Telomerasaktivitet

Telomerer är en speciell struktur i slutet av en kromosom i eukaryoter och består av en upprepande DNA-sekvens rik på guanin och dess associerade proteiner. Telomerer är avgörande för stabiliteten hos kromosomändar. Underhåll av telomerlängden kräver närvaro av telomerasaktivitet. Endogena cytokiner spelar en viktig roll i den långsiktiga överlevnaden av odödliga celler och tumörceller. Telomeras är ett komplex av RNA och protein. Det är ett specifikt RNA-beroende omvänt transkriptas. Det kan syntetisera telomeriskt DNA i slutet av kromosom från sitt eget RNA för att kompensera för telomer under celldelning. Förlust av DNA, upprätthålla längden på telomerer, upprätthålla den dynamiska balansen i kromosomer och göra celler odödliga. Sedan upprättandet av mycket känsliga PCR-baserade metoder för att upptäcka telomeras har telomeras väckt stor uppmärksamhet. Det har visat sig att telomeras har en nära relation med cellproliferation, differentiering och odödlighet och har blivit en av hotspotsna i grundläggande forskning om tumör och åldrande. Grundläggande information Specialklassificering: Klassificering av onkologiundersökningar: immunundersökning Tillämpligt kön: om män och kvinnor tillämpar fasta: inte fasta Analysresultat: Under normala: Normalt värde: ingen Över normal: negativt: Normalvärdet är negativt. positivt: (1) Levercancerpatienter har en högre telomeras-positiv hastighet (85%). (2) Telomeras uttrycks starkt i de flesta maligna tumörvävnader, såsom neuroblastom (94%), bröstcancer (93%), kolorektal cancer (93%), magcancer (85%), prostatacancer. (84%), lungcancer (80%), etc. Telomerasaktivitet är nära besläktad med tumörens kliniska stadium och prognos. (3) Det kan vara svag telomerasaktivitet i några godartade lesioner (som hepatit, skrump, godartad meningiom, etc.). Tips: Det kan vara svag telomerasaktivitet i några godartade lesioner (som hepatit, skrump, godartad meningiom, etc.). Normalt värde Negativ. Klinisk betydelse 1, levercancerpatienter har en högre telomeras-positiv hastighet (85%), telomerasaktivitetspositiva AFP-nivåer är signifikant högre än telomerasaktivitetsnegativa. Telomerasaktivitet var inte signifikant associerad med tumörstorlek, histologisk kvalitet och tumörmetastas. Telomeras kan vara en tumörmarkör för diagnos av levercancer. 2. Telomeras uttrycks starkt i de flesta maligna tumörvävnader, såsom neuroblastom (94%), bröstcancer (93%), kolorektal cancer (93%), magcancer (85%) och prostatacancer ( 84%), lungcancer (80%), etc. Telomerasaktivitet är nära besläktad med tumörens kliniska stadium och prognos. Därför är telomeras för närvarande den mest specifika och universella tumörmarkören. 3. Det kan vara svag telomerasaktivitet i några godartade lesioner (som hepatit, skrump, godartad meningiom, etc.). Positiva resultat kan vara sjukdomar: neuroblastom, kolorektal cancer, bröstcancer, magcancer, levercancer, prostatacancer, tjocktarmscancer, njurcellscancer, sköldkörtelcancer Under senare år har "telomeren, telomerashypotesen" bekräftats av mer och mer forskning, med användning av telomerasaktivitetsnivå som en biomarkör och prognostisk indikator för tumördiagnos. 1. Var uppmärksam på att förhindra laboratoriekontaminering och falskt positivt eller falskt negativt. 2. Var uppmärksam på att ta bort polymerasinhibitorn i vävnadsprovet för att minska falska negativa effekter. 3. Scintillationsanalyssteknologi, ELISA-metod, hybridiseringsmetod in situ är mer tillförlitliga än TRAP-metoden. Inspektionsprocess Kontrollera funktionen: Genomiskt DNA var 0,1 μg; buffert innehållande 50 mmol / L kaliumklorid, 10 mmol / LTris-HCl (pH 8,4), 1,5 mmol / L magnesiumklorid, 100 μg gelatin; varje primer var 0,25 μmol / L; dATP, dCTP, dGTP DTIP var 200 mikromol / l vardera; DNA-polymeraset var 2,5 U och den slutliga volymen var 100 | il. Tillsätt några droppar flytande paraffin för att förhindra avdunstning. Reaktionscykel: 1 denaturering: 90 ° C 30 ~ 60 s; 2 primer- och mallglödningstemperatur: 40 ~ 60 ° C 30 ~ 60s; 3 förlängning: 72 ° C 1-2 min. Efter upprepade cykler av 30 till 40 gånger avslutades den sista 7 ° 72 ° C-förlängningen i 7 minuter. Efter avlägsnande av det flytande paraffinet är produkten tillgänglig för analys. Efter elektrofores på agarosgel färgades den med etidiumbromid, och en fluorescerande remsa med förväntad amplifieringslängd observerades genom bestrålning med en UV-lampa. Produkten kan också hybridiseras till en Southern blot eller en spot blot med en radiomärkt eller icke-radiomärkt oligonukleotidsond. Det är mer bekvämt att använda det automatiska PCR-instrumentet. Efter tillsats av reaktionsreagens, DNA-mall och Taq-DNA-polymeras i provröret sätts det in i den justerade proceduren, det vill säga den erforderliga temperaturen, tiden och förlängningstiderna krävs. Reaktionen utförs i ett automatiskt instrument för att erhålla en tillfredsställande amplifieringsprodukt. Inte lämplig för publiken De som inte har ett lämpligt test bör inte testas. Biverkningar och risker 1. Infektion: Var uppmärksam på aseptisk operation vid uppsamling av blod, undvik förorening av vatten och andra delar på bloduppsamlingsplatsen för att undvika lokal infektion. 2, blödning: efter att blodet har fått en fullständig komprimeringstid, särskilt koagulopati, blödningstendens, för att undvika lokal subkutan oser, blåmärken och svullnad.