos positivo e negativo, o filme foi imerso na solução tampão de sódio barbiturato-barbital e, após ser suficientemente saturado (usualmente 20 min), o tampão em excesso foi removido por meio de sanduíche do papel filtro limpo. 3. O cabelo de película de acetato de celulose é preso ao suporte do tanque de eletroforese e endireitado. Pipetar 3 ~ 5μl de soro não hemolítico com uma micropipeta e adicionar ao longo da linha horizontal na linha horizontal.A amostra deve ser mantida a uma certa distância da borda do filme para evitar deformação da banda de proteína no padrão de eletroforese.Depois do soro penetra no filme, o filme é invertida. Com o lado da luz voltado para cima, cole-o no suporte do tanque de eletroforese e conecte as duas extremidades do filme ao buffer com papel de filtro de camada dupla ou quatro camadas de gaze e espere um pouco. 4, ligue a energia, preste atenção para os eletrodos positivos e negativos no filme de acetato de celulose, não se conectar errado. Tensão de 90 ~ 150v, corrente de 0,4 ~ 0,6mA / cm (electroforese diferente necessária tensão, corrente pode ser diferente, deve ser flexível), poder de verão 45min, inverno power-on tempo é um pouco mais longo, cerca de 60min, expansão da zona de electroforese cerca de 25 ~ 35mm pode ser. 5, tingimento: Após a energia estar completa, remover o filme e imergir diretamente na solução de corante Lichunhong S ou na solução de corante 10B preto, corar por 5 a 10 minutos (pela zona de albumina), depois enxaguar o restante na solução de enxágüe. Tinja até que o fundo esteja incolor. 6, quantitativo: 1 método colorimétrico: blot o filme lavado, corte a área de proteína tingida no tubo correspondente, adicione 0,6 ml / L de hidróxido de sódio 6 ml no tubo de albumina (calcule a absorbância multiplicada por 2), o resto Adicione 3 ml a cada tubo, agite-o várias vezes e coloque-o num depósito de água a 37 ° C durante 20 minutos para fazer a sua cor lixiviar. Coloração Amino Black 10B A absorbância de cada tubo foi lida a 620 nm usando um espectrofotômetro e, em seguida, o conteúdo de cada tubo foi calculado (controle de tubo em branco simultâneo). Quando o Lichunhong S foi tingido, o lixiviado foi tratado com hidróxido de sódio 0,1 mol / L e a quantidade foi a mesma que acima. Após 10 minutos, adicione 0,6ml de 400ml / L de ácido acético ao tubo de albumina (multiplique a absorbância por 2) e adicione 0,3ml aos outros tubos para neutralizar um pouco do hidróxido de sódio para tornar a cor mais profunda.Se necessário, centrifugue e tome o sobrenadante. A absorbância de cada tubo foi lida a 520 nm por um espectrofotômetro (controle em branco simultâneo), e então os respectivos conteúdos foram calculados. 2 Método de escaneamento do densitômetro: A. Transparente: Aspirar o líquido de lavagem no filme (para evitar que o líquido transparente seja diluído para afetar o resultado transparente), mergulhar o filme no líquido transparente por 2 a 3 minutos, retirá-lo e alisá-lo de maneira contínua. Limpe a peça de vidro sem riscos (não crie bolhas), defina o slide por um tempo, remova o excesso de líquido transparente, coloque-o em um forno a uma temperatura constante de 90 ° C a 100 ° C, asse por 10 a 15 minutos, remova e deixe esfriar À temperatura ambiente, as áreas de proteínas transparentes por este método são distintas, o filme é plano e pode ser diretamente escaneado e permanentemente preservado (transparente com hidrogênio naftaleno ou parafina líquida. O filme lavado deve ser seco e transparente, e o filme transparente não pode ser transparente) Dura por muito tempo e é propenso a rugas). B. Quantificação por Varredura: O filme transparente é colocado em um densitômetro totalmente automático ou outra caixa escura de densitômetro para análise de varredura. Não é adequado para a multidão Não Reações adversas e riscos Não