apolipoprotein AⅡ

Apolipoprotein เป็นส่วนของ lipoprotein ในพลาสมาที่มี lipoproteins หลากหลายและ apolipoproteins เฉพาะหลายชนิด มี apolipoproteins มากกว่า 20 ชนิดที่ค้นพบแล้ว ในหมู่พวกเขาส่วนใหญ่มี aPOA1, AII, B-100, B48, CI, CII, CIII, D, E และชอบ ข้อมูลพื้นฐาน การจำแนกผู้เชี่ยวชาญ: การจำแนกการตรวจหัวใจและหลอดเลือด: การตรวจสอบทางชีวเคมี บังคับเพศ: ไม่ว่าจะเป็นผู้ชายและผู้หญิงใช้การอดอาหาร: การอดอาหาร เคล็ดลับ: ในมื้อสุดท้ายก่อนการเจาะเลือดหลีกเลี่ยงอาหารที่มีไขมันสูงและการดื่มการอดอาหาร 12 ชั่วโมงสกัดเลือดดำที่ปลายแขน ค่าปกติ 250 ~ 520 มก. / ลิตร ความสำคัญทางคลินิก ลดลงในโรคหลอดเลือดหัวใจ, เบาหวาน, โรคไต, การขาด ApoA-I ทางพันธุกรรม (โรคแทนเจียร์), ครอบครัวอัลฟาไลโปโปรตีนต่ำ, โรคตา, การขาดสารอาหารอย่างรุนแรง, ตับอักเสบที่ใช้งานและการทำงานของตับ ผลลัพธ์ต่ำอาจเป็นโรค: โรคหลอดเลือดหัวใจ, การพิจารณาโรคเบาหวาน (1) Immunoturbidimetry: 1 เกี่ยวกับ antiserum: วิธีทดสอบความขุ่นมีความต้องการ antiserum สูงกว่าวิธีอื่น วิธี turbidimetric โดยเฉพาะอย่างยิ่ง polyclonal antibody Anti-serum ต้องปลอดจาก anti-serum ต้องให้ความสนใจเป็นอย่างยิ่งกับ apoA-II ที่สกัดจากเซรั่มของมนุษย์เพื่อให้ได้ภูมิคุ้มกันที่บริสุทธิ์ความบริสุทธิ์ของโครมาโตกราฟีและอิเล็กโตรโฟเรซิสบริสุทธิ์ซึ่งเป็นไปไม่ได้ในห้องปฏิบัติการทั่วไป antiserum titer (titer) ไม่ควรน้อยกว่า 16 ในปัจจุบันในน้ำยารีเอเจนต์เชิงพาณิชย์ในประเทศ antiserum apoA-II มี titer ที่ต่ำมากดังนั้นคุณต้องให้ความสนใจเมื่อซื้อชุด หากคุณไม่มีประสบการณ์ในการระบุคุณภาพของ antisera ก่อนซื้อคุณควรขอให้หน่วยที่มีคุณสมบัติเหมาะสมทำการระบุ 2 ตัวอย่างมาตรฐาน (ซีรัม) เจือจาง 200 เท่าสำหรับการใช้งานด้วยตนเอง (ตัวอย่าง 100 μl) และหากมีตัวอย่างที่มีความแม่นยำก็สามารถเจือจางได้ 20 ครั้ง (ใช้ 10 μl) เพื่อปรับให้เข้ากับสภาพของห้องปฏิบัติการที่แตกต่างกัน (เช่นเครื่องมืออัตโนมัติชนิดต่าง ๆ ) สัดส่วนของแอนติเจนและแอนติบอดีควรให้ความสนใจเมื่อทำการปรับเปลี่ยนที่เหมาะสมมันจะต้องสังเกตว่าไม่ควรมีแอนติเจนเกินในระบบปฏิกิริยาและขีด จำกัด บนเชิงเส้น กล่าวอีกนัยหนึ่งปริมาณ antiserum ต้องเพียงพอมิฉะนั้นผลลัพธ์จะต่ำเมื่อ apoA-I สูงในตัวอย่าง ในปัจจุบันชุดยาในประเทศบางชนิดไม่เพียง แต่มีแอนติบอดีต่ำในซีรั่ม แต่ปริมาณของตัวอย่างในการดำเนินการมีขนาดใหญ่เกินไป (เช่น 3 ~ 5μl) แอนติบอดีไม่เพียงพออย่างเห็นได้ชัดและผลการวัดที่ไม่ถูกต้องอย่างหลีกเลี่ยงไม่ได้ 3 เพื่อให้การวัดมีความแม่นยำผลการคำนวณเส้นโค้งการสอบเทียบจะต้องทำในการวัดความขุ่น apoA-II และ B (วิธีจุดสิ้นสุด) ความเข้มข้นบางช่วง (ปริมาณตัวอย่างต่ำ) (X) นั้นเป็นเส้นตรงกับความขุ่น (Y) และการถดถอยเชิงเส้นคำนวณการสกัดกั้นบางอย่างบนแกน Y (ค่า <0.1) ดังนั้นค่าเบี่ยงเบนของผลการคำนวณจึงถูกคำนวณโดยการสอบเทียบจุดเดียว ยิ่งใหญ่ผลลัพธ์ที่วัดได้ไม่สามารถสะท้อนระดับที่สูงได้อย่างแม่นยำ (สูงต่ำไปต่ำสูง) อย่าละเลยความถูกต้องของการวัดเนื่องจากความเรียบง่ายของวิธีการจุดเดียว ไม่ว่าจะใช้เครื่องมืออัตโนมัติประเภทใดคุณต้องลองใช้กราฟการปรับเทียบก่อน หากการทดสอบซ้ำภายใต้เงื่อนไขของเครื่องมือและเงื่อนไขเฉพาะการสกัดกั้นของสายการถดถอยไม่ชัดเจนจากนั้นจึงสามารถใช้วิธีการสอบเทียบจุดเดียว เมื่อปริมาณของตัวอย่างคือ 3 ถึง 5 μlแม้ว่าปริมาณของ antiserum จะเพิ่มขึ้นความเข้มข้นและความขุ่นจะไม่เป็นเส้นตรงและสามารถคำนวณได้หลังจากที่เส้นโค้งถูกแปลงเป็นเส้นตรงเท่านั้น 4 ปัจจัยรบกวนหลักคือความขุ่นของซีรัมเอง (เช่นเซรั่มไขมันสูง) และวิธีการปรับสภาพเช่นอัลตร้าเซนทริกูเวชั่นหรือไลเปสไฮโดรไลซิสนั้นไม่สามารถนำไปใช้ได้จริง ผลของความขุ่นกับสารลดแรงตึงผิวก็มี จำกัด เช่นกันดังนั้นจึงต้องทำหลอดเปล่าในการทดสอบ นอกเหนือจากวิธีการสองจุดที่ใช้ในการวิเคราะห์อัตโนมัติมันเป็นความผิดพลาดที่จะใช้รีเอเจนต์เดี่ยวด้วยตนเองโดยไม่ต้องลบตัวอย่างเปล่า เพื่อที่จะลดผลกระทบของเมทริกซ์ที่มีต่อการตอบสนองต่อความขุ่นต้องใช้เซรั่มที่มีค่าคงที่เป็นเครื่องสอบเทียบ นอกจากนี้จะต้องไม่รวมสิ่งรบกวนเช่นฝุ่นละอองและรอยขีดข่วนที่ขุ่น 5 ชุดทางการค้าบางตัว (รวมถึงผลิตภัณฑ์ที่นำเข้าบางส่วน) ที่มีค่าซีรั่มการสอบเทียบที่ไม่ถูกต้องเป็นแหล่งที่มาของข้อผิดพลาดที่สำคัญ (2) วิธีจรวดอิเล็กโทร: 1 ควรเลือกสัดส่วนการเจือจางของแอนติเจนและปริมาณของ antiserum เพื่อให้จุดสูงสุดของจรวดมีความชัดเจนความลาดชันของเส้นโค้งการสอบเทียบอยู่ในระดับปานกลางและมีความเหมาะสม วิธีการวัด apoA-II และ apoB พร้อมกันและควรปรับปริมาณของ antisera ทั้งสองเพื่อให้ความสูงสูงสุดของทั้งสองนั้นแตกต่างกันและความสูงสูงสุดของ apoB ไม่น้อยกว่า 1 ซม. 2 มีการทดสอบ antiserums ที่แตกต่างกัน (เช่นกระต่ายและแกะ) ในราคาที่เท่ากันและผลลัพธ์จะแตกต่างกัน การทดสอบ apoA-I นั้นเป็นวิธีป้องกันกระต่ายที่ดีกว่า เมื่อใช้เซรั่มกระต่ายรูปร่างสูงสุดจะแหลมและยอดสูงสุดที่ผลิตโดยซีรัมแกะนั้นหนายอดปลายยอดจะกลมและทื่อและบางครั้งก็มีภาพผีปรากฏขึ้นมาก่อนยอดเขา ความชันของกราฟการปรับเทียบสำหรับซีรั่มการสอบเทียบนั้นแตกต่างกัน อย่างไรก็ตามไม่ว่าจะใช้ antiserum ใดก็ตามผลลัพธ์เชิงปริมาณไม่แตกต่างกันมากนัก 3 อิเล็กโตรโฟรีซีสภายใต้เงื่อนไขบางอย่างความสูงสูงสุดของซีรั่มการสอบเทียบของการเจือจางที่แตกต่างกันจะไม่เปลี่ยนแปลงอย่างมีนัยสำคัญและความชันของเส้นโค้งการสอบเทียบนั้นเหมือนกัน หากความสูงสูงสุดของชิ้นงานเกินช่วงโค้งการปรับเทียบควรปรับและทดสอบการเจือจางของชิ้นงานทดสอบอีกครั้ง CV ระหว่างบอร์ดมักจะน้อยกว่า 5% 4 สามารถสังเกตผลของอิเล็กโทรโฟเรซิสได้โดยการย้อมสีหรือการสังเกตด้วยสายตาโดยตรงจากจุดสูงสุดของจรวด อดีตใช้ชิ้นงานทดสอบน้อยกว่าและบันทึก antiserum แต่ถ้าชิ้นงานตัวอย่างและ antiserum เพิ่มขึ้นอย่างเหมาะสมจะสะดวกกว่าที่จะไม่เปื้อน agarose ที่ใช้ควรเป็น electroosmotic มาตรฐานหรือ hypotonic การเพิ่มปริมาณที่เหมาะสมของ dextran หรือ polyethylene glycol ในเจลจะทำให้จรวดมีความชัดเจนมากขึ้น 5 การวัดยอดจรวดสามารถคำนวณพื้นที่หรือความสูงสูงสุดและพื้นที่คือความสูงสูงสุดคูณด้วยความกว้างสูงสุด (ความกว้างที่ความสูงครึ่งหนึ่งของจุดสูงสุด) ความแม่นยำในการวัดยิ่งกว่า 0.1 มม. ต้องใช้อุปกรณ์ขยายสัญญาณเชิงกลหรืออิเล็กทรอนิกส์ ความสูงสูงสุดในช่วงของเส้นโค้งมาตรฐานจะดีกว่า 1 ถึง 4 ซม. 6 วิธีนี้ใช้ได้กับการวิเคราะห์ตัวอย่างจำนวนเล็กน้อย ยังเหมาะสำหรับการคำนวณ apoAII, CI, CII, CIII, D, E และ Lp (a) กระบวนการตรวจสอบ จรวดอิเล็กโทร: 1 แผ่นเท: 10g / L agarose 10ml ต่อแผ่นละลายในอ่างน้ำเดือดผสมให้เข้ากันเพิ่ม50μl apoA-II antiserum และ50μl apoB antiserum เมื่อเย็นถึง 50 ~ 55 ° C (ปริมาณขึ้นอยู่กับ antiserum titer) ) ผสมอย่างรวดเร็วและเทลงบนแผ่นแก้วที่ตั้งไว้ล่วงหน้าบนแพลตฟอร์มน้ำเย็นแล้ววางไว้ที่ 4 ° C หลังจาก 20 นาทีเจาะรูหลุมที่ปลายแคโทดของแผ่นเส้นผ่าศูนย์กลางรู 3 มม. ระยะห่างหลุมอย่างน้อย 5 มม. และความจุของหลุมคือ 5 μl วางแผ่นในถังอิเล็กโทรและสะพานด้วยกระดาษกรอง แอนติเจนที่เจือจาง 2: ซีรัมการสอบเทียบถูกเจือจางเป็น 1: 100, 1: 150, 1: 200, 1: 300, และ 1: 400 (สำหรับเส้นโค้งการปรับเทียบ) ด้วยสารละลาย NaCl 0.15mol / L และตัวอย่างซีรัมเจือจาง 1: 200 วางตู้เย็นที่ 4 ° C เป็นเวลาไม่เกิน 3 วัน 3 กำลังโหลด: ในสถานะปัจจุบันต่ำ (10 mA / แผ่น) เจือจางเซรั่มคงที่และชิ้นงานทดสอบเพื่อดูดซับ 5 μl (ถูกต้อง) และเพิ่มตัวอย่าง agarose gel คณะกรรมการแต่ละคนจะต้องทำชุดของมาตรฐาน 4 พลังงาน: การไหลคงที่ 24mA / คณะแรงดันขั้ว 6 ~ 8V / ซม. ระบายความร้อนด้วยน้ำไหลเพื่อรักษา agarose 15 ° C อิเล็ก 3 ~ 4h โปรตีนโปรตีนต่ำและฟิล์มแห้ง 5 แผ่น: แผ่นอะกาโรสหลังจากอิเลคโตรโฟรีซิสถูกแช่ใน 0.15mol / L NaCl เป็นเวลา 30 นาทีและวางฟิล์มลงบนแผ่นฟิล์มโพลีเอสเตอร์และกาวถูกดูดซึมโดยกระดาษกรองหลายชั้นภายใต้ความดันเบา ๆ ความชื้นจากนั้นให้แห้งกระดาษกรองฟิล์มและฟิล์มโพลีเอสเตอร์เข้าด้วยกันหรือทำให้แห้งด้วยเครื่องเป่าลมร้อนหลังจากการอบแห้งฟิล์มจะแยกออกจากกระดาษกรองและฟิล์มโพลีเอสเตอร์ตามธรรมชาติ 6 การย้อมสี: ภาพยนตร์ agarose แช่ในสารละลายการย้อมเป็นเวลา 20 ถึง 30 นาที 7 การลดสี: แช่ฟิล์มที่ย้อมด้วยสารละลายกำจัดสีจนกว่าจุดสูงสุดของจรวดจะชัดเจนและพื้นหลังจะไม่มีสี มันสามารถจับยึดในสองชิ้นของกระดาษแก้วในน้ำและสามารถเก็บไว้เป็นเวลานานหลังจากการอบแห้ง นอกจากนี้ยังสามารถแช่ในน้ำไหลเพื่อลบพื้นหลัง ไม่เหมาะกับฝูงชน โดยทั่วไปไม่มีฝูงชน ปฏิกิริยาและความเสี่ยงที่ไม่พึงประสงค์ 1. การติดเชื้อ: ให้ความสนใจกับการดำเนินการปลอดเชื้อเมื่อเก็บตัวอย่างเลือดและหยุดเลือดหลังการเก็บเลือดเพื่อหลีกเลี่ยงการปนเปื้อนของน้ำและของเหลวเพื่อหลีกเลี่ยงการติดเชื้อในท้องถิ่น 2 เลือดออก: หลังจากเลือดจะได้รับเวลาการบีบอัดเต็มรูปแบบโดยเฉพาะอย่างยิ่ง coagulopathy มีเลือดออกมีแนวโน้มที่จะหลีกเลี่ยงการฉีดเข้าไปใต้ผิวหนังท้องถิ่นช้ำและบวม