การทดสอบความเป็นพิษของลิมโฟไซต์

เมื่อเอฟเฟกต์เฉพาะเซลล์เม็ดเลือดขาว T ถูกติดต่อกับเซลล์เป้าหมายในหลอดทดลองพวกเขาสามารถแสดงคุณสมบัติของการทำลายและ lysing เซลล์เป้าหมายที่เรียกว่าพิษของเซลล์เม็ดเลือดขาว เซลล์เป้าหมายสามารถเป็นเซลล์มะเร็งหรือเซลล์เนื้อเยื่ออื่น ๆ วิธีที่เซลล์เม็ดเลือดขาวฆ่าเซลล์เป้าหมายสามารถทำลายเซลล์เป้าหมายโดยการฆ่าโดยตรงหรือผลิตของเซลล์เม็ดเลือดขาว นี่คือการทดสอบความเป็นพิษของเซลล์เม็ดเลือดขาว เซลล์เม็ดเลือดขาวบางชนิดเช่น CTL, NK, LAK ฯลฯ มีผลโดยตรงต่อการฆ่าเซลล์เป้าหมายและขึ้นอยู่กับลักษณะของเซลล์ที่มีผลต่อการตรวจพบเซลล์เป้าหมายที่สอดคล้องกันเช่นเซลล์มะเร็งเซลล์ผู้ปลูกถ่ายอวัยวะ ฯลฯ สามารถเลือกได้ การทดลองนี้สามารถใช้ในการวิจัยเกี่ยวกับภูมิคุ้มกันของเนื้องอกการปฏิเสธการปลูกถ่ายการติดเชื้อไวรัสและอื่น ๆ วิธีการรวมถึง: วิธีการปล่อยโครเมียม, วิธีการปล่อยแลคเตทดีไฮโดรจีเนส, และการตรวจเซลล์ apoptotic ข้อมูลพื้นฐาน การจำแนกผู้เชี่ยวชาญ: การจำแนกประเภทการตรวจมะเร็ง: การตรวจภูมิคุ้มกัน บังคับเพศ: ไม่ว่าจะเป็นผู้ชายและผู้หญิงใช้การอดอาหาร: การอดอาหาร ผลการวิเคราะห์: ต่ำกว่าปกติ: ค่าปกติ: ไม่ เหนือปกติ: เชิงลบ: ปกติ บวก: ไม่มีข้อมูลที่เกี่ยวข้องในขณะนี้ เคล็ดลับ: รักษาความคิดปกติ ค่าปกติ เปรียบเทียบวิธีการตรวจทางสัณฐานวิทยาระหว่างกลุ่มทดสอบกับกลุ่มควบคุม P <0.05 125I หรือ 51Cr วิธี P> 0.05 ความสำคัญทางคลินิก ผลลัพธ์ที่ผิดปกติ: การทดสอบนี้สามารถใช้เป็นตัวบ่งชี้สำหรับการวัดภูมิคุ้มกันของเซลล์ในผู้ป่วยเนื้องอกในหลอดทดลองนอกจากนี้ยังสามารถกำหนดการพยากรณ์โรคของผู้ป่วยเนื้องอกโดยการวัดความสามารถของเซลล์ภูมิคุ้มกันในการฆ่าเซลล์มะเร็งและยังสามารถระบุประชากรย่อยของเซลล์เม็ดเลือดขาว ประชากรที่จะตรวจ: การทดสอบความเป็นพิษของเซลล์เม็ดเลือดขาวข้ามเรียกอีกอย่างหนึ่งว่าการทดสอบความเป็นพิษต่อเซลล์ขึ้นอยู่กับส่วนประกอบ (CDC) มันคือการตรวจสอบว่ามีผู้บริจาคในผู้รับการปลูกถ่ายอวัยวะหรือแอนติบอดี HLA ของผู้บริจาคกับผู้รับและต้องดำเนินการทดสอบ CDC ก่อนการปลูกถ่ายอวัยวะ ข้อควรระวัง (1) ในการวัดความสามารถของเซลล์เม็ดเลือดขาวเรื่องที่จะโจมตีเซลล์มะเร็งเซลล์เนื้องอกและเซลล์เม็ดเลือดขาวของเรื่องถูกเพิ่มเข้าไปในกลุ่มทดลองและเซลล์เป้าหมายเนื้องอกและสื่อวัฒนธรรมถูกเพิ่มเข้าไปในกลุ่มควบคุม หากตัวอย่างอื่น ๆ เช่นแอนติเจนของเนื้องอกหรืออิมมูโนเจนยารักษาโรค ฯลฯ เกี่ยวข้องกับการสร้างภูมิคุ้มกันของเซลล์ควรเพิ่มกลุ่มที่สามในกลุ่มการทดสอบนี้เซลล์เม็ดเลือดขาวได้รับอนุญาตให้ทำปฏิกิริยากับตัวอย่างที่จะทดสอบก่อนแล้วจึงล้างและสังเกต ผลพิษของเซลล์เม็ดเลือดขาวไวต่อเซลล์เป้าหมายเนื้องอก สองกลุ่มแรกกลายเป็นกลุ่มควบคุมในเวลานี้ (2) อัตราการรอดชีวิตของเซลล์เป้าหมายและเซลล์เม็ดเลือดขาวควรอยู่ในสภาวะที่เหมาะสมโดยทั่วไป> 90% (3) เซรั่มน่องที่เติมลงในสารละลายวัฒนธรรมต้องได้รับการทดสอบความเป็นพิษก่อน (4) จำนวนเซลล์เป้าหมายและเซลล์เม็ดเลือดขาวที่ได้รับการฉีดวัคซีนควรแม่นยำ (5) ควรจัดกลุ่มทดลองและกลุ่มควบคุมในบอร์ดเดียวกันเพื่อลดข้อผิดพลาด (6) ค่าความเป็นกรดด่างของสารละลายที่ใช้ในการเพาะเลี้ยงนั้นควรเป็น 6.8 ถึง 7.2 กระบวนการตรวจสอบ (1) การฉีดวัคซีนของเซลล์เป้าหมาย: เลือกเซลล์มะเร็งที่สามารถเจริญได้อย่างสม่ำเสมอล้างด้วยสารละลายแฮงค์ย่อยด้วยทริปซิน 2.5 กรัมต่อลิตรเป็นเวลา 2 ถึง 3 นาทีเททริปซินสารละลาย (เซลล์ยังติดอยู่กับผนังขวด) และใช้แฮงค์ เซลล์ถูกล้างเบา ๆ 3 ครั้งและสารละลาย Hank ถูกเทลง ล้างเซลล์สานุศิษย์ด้วยสารละลาย RPMI1640 ที่มีเซรั่มน่อง 10% ถึง 20% และเม็ดเซลล์ถูกลบออกโดยการกรองผ่านตัวกรอง 100 ตาข่ายเพื่อเตรียมการระงับเซลล์เนื้องอกเดี่ยว 1 × 10 6 / มล. และระงับเซลล์ถูกปิเปตด้วยหยด วางลงในจานเพาะเชื้อ 40 หลุม 1 หยดต่อหลุม (ประมาณ 100-150 เซลล์) และวางแผ่นในศูนย์บ่มเพาะ CO2 5% ที่ 37 ° C เป็นเวลา 20 ชั่วโมง แผ่นวัฒนธรรมถูกนำออกมาและนำสารละลายทางวัฒนธรรมออกหลังจากการย้อมสีของไรท์จำนวนเซลล์เนื้องอกสานุศิษย์เฉลี่ยต่อ 10 หลุมจะถูกนับถ้าความแตกต่างระหว่างทั้งสองกลุ่มคือ> 1/3 ข้อผิดพลาดนั้นใหญ่เกินไปที่จะใช้ แผ่นวัฒนธรรมสามารถทดสอบอย่างเป็นทางการ (2) การแยกลิมโฟไซต์: ใช้เฮปาริน anticoagulation 3 มล. ของเรื่องแยกลิมโฟไซต์ออกด้วยสารละลายชะละลายซูโครส - ไดอะซีแพมจากนั้นล้างด้วยสารละลายแฮงค์ 3 ครั้งแล้วผสมกับสารละลาย RPMI1640 (2 ~ 3) ) × 105 / ml การระงับเซลล์ (3) การทดสอบความเป็นพิษต่อเซลล์: เซลล์เม็ดเลือดขาวและเซลล์เป้าหมายมีการผสมในอัตราส่วน 200: 1 และ (2 ~ 3) × 104 เซลล์เม็ดเลือดขาว (ในปริมาตร 0.1 มล.) จะถูกเพิ่มในแต่ละหลุมและเพิ่มซีรัมลูกวัวประมาณ 20% สารละลาย RPMI 1640 0.1 มล. ถูกวางไว้ในตู้อบ 37 ° C 5% CO 2 เป็นเวลา 40 ชั่วโมง จานเพาะเชื้อถูกนำออกมาและนำสารละลายออกหลังจากการย้อมสีของไรท์จำนวนเซลล์เป้าหมายที่เหลืออยู่ที่ด้านล่างของแผ่นถูกนับภายใต้กล้องจุลทรรศน์ ไม่เหมาะกับฝูงชน ไม่มีข้อห้าม ปฏิกิริยาและความเสี่ยงที่ไม่พึงประสงค์ ไม่มีภาวะแทรกซ้อนและอันตรายที่เกี่ยวข้อง