การตรวจโครโมโซมเพาะเลี้ยงเซลล์น้ำคร่ำ

เนื่องจากสารเคมีที่เป็นอันตราย, การสัมผัสเอ็กซ์เรย์, ปัจจัยด้านสิ่งแวดล้อม, การตั้งครรภ์ขั้นสูง, ญาติสนิท, นำไปสู่โรคที่เกิดจากการเปลี่ยนแปลงของจำนวน, สัณฐานวิทยา, โครงสร้างและการรวมกันของโครโมโซมในระหว่างตั้งครรภ์ การตรวจโครโมโซมของเซลล์น้ำคร่ำมีความสำคัญเฉพาะอย่างยิ่งสำหรับการวินิจฉัยก่อนคลอดของโรคโครโมโซม ข้อมูลพื้นฐาน หมวดหมู่ผู้เชี่ยวชาญ: การตรวจสอบการตรวจมารดาหมวดหมู่: การทดสอบทางพันธุกรรม (DNA) บังคับเพศ: ไม่ว่าผู้หญิงจะถือศีลอด: การอดอาหาร ผลการวิเคราะห์: ต่ำกว่าปกติ: ค่าปกติ: ไม่ เหนือปกติ: เชิงลบ: จำนวนโครโมโซมทั้งหมด: 46 Autosome: 22 คู่ (หมายเลข 1-22) โครโมโซมเพศ: XY สำหรับผู้ชายและ XX สำหรับผู้หญิง karyotype ชาย: 46, XY เพศหญิง: 46, XX บวก: ผลลัพธ์ที่แตกต่างจากค่าปกติเป็นค่าบวกแนะนำว่ามีความพิการ แต่กำเนิดหรือโรคประจำตัวอื่น ๆ เคล็ดลับ: การตรวจโครโมโซมควรใช้ตัวอย่างน้ำคร่ำในการตั้งครรภ์ 16-20 สัปดาห์ ค่าปกติ จำนวนโครโมโซมทั้งหมดคือ 46 22 คู่ของรถยนต์ (หมายเลข 1 ถึง 22) โครโมโซมเพศเพศคือ XY และตัวเมียคือ XX karyotype ชาย 46, XY เพศหญิงแคโรไทป์ 46, XX ความสำคัญทางคลินิก จำนวนโครโมโซมผิดปกติเช่นกลุ่มอาการดาวน์ (trisomy 21), trisomy 18, trisomy, trisomy 38, trisomy 21, ดาวน์ซินโดรม hypoplasia อัณฑะ แต่กำเนิด, การสังเคราะห์ XXY เข้าสู่ระบบ, เทอร์เนอร์ซินโดรม, X trisomy ดาวน์ซินโดรมและดาวน์ซินโดรม X โครงสร้างโครโมโซมผิดปกติเช่นซินโดรมโมโนเมอร์ 4p, ซินโดรมโมโนเมอร์บางส่วน, ซินโดรม trisomy บางส่วน 9p, ซินโดรมโมโนเมอร์บางส่วน 9q, ซินโดรมโมโนเมอร์บางส่วน 21q, ซินโดรมโมโนเมอร์ 22q บางส่วน ซินโดรม ฯลฯ ผลลัพธ์ในเชิงบวกอาจเป็นโรค: hypoplasia รังไข่ แต่กำเนิดอัมพาตสมองเด็กดาวน์ซินโดรมเด็กดาวน์อัมพาตสมองเด็กดาวน์ซินโดรมปาสกาลเด็กดาวน์ซินโดรม Diggolger เด็กดาวน์ซินโดรมเด็ก การพิจารณาโรคทางพันธุกรรมที่ไม่สมบูรณ์ 1. การตรวจโครโมโซมควรใช้ตัวอย่างน้ำคร่ำในช่วงตั้งครรภ์ 16-20 สัปดาห์ 2 โรคทางพันธุกรรมพิการ แต่กำเนิดเหล่านี้ได้เพิ่มขึ้นขาดโยกย้ายผกผันและความผิดปกติเชิงปริมาณและโครงสร้างอื่น ๆ มักจะประจักษ์เป็นโรค กรณีส่วนใหญ่เช่นความผิดปกติหลายอย่างการชะลอการเจริญเติบโตและปัญญาอ่อนนำไปสู่การทำแท้งของทารกในครรภ์การคลอดก่อนกำหนดหรือการคลอดก่อนกำหนด กระบวนการตรวจสอบ (1) ใช้น้ำคร่ำ 15 ถึง 30 มล. เป็นเวลา 16 ถึง 20 สัปดาห์ของการตั้งครรภ์และหมุนเหวี่ยงที่ 1000 r / ml เป็นเวลา 10 นาที (2) ทิ้งส่วนเกินส่วนเกินออกไป 1 มิลลิลิตรของน้ำคร่ำและเซลล์ที่ตกตะกอนแล้วค่อย ๆ กระจายลงในการระงับเซลล์ (3) ถ่ายโอนลงในขวดเพาะเลี้ยงขนาด 25 มล. เพิ่มสื่อ 3 มล. ที่มีค่า pH 6.5 ถึง 6.8 (บรรจุเพนิซิลิน 100 U / ml, สเตรปโตมัยซิน 100 ไมโครกรัม / มล.) และซีรั่มลูกวัว 1 มล. (4) พบว่ามีจำนวนเซลล์ที่คล้ายกับไฟโบรบลาสต์หรือเซลล์เยื่อบุผิว epithelioid เป็นจำนวนมากหลังจากผ่านไป 7-10 วัน สื่อสดสามารถแลกเปลี่ยนได้ในเวลานี้ (5) เมื่ออาณานิคมของเซลล์ถูกขยายออกเป็นชิ้น ๆ และมีเซลล์ที่แบ่งเป็นวงกลมโปร่งแสงจำนวนมากสามารถเพิ่มโคลชิซินเพื่อทำให้ความเข้มข้นสุดท้ายอยู่ที่ 0.1-0.3 ไมโครกรัมต่อมิลลิลิตร (ขั้นตอนข้างต้นทั้งหมดดำเนินการภายใต้เงื่อนไขปลอดเชื้อ) มาตรฐานการเก็บเกี่ยว: 1 ที่มีไฟโบรบลาสต์เป็นชนิดหลักการเติบโตของเซลล์ 2 กับ 10 eyepieces และการสังเกตวัตถุประสงค์ 20x โคลนเซลล์ที่กำลังเติบโตครอบคลุม 1 หรือมากกว่ามุมมองที่สมบูรณ์ 3 ดูมากกว่า 10 โปร่งแสง เซลล์รูปกลมและเซลล์ที่มีความสว่างมากกว่า 10 คู่ (6) หากเซลล์ไม่เติบโตอย่างแรงวงจรการเติบโตไม่สม่ำเสมอหรือเซลล์มีอายุและมาตรฐานการเก็บเกี่ยวไม่ถึงวัฒนธรรมย่อยสามารถดำเนินต่อไปในขวดดั้งเดิม วิธีการ: ภายใต้สภาวะที่ปลอดเชื้อ, วิธีการเพาะเชื้อจะถูกรินครั้งแรก, และเติมสารละลายทริปซิน trypsin ที่ปราศจากเชื้อ 2.5 g / L สองสามหยด, และส่วนผสมถูกเขย่าและเทลงไป นอกจากนี้ทริปซินลดลง 5 ถึง 10 หยดและเขย่าเบา ๆ ที่ 37 ° C ประมาณ 5 นาทีเพื่อให้เซลล์สานุศิษย์หลุดร่วง เติมซีรัมลูกวัวสดขนาด 4 มล. และเติมเชื้อในอุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 4 ถึง 5 ชั่วโมง เปลี่ยนสื่อวัฒนธรรมอย่างระมัดระวังและทำการเพาะปลูกต่อไปมันสามารถเก็บเกี่ยวได้ 3 ถึง 5 วันหลังจากเนื้อเรื่อง (7) ถ่ายโอนสารละลายวัฒนธรรมไปยังหลอดหมุนเหวี่ยงที่สำเร็จการศึกษาเพิ่ม ED-TA-trypsin 1 มิลลิลิตรลงในขวดวางในตู้อบ 37 ° C เป็นเวลา 5 นาทีแล้วล้างเซลล์ที่เชื่อมต่อด้วยปิเปตข้อศอก (2.5 กรัม / สามารถใช้งานได้) L trypsin ย่อยสลายสารละลาย) เซลล์ที่แยกออกจากผนังขวดถูกเทลงในหลอดหมุนเหวี่ยงผสมกับเฟสของเหลววัฒนธรรมดั้งเดิมและขวดวัฒนธรรมถูกล้างด้วยน้ำเกลือทางสรีรวิทยาที่อบอุ่นในปริมาณเล็กน้อยและเซลล์ที่ล้างแล้วก็ถูกเทลงในหลอดหมุนเหวี่ยงที่ 1000 r / นาทีเป็นเวลา 10 นาที (8) ดูด supernatant เพิ่ม 3 ถึง 5 มล. ของ 0.075 mol / L KCl แก้ปัญหา hypotonic ก่อนอุ่นที่ 37 ° C และตั้งที่ 37 ° C เป็นเวลา 10 ถึง 15 นาที (9) การตรึงการตรึงและการเตรียมตัวล่วงหน้าเหมือนกับวิธีเตรียมของโครโมโซมตัวอย่างเซลล์เม็ดเลือดส่วนปลาย ไม่เหมาะกับฝูงชน 1. มีสัญญาณของการทำแท้งในระหว่างตั้งครรภ์ 2. เมื่ออุณหภูมิของร่างกายเกิน 37.5 ° C 3. การผลัดเซลล์ต้นรก, การติดเชื้อในช่องท้องและหนอง ปฏิกิริยาและความเสี่ยงที่ไม่พึงประสงค์ (1) การบาดเจ็บของมารดา: เข็มเจาะแทงแผลหลอดเลือดที่เกิดจากผนังหน้าท้องเลือดห้อเลือดมดลูก subserosal บางครั้งน้ำคร่ำจะเข้าสู่การไหลเวียนโลหิตของมารดาจากรูเจาะและทำให้เกิดภาวะเส้นเลือดขอดที่น้ำคร่ำ กระเพาะปัสสาวะไม่ถูกระบายออกก่อนการเจาะและกระเพาะปัสสาวะได้รับบาดเจ็บ (2) การบาดเจ็บของทารกในครรภ์, รกและสายสะดือ: เข็มเจาะสามารถสร้างความเสียหายให้กับทารกในครรภ์และอาจทำให้เกิดเลือดออกและรกและสายสะดืออาจทำให้เกิดเลือดออกหรือห้อเลือด ดังนั้นควรระบุแหล่งที่มาของการมีเลือดออกเมื่อถ่ายน้ำคร่ำในภาวะเลือดออก หากคุณสงสัยว่าคุณมาจากทารกในครรภ์คุณควรฟังหัวใจของทารกในครรภ์ต่อไป (3) การรั่วไหลของน้ำคร่ำ: น้ำคร่ำหลังการรั่วไหลจากรูเข็มทำให้เกิดน้ำคร่ำน้อยเกินไปส่งผลต่อการพัฒนาของทารกในครรภ์และอาจทำให้เกิดการคลอดก่อนกำหนดหรือการคลอดก่อนกำหนด (4) การทำแท้งหรือการคลอดก่อนกำหนด: อุบัติการณ์ของการทำแท้งหรือการคลอดก่อนกำหนดคือ 0.1% -0.2% มักจะเกิดขึ้นภายในหนึ่งสัปดาห์หลังการผ่าตัดแม้หลังจากการเจาะการแตกก่อนวัยอันควรของเยื่อหุ้มนำไปสู่การคลอดก่อนกำหนด (5) การติดเชื้อในมดลูก: อาจมีไข้มารดาหลังการผ่าตัด การติดเชื้อในมดลูกอาจทำให้ทารกในครรภ์มีการพัฒนาที่ผิดปกติหรืออาจทำให้ทารกในครรภ์ตายได้ ดังนั้นการเจาะน้ำคร่ำควรเป็นปลอดเชื้ออย่างเคร่งครัด