Atividade da telomerase

Os telômeros são uma estrutura especial no final de um cromossomo em eucariotos e consistem em uma seqüência repetitiva de DNA rica em guanina e suas proteínas associadas. Os telômeros são essenciais para a estabilidade das extremidades dos cromossomos. A manutenção do comprimento dos telômeros requer a presença de atividade da telomerase. As citocinas endógenas desempenham um papel importante na sobrevivência a longo prazo de células imortalizadas e células tumorais. A telomerase é um complexo de RNA e proteína, é uma transcriptase reversa dependente de RNA e pode sintetizar o DNA telomérico no final do cromossomo a partir de seu próprio RNA para compensar o telômero durante a divisão celular. Perda de DNA, manter o comprimento dos telômeros, manter o equilíbrio dinâmico dos cromossomos e tornar as células imortalizadas. Desde o estabelecimento de métodos altamente sensíveis baseados em PCR para detectar a telomerase, a telomerase atraiu uma atenção generalizada. Verificou-se que a telomerase tem uma relação estreita com a proliferação celular, diferenciação e imortalidade, e se tornou um dos pontos críticos da pesquisa básica sobre tumor e envelhecimento. Informação básica Classificação do especialista: Classificação do exame de oncologia: exame imunológico Sexo aplicável: se homens e mulheres aplicam jejum: não jejuar Resultados da análise: Abaixo do normal: Valor normal: Não Acima do normal: Negativo: O valor normal é negativo. Positivo: (1) Pacientes com câncer de fígado têm maior taxa de telomerase positiva (85%). (2) A telomerase é altamente expressa na maioria dos tecidos tumorais malignos, como neuroblastoma (94%), câncer de mama (93%), câncer colorretal (93%), câncer gástrico (85%), câncer de próstata. (84%), câncer de pulmão (80%), etc. A atividade da telomerase está intimamente relacionada ao estágio clínico e ao prognóstico do tumor. (3) Pode haver fraca atividade da telomerase em algumas lesões benignas (como hepatite, cirrose, meningioma benigno, etc.). Dicas: Pode haver fraca atividade da telomerase em algumas lesões benignas (como hepatite, cirrose, meningioma benigno, etc.). Valor normal Negativo Significado clínico 1, pacientes com câncer de fígado têm uma maior taxa de telomerase positivo (85%), atividade da telomerase positivos níveis de AFP são significativamente maiores do que a atividade da telomerase negativo. A atividade da telomerase não foi significativamente associada ao tamanho do tumor, grau histológico e metástase tumoral. A telomerase pode ser um marcador tumoral para o diagnóstico de câncer de fígado. 2. A telomerase é altamente expressa na maioria dos tecidos tumorais malignos, como neuroblastoma (94%), câncer de mama (93%), câncer colorretal (93%), câncer gástrico (85%) e câncer de próstata ( 84%), câncer de pulmão (80%), etc. A atividade da telomerase está intimamente relacionada ao estágio clínico e ao prognóstico do tumor. Portanto, a telomerase é atualmente o marcador tumoral mais específico e universal. 3. Pode haver fraca atividade da telomerase em algumas lesões benignas (como hepatite, cirrose, meningioma benigno, etc.). Os resultados positivos podem ser doenças: neuroblastoma, câncer colorretal, câncer de mama, câncer de estômago, câncer de fígado, câncer de próstata, câncer de cólon, carcinoma de células renais, câncer de tireoide Nos últimos anos, o "telômero, a hipótese da telomerase" foi confirmada por mais e mais pesquisas, utilizando o nível de atividade da telomerase como biomarcador e indicador prognóstico para o diagnóstico de tumores. 1. Preste atenção para evitar contaminação laboratorial e falso positivo ou falso negativo. 2. Preste atenção para remover o inibidor da polimerase contido na amostra de tecido para reduzir falsos negativos. 3. A tecnologia de análise de cintilação, o método ELISA, o método de hibridização in situ são mais confiáveis ​​do que o método TRAP. Processo de inspeção Verifique a operação: O DNA genômico foi 0,1 μg, tampão contendo 50 mmol / L de cloreto de potássio, 10 mmol / LTris-HCl (pH 8,4), 1,5 mmol / L de cloreto de magnésio, 100 μg de gelatina e 0,25 μmol / L, dATP, dCTP, dGTP O dTIP foi de 200 μmol / L cada, a DNA polimerase foi de 2,5 U e o volume final foi de 100 μl. Adicione algumas gotas de parafina líquida para evitar a evaporação. Ciclo de reação: 1 desnaturação: 90 ° C 30 ~ 60 s, 2 primers e temperatura de recozimento modelo: 40 ~ 60 ° C 30 ~ 60s; 3 extensão: 72 ° C 1-2 min. Após ciclos repetidos de 30 a 40 vezes, a última extensão de iniciador de 7 ° 72 ° C foi terminada durante 7 minutos. Após a remoção da parafina líquida, o produto está disponível para análise. Após eletroforese em gel de agarose, foi corado com brometo de etídio, e uma faixa fluorescente de comprimento esperado de amplificação foi observada por irradiação com uma lâmpada UV. O produto tamb� pode ser hibridado para uma transfer�cia Southern ou uma mancha com uma sonda oligonucleot�ica radiomarcada ou n� radiomarcada. É mais conveniente usar o instrumento automático PCR Após adicionar o reagente de reação, molde de DNA e polimerase Taq-DNA ao tubo de ensaio, é colocado no procedimento ajustado, isto é, a temperatura, tempo e extensão da temperatura e tempo respectivos e o número de ciclos. A reação é realizada em um instrumento automático para obter um produto de amplificação satisfatório. Não é adequado para a multidão Aqueles que não têm um teste adequado não devem ser testados. Reações adversas e riscos 1. Infecção: Preste atenção à operação asséptica ao coletar sangue, evite a contaminação da água e de outras partes no local da coleta de sangue para evitar infecção local. 2, sangramento: após o sangue é dado um tempo de compressão total, especialmente coagulopatia, tendência a sangramento, para evitar o subcutâneo local oozing, hematomas e inchaço.