hemoglobinelektrofores

Olika isoelektriska punkter för olika hemoglobin har olika positiva och negativa laddningar i en viss pH-buffert, och hemoglobinet rör sig i olika riktningar efter elektrofores. Grundläggande information Specialistklassificering: klassificering av tillväxt och utveckling: blodundersökning Tillämpligt kön: om män och kvinnor tillämpar fasta: fasta Tips: Innan undersökningen är kosten lätt och alkohol är förbjuden. Normalt värde Elektroforesmetoden var HbA 95%, HbA 21,1% till 3,2% och HbA 32% till 3%. Singer-metoden har en HbF <4%. Klinisk betydelse 1, huvudkomponenten är HbS, och ingen HbB, kan ses vid segelcellens hemoglobinsjukdom. 2, HbS, HbF och HbA2 ökade något, medan HbA sällan eller försvann, i kombination med undersökningen kan diagnostiseras som HbS-p-marin anemi, vanligare i Medelhavet. 3, förutom HbS, innehållande 10% -30% HbA och något ökad HbF och HbA2, kan HbS-p-marin anemi också beaktas. 4. HbS står för 20% -30%, HbA står för 65% -75% och innehåller normal HbF och HbA2, som kan diagnostiseras som HbS-a-marin anemi. 5, HbA försvinner, HbC står för 28% -44% av det totala hemoglobinet, kan diagnostiseras som hemoglobinsjukdom, vanligare hos svarta människor, fler målceller kan ses i blod. 6, det finns HbS, HbD visas också, det finns målceller i blodfilmen, kan diagnostiseras som hemoglobin D-sjukdom, vanligare i norra Kina. 7, HbE resulterar i elektrofores, kan diagnostiseras som hemoglobin E-sjukdom, främst finns i Sydostasien, Indien, etc., är Kina vanligare i södra Guangdong. försiktighetsåtgärder Vaxande syrafibremembranelektrofores direkt kolorimetri Reagens: Elektrofores med mikrohemoglobin av cellulosaacetatmembran. operation: (1) Cellulosaacetatmembranet skars i 1/3 (4 cm x 8 cm) i TEB-buffert under 10 minuter eller mer. (2) Ta bort cellulosaacetatfilmen och använd ett filterpapper för att ta bort överskott av vatten. 10 ul 100 g / L upplöst blod absorberades av en Hb-pipett och applicerades likformigt på den nedre kanten av glaspusher och placerades på den matta sidan på ett avstånd av 1,5 till 2,0 cm från filmens ände av filmen. Gör två kopior av varje prov på samma gång. (3) Elektrofores: Bufferten elektroforeseras med en spårmängd av hemoglobin. Spänningen är 180V och tiden är 40min ~ 1h. (Cellerna är tydligt separerade i varje zon.) Efter elektroforesen utbyts elektroderna och bufferten kan användas upprepade gånger. (4) Eluering och kvantifiering HbA, HbA2 och en kontrollzon motsvarande storleken på HbA2 skars separat. Om också onormala Hb-zoner (HbX) skärs ut, placeras de i motsvarande rör. Tillsätt 10 ml TEB-buffert i HbA-röret, tillsätt 2 ml TEB-buffert till varje rör, blötlägg i 30 minuter, skaka hela tiden. Efter att ha varit helt eluerad. Eluatet blandades och 721 spektrofotometer med en våglängd av 413 nm. Emnet är nollat ​​och absorbansen hos varje rör mäts. Inspektionsprocess (1) Elektrofores av spårhemoglobin: 1 Doppfilm: Cellulosaacetatfilmen flyts på ytan av TEB-bufferten, och den kan användas i minst 20 minuter efter att den är jämnt blötläggd och sjunkit. Detta förhindrar att bubblor genereras. 2 Punkt: Ta bort cellulosaacetatfilmen och använd filterpapper för att ta bort överskott av vatten. Hemoglobinlösningen aspirerades i en mikropipett och placerades i ett konkavt spår av en applikator med flera prov. Hemoglobinlösningen togs med en pipett med flera prov och upptäcktes på en matt sida av cellulosacetatfilmen. 1,5 till 2 cm från katodänden, är fläckmängden cirka 3 till 5 ul, och den normala hemoglobinlösningen vid parallellpositionen används som kontroll. 3 Elektrofores: Lägg till en lika stor mängd BB-buffertlösning i buffertanken på båda sidor om mikroelektroforesbehållaren och använd ett tvåskiktsfilterpapper som en saltbrygga på cellulosacetatmembranstödet. Filmen var matt till botten och den negativa elektroden avslutades med en plats och ekvilibrerades i 5 minuter. Slå på strömmen. Spänningen är 180V, den aktuella mängden är cirka 0,2 mA / cm, och elektroforestiden är 20-30 min. Bufferten i tanken kan användas en gång till efter byte av elektroder. 4 Färgning: Den elektroforeserade filmen togs ut i den röda färgningslösningen Ponceau under cirka 10 minuter och sköljdes med 3% ättiksyra flera gånger tills bakgrunden var vit och torkad. 5 Transparent: Cellulosaacetatfilmen dras i en transparent vätska, vidhäftas till en ren glasplatta och bubblorna mellan de två avlägsnas med en glasstav. En liten mängd isättika hälldes i en kromatograficylinder och glasplattan täcktes omvänt på kromatograficylindern (med filmen vänd inåt). Rök med flyktig isättik i 10 till 20 minuter och ta bort filmen när den är transparent. (2) Cellulosaacetatmembranelektroforesfärgning kolorimetrisk metod: 1 Ta bort det 4 cm × 6 cm cellulosaacetatmembranet som blötläggs i TEB-bufferten och släpp överflödigt vatten med filterpapper. På ett avstånd av 1,5 cm från katodänden av den matta ytan, var cirka 5 ul av en 50 g / L Hb-lösning linjärt och enhetligt packad med en hemoglobinpipett. Efter att hemoglobinlösningen trängde in i membranet inverterades membranet på en filterpapperbrygg på elektrofores tankstödplattan. 2 Elektrofores: spänning 180V, tid 30 ~ 40 min, med förbehåll för fullständig separering av Hb-zoner. Elektroden byts ut efter elektrofores, och elektroforesbufferten kan användas flera gånger. 3 Färgning: Filmen är nedsänkt i färgningslösningen. Den måste färgas i 2 timmar på vintern och 25 ~ 30 ° C på sommaren. Den kan endast färgas i cirka 30 minuter. Observera att om färgningen inte är genomskinlig (som tiden är för kort eller hemoglobinlösningen är för koncentrerad), eller spänningen är för hög, är HbA-bandet för koncentrerat och bandet skalas lätt av, vilket påverkar kvantifieringens noggrannhet. Tvätta med bleklösning flera gånger tills bakgrunden sköljs. 4 Kvantifiering: Det sköljda membranet togs ut och varje zon skars och en kontrollzon motsvarande storleken på HbA2 placerades i varje motsvarande provrör. 10 ml av lakvatten sattes till HbA-röret, och de återstående rören nedsänktes i 2 ml, blötades i 20 minuter och skakades från tid till annan. Gör bandet helt eluerat (observera att vid högre temperaturer bör elueringstiden inte vara för lång, annars kommer elueringsblåtten att minska och gradvis bli lila). Eluatet blandades, och absorbansen för varje rör mättes med användning av en 721 spektrofotometer vid en våglängd av 620 nm och nollning med ett ämne. 5 beräkning: samma direkta kolorimetri. Vaxande syrafibremembranelektrofores direkt kolorimetri Reagens: Elektrofores med mikrohemoglobin av cellulosaacetatmembran. operation: (1) Cellulosaacetatmembranet skars i 1/3 (4 cm x 8 cm) i TEB-buffert under 10 minuter eller mer. (2) Ta bort cellulosaacetatfilmen och använd ett filterpapper för att ta bort överskott av vatten. 10 ul 100 g / L upplöst blod absorberades av en Hb-pipett och applicerades likformigt på den nedre kanten av glaspusher och placerades på den matta sidan på ett avstånd av 1,5 till 2,0 cm från filmens ände av filmen. Gör två kopior av varje prov på samma gång. (3) Elektrofores: elektrofores av buffert och mikrohemoglobin. Spänningen är 180V och tiden är 40min ~ 1h. (Cellerna är tydligt separerade i varje zon.) Efter elektroforesen utbyts elektroderna och bufferten kan användas upprepade gånger. (4) Eluering och kvantifiering HbA, HbA2 och en kontrollzon motsvarande storleken på HbA2 skars separat. Om också onormala Hb-zoner (HbX) skärs ut, placeras de i motsvarande rör. Tillsätt 10 ml TEB-buffert i HbA-röret, tillsätt 2 ml TEB-buffert till varje rör, blötlägg i 30 minuter, skaka hela tiden. Efter att ha varit helt eluerad. Eluatet blandades och 721 spektrofotometer med en våglängd av 413 nm. Emnet är nollat ​​och absorbansen hos varje rör mäts. Inte lämplig för publiken Inga tabuer. Biverkningar och risker Risk för infektion: Om du använder en oren nål kan du riskera infektion.