Undersökning av fostervattencellskromatin

Amniocentes kan bestämma fostret kön och indirekt diagnostisera de sexuellt överförda sjukdomarna, såsom medfödda missbildningar, medfödda metaboliska defekter, kromosomavvikelser och sexuellt överförda sjukdomar, och därmed förhindra barn med sådana genetiska sjukdomar. . Amniocentes utförs vanligtvis i andra trimestern (16-21 veckor av dräktigheten). Urinen ska dräneras före operationen, med båda händerna på höfterna och vänd midjan och buken försiktigt. Använd sedan B-ultraljud för att upptäcka positioneringen, välj punkteringspunkten och punktera under strikta aseptiska driftförhållanden. Grundläggande information Specialkategori: Mödrarundersökning Kontrollera kategori: Genetisk testning (DNA) Tillämpligt kön: om kvinnor fastar: fasta Analysresultat: Under normala: Normalt värde: ingen Över normal: negativt: Normalt värde är negativt: X-kromatin:> 0,06 för kvinnligt foster och 0,05 för manligt foster, positivt: Sannolikheten för X-kopplad recessiv recessiv sjukdom bestäms baserat på resultaten. Tips: Amniocentesis utförs vanligtvis i andra trimestern (16-21 veckor med graviditet). Normalt värde X-kromatin> 0,06 för kvinnliga foster, <0,05 för manliga foster. Y-kromatin> 0,05 är ett manligt foster och <0,04 är ett kvinnligt foster. Klinisk betydelse För familjer med familjehistoria med X-kopplade recessiva ärftliga sjukdomar är föräldrafenotypen normal. Om mamman är en bärare av den sjukdom som orsakar genen är sannolikheten för barnets son 50%; dotter är fenotypiskt normal, när hälften Kan vara en transportör. När fadern är en patient är sonen helt normal och dottern är alla bärare, såsom hemofili A, hemofili B, glukos-6-fosfatdehydrogenasbrist, rödgrön blindhet, pseudohypertrof muskeldystrofi, Medfödd gammaglobulinbrist. Positiva resultat kan vara sjukdomar: färgblindhet, försiktighetsåtgärder vid hemofili Amniocentes utförs vanligtvis i andra trimestern (16-21 veckor av dräktigheten). Urinen ska dräneras före operationen, med båda händerna på höfterna och vänd midjan och buken försiktigt. Använd sedan B-ultraljud för att upptäcka positioneringen, välj punkteringspunkten och punktera under strikta aseptiska driftförhållanden. I allmänhet tas cirka 20 ml fostervatten och placeras i ett rent och steriliserat centrifugrör för omedelbar inspektion. Inspektionsprocess (1) Ta 15 till 30 ml fostervatten under 16 till 20 veckor av graviditeten och centrifugera vid 1000 r / ml under 10 minuter. (2) Kassera överskottet av supernatanten, lämna 1 ml fostervatten och utfällda celler och fördela försiktigt i en cellsuspension. (3) Överför till en 25 ml kvadratkultur, tillsätt 3 ml av ett medium med ett pH av 6,5 till 6,8 (innehållande penicillin 100 U / ml, streptomycin 100 μg / ml) och 1 ml kalvserum och inkuberas i en 37 ° C inkubator. (4) Ett stort antal fibroblastliknande eller epitelioida cellkolonier observerades efter 7-10 dagars odling. Det färska mediet kan bytas ut just nu. (5) När cellkolonierna expanderas i bitar och det finns många genomskinliga cirkulära uppdelande celler, kan colchicin tillsättas för att göra den slutliga koncentrationen 0,1-0,3 μg / ml och sedan odlas i en 37 ° C inkubator under 5-6 timmar. (Ovanstående procedurer utförs alla under aseptiska förhållanden). Skördsnormer: 1 med fibroblaster som huvudtyp, cellernas tillväxt, 2 med 10x okular och 20x objektiv observation, de växande cellklonerna täcker 1 eller fler fullständiga synfält; 3 se mer än 10 genomskinliga Runda celler och mer än 10 dubbla runda ljusa uppdelande celler. (6) Om cellerna inte växer kraftigt, tillväxtcykeln inte är enhetlig eller cellerna åldras och skörden inte uppnås kan subkulturen fortsättas i den ursprungliga flaskan. Metod: Under sterila betingelser hälldes först kulturlösningen och några droppar 2,5 g / 1 steril trypsinlösning tillsattes och blandningen skakades och hälldes. Vidare tillsattes 5 till 10 droppar trypsin och skakades försiktigt vid 37 ° C under cirka 5 minuter för att få de vidhäftande cellerna att falla av. 4 ml färskt medium innehållande kalvserum tillsattes och odlingen fick stå vid 37 ° C under 4 till 5 timmar. Ändra försiktigt kulturmediet och fortsätt kulturen. Det kan skördas 3 till 5 dagar efter passagen. (7) Överför odlingslösningen till ett graderat centrifugrör, tillsätt 1 ml ED-TA-trypsinlösning till kolven, placera i en 37 ° C inkubator under 5 minuter och skölj sedan de vidhäftande cellerna med en armbågspipett (2,5 g / kan också användas) L trypsinlösningsmältning). Cellerna som lossades från flaskväggen hälldes i ett centrifugrör, blandades med den ursprungliga odlingsvätskefasen, och odlingsflaskan tvättades med en liten mängd varm fysiologisk saltlösning, och de tvättade cellerna hälldes också i centrifugröret och centrifugerades vid 1000 r / min under 10 minuter. (8) Aspirera supernatanten, tillsätt 3 till 5 ml 0,075 mol / L KCl-hypotonlösning förvärmd vid 37 ° C och ställ in på 37 ° C under 10 till 15 minuter. (9) Prefixering, fixering och beredning är desamma som beredningsmetoden för perifera kromosomprov från blodkroppar. Inte lämplig för publiken 1. Det fanns tecken på abort under graviditeten. 2. När kroppstemperaturen överstiger 37,5 ° C. 3. Tidig peeling av moderkakan, bukinfektion och purulent. Biverkningar och risker (1) Moderskada: punktering nålsticka sårblodkärl orsakade av bukvägg hematom uterus hematom. Ibland kommer amniotisk vätska in i moders blodcirkulation från punkteringshålet och orsakar fostervattenemboli. Blåsan tömdes inte före punkteringen, och urinblåset skadades. (2) Skada på fostret, morkakan och navelsträngen: punkteringsnålen kan skada fostret och kan orsaka blödning, och morkakan och navelsträngen kan också orsaka blödning eller hematom. Därför bör blödningskällan identifieras när man tar hemorragisk fostervatten. Om du misstänker att du kommer från ett foster bör du fortsätta att lyssna på fosterhjärtat. (3) Läckage av fostervatten: postoperativ fostervatten läcker från nålhålen, orsakar för lite fostervatten, påverkar fostrets utveckling och till och med orsakar missfall eller för tidig födsel. (4) abort eller för tidig födsel: förekomsten av abort eller för tidig förlossning är 0,1% -0,2%, inträffar ofta inom en vecka efter operationen, även efter punkteringen, för tidigt bristning av membran leder till för tidig förlossning. (5) intrauterin infektion: det kan finnas mödrarfeber efter operationen. Intrauterin infektion kan orsaka onormal fosterutveckling eller till och med fosterdöd. Därför bör amniocentes vara strikt aseptisk.