การแยกและการระบุแบคทีเรียไร้อากาศ

การแยกและการจำแนกแบคทีเรียแอนแอโรบิกเป็นการทดสอบการแยกและการจำแนกแบคทีเรียที่มีความไวต่อออกซิเจนสูงเนื่องจากจุลินทรีย์ที่ไม่ใช้ออกซิเจนมีการกระจายอย่างกว้างขวางในธรรมชาติและมีความหลากหลายทางสรีรวิทยาจึงได้รับความสนใจมากขึ้น พันธะแบคทีเรียแอนแอโรบิกมีความไวต่อออกซิเจนมากดังนั้นกุญแจสำคัญในการแยกการเพาะเลี้ยงและการนับที่ทำงานได้คือการให้สภาพแวดล้อมในการเพาะเลี้ยงที่ปราศจากออกซิเจนและมีศักยภาพรีดอกซ์ต่ำ ข้อมูลพื้นฐาน การจำแนกผู้เชี่ยวชาญ: การจำแนกประเภทการเจริญเติบโตและการพัฒนา: การตรวจสอบทางชีวเคมี บังคับเพศ: ไม่ว่าจะเป็นผู้ชายและผู้หญิงใช้การอดอาหาร: การอดอาหาร เคล็ดลับ: หากอาณานิคมมีขนาดเล็กเกินไปให้ใช้แว่นขยายเพื่อสังเกตอาณานิคม ค่าปกติ ชนิดและสัดส่วนของพืชในร่างกายเป็นเรื่องปกติและร่างกายมนุษย์อยู่ในสภาวะที่มีความสมดุลและสุขภาพดี ความสำคัญทางคลินิก Hengate anaerobic technology tube technology เทคโนโลยี Hengate anaerobic rolling tube เป็นเทคโนโลยีการเพาะเลี้ยงแบบไม่ใช้ออกซิเจนที่เสนอครั้งแรกโดยนักจุลชีววิทยาชาวอเมริกัน Hengate ในปี 1950 และนำไปใช้กับการวิจัยจุลินทรีย์ในกระเพาะรูเมนแบบไม่ใช้ออกซิเจน ผลลัพธ์ที่ผิดปกติ: โรคพิเศษที่เกิดจาก Clostridium anaerobics เช่นโรคเนื้อตายเน่าก๊าซบาดทะยักโรคโบทูลิซึมเป็นต้น ผู้ที่ต้องได้รับการตรวจ: ผู้ป่วยที่เป็นโรคเบาหวาน, โรคตับอย่างรุนแรง, โรคตับแข็ง, uremia, แผลในริดสีดวงทวาร, แขนขาเน่าเปื่อย, โรคโบทูลิซึมและอาการอื่น ๆ ข้อควรระวัง ในกระบวนการแยกและจำแนกแบคทีเรียแอนนาโรบิคควรสังเกตประเด็นต่อไปนี้: (1) ตัวอย่างแอนนาโรบิคจะต้องถูกแยกออกจากอากาศในระหว่างการรวบรวมและขนส่งและจะต้องเสร็จสิ้นภายใน 30 นาทีโดยหลีกเลี่ยงการปนเปื้อนของพืชปกติ (2) ควรเตรียมสื่อสดใหม่หากเก็บไว้นานเกินไปออกซิเจนละลายบนพื้นผิวหรือเปอร์ออกไซด์อยู่ในสื่อซึ่งไม่เอื้อต่อการเจริญเติบโตของแบคทีเรียที่ไม่ใช้ออกซิเจน (3) หากอาณานิคมมีขนาดเล็กเกินไปควรทำการสำรวจอาณานิคมด้วยแว่นขยาย (4) เพื่อทำการทดสอบความทนทานต่อออกซิเจนจำเป็นต้องเลือก 4 ถึง 5 โคโลนีที่มีลักษณะแตกต่างกันจากแต่ละแผ่นอาหารเลี้ยงเชื้อเชื้อแบคทีเรียแอโรบิกในเลือดและแบบไม่ใช้ออกซิเจนและวางไว้ในสภาพแวดล้อมแบบแอโรบิค (5) ถ้าคุณระบุรหัสเอนไซม์นอกเซลล์คุณต้องมีความเข้มข้นของแบคทีเรียที่เพียงพอ กระบวนการตรวจสอบ แยก (1) หมายเลข ใช้ห้าท่อน้ำที่ผ่านการฆ่าเชื้อและทำเครื่องหมายด้วยเครื่องหมายเพื่อระบุ 10-1, 10-2, ... 10-5 (2) การเจือจาง ในกล่องถุงมือแบบไม่ใช้ออกซิเจนที่สะอาดปราศจากออกซิเจนให้ใช้หลอดฉีดยาที่ผ่านการฆ่าเชื้อเพื่อดึงตัวอย่างของเหลวที่ผสมกันอย่างดี 1 มิลลิลิตรแล้วใส่ลงในหลอดทดลองแบบไม่ใช้ออกซิเจนที่มีน้ำเกลือทางสรีรวิทยาลดลงแล้วผสมให้เข้ากันด้วยออสซิลเลเตอร์ ทำการเจือจาง 10-1 การเจือจาง 1-1 มล. 10-1 ถูกปิเปตลงในหลอดแอนนาโรบิคแยกต่างหากที่มีน้ำเกลือทางสรีรวิทยา 9 มล. โดยใช้เข็มฉีดยาที่ผ่านการฆ่าเชื้อเพื่อทำให้เจือจาง 10-2 ปรับลดตามลำดับ 10 ครั้งถึง 10-6 เพื่อทำให้ตัวอย่างเจือจางแตกต่างกัน จำนวนหลอดมักจะถูกเลือกโดยการเจือจางสามถึง 10-4, 10-5 และ 10-6 (3) การแยกลูกกลิ้ง 1) ท่อกลิ้ง อาหารเลี้ยงเชื้อที่ผ่านการฆ่าเชื้อแล้วละลายในอ่างน้ำเดือดที่อุณหภูมิคงที่ 46-50 ° C และนำไปใช้และเมื่อนำสื่อออกจากขวดมันจะพองตัวด้วย N 2 ในตัวกลาง จากนั้นให้พองด้วย N2 ในหลอดทดลองให้นำอากาศทั้งหมดที่อยู่ในหลอดออกแล้วเพิ่มสื่อลงในหลอดแล้วเสียบตัวอุดทันที เมื่อจุกถูกแทรกลงในหลอดเข็มเงินเฟ้อจะถูกดึงออกในเวลา ปิเปต 0.1 มล. ของการเจือจาง 10-4, 10-5 และ 10-6 แต่ละหลอดลงในหลอดทดลองที่จะใช้แล้ววางให้แบนบนแผ่นพอร์ซเลนที่มีน้ำน้ำแข็งแล้วหมุนอย่างรวดเร็ว วุ้นละลายรูปแบบชั้นแข็งทันทีบนผนังด้านในของหลอดทดลอง 2) การแยกและการทำให้บริสุทธิ์ อาณานิคมที่เกิดขึ้นจะต้องถูกเลือกและตรวจสอบลักษณะทางสัณฐานวิทยาและความบริสุทธิ์ของมัน หากไม่ได้รับวัฒนธรรมบริสุทธิ์ให้เจือจางหลอดอีกครั้งและเลือกลำไส้ใหญ่อีกครั้งจนกว่าจะได้รับวัฒนธรรมบริสุทธิ์ อาณานิคมเดียวที่จะเลือกจะถูกตรวจพบเบื้องต้นภายใต้แว่นขยายและทำเครื่องหมาย จากนั้นจะทำการจับยึดหลอดทดลองขนาดกลางกับที่ยึดที่เหมาะสมและเปิดจุกยางสำหรับการทดสอบและเข็มไนโตรเจนที่เติมด้วยแก๊สจะมีการไหลของอากาศที่เหมาะสมและมีแบคทีเรียที่ถูกฆ่าด้วยเปลวไฟเข้าไปในหลอดอย่างรวดเร็ว ในเวลาเดียวกันหลอดแอนนาโรบิคเหลวอีกหลอดจะถูกนำออกจากปลั๊กยางและเสียบเข้ากับเข็มที่ผ่านการฆ่าเชื้อ สอดเส้นเลือดฝอยข้อศอกที่เตรียมไว้อย่างระมัดระวังลงไปในตัวกลางที่เป็นของแข็งระบุอาณานิคมที่จะถูกเลือกค่อยๆสำลักมันถ่ายโอนไปยังหลอดทดลองเหลวและจุก เพาะเลี้ยงที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 24 ชั่วโมงหรือนานกว่านั้นหรือหลังจากตรวจสอบความขุ่นของสารละลายวัฒนธรรมและตรวจสอบความบริสุทธิ์ของวัฒนธรรมที่แยกได้ 3) การแยกเส้นประ ปลายด้านหนึ่งของหลอดทดลองยางอุดถูกเผาบนเปลวไฟและเข็มดูดก๊าซจะใช้ในการเสียบหัวฉีดก่อนที่เข็มจะถูกถอดออกอย่างรวดเร็วอากาศจะถูกระบายอากาศประมาณ 15-20 วินาทีและปลายด้านหนึ่งของหลอดจะถูกเผาไหม้เป็นระยะเวลาหนึ่ง ขันปลั๊กของท่อให้แน่นและท่อขดลวดจะถูกสร้างและหุ้มฉนวนใช้ CO2: H2 = 80: 20 เนื่องจาก CO2 นั้นหนักกว่าอากาศปลั๊กของท่อจะไม่มีสารตกค้างในอากาศหลังจากเปิด ท่อปลูกสามารถเติบโตได้ที่ 34-37 องศาเพื่อการเจริญเติบโตของอาณานิคม การจำแนกสายพันธุ์ การทดสอบการหมักน้ำตาล 1 ครั้ง การทดลองหมักน้ำตาลเป็นปฏิกิริยาทางชีวเคมีที่ใช้กันมากที่สุดและมีความสำคัญอย่างยิ่งในการจำแนกแบคทีเรียในลำไส้ แบคทีเรียส่วนใหญ่สามารถใช้น้ำตาลเป็นแหล่งคาร์บอนและแหล่งพลังงาน แต่มีความแตกต่างอย่างมากในความสามารถในการย่อยน้ำตาลแบคทีเรียบางชนิดสามารถสลายน้ำตาลและผลิตกรด (เช่นกรดแลคติกกรดอะซิติกกรดโพรพิโอนิก ฯลฯ ) และก๊าซ (เช่น ไฮโดรเจน, มีเธน, คาร์บอนไดออกไซด์, ฯลฯ แบคทีเรียบางตัวผลิตเพียงกรดและไม่ผลิตก๊าซ ยกตัวอย่างเช่น Escherichia coli สามารถย่อยสลายแลคโตสและกลูโคสเพื่อผลิตกรดและผลิตก๊าซได้ Salmonella typhimurium สามารถย่อยสลายกลูโคสเพื่อผลิตกรดและไม่ผลิตก๊าซและไม่สามารถย่อยสลายแลคโตสโปรเตอุสที่ย่อยสลายกลูโคสเพื่อผลิตกรด การผลิตกรดสามารถกำหนดได้โดยใช้ตัวบ่งชี้ Bromocresol purple [pH 5.2 (สีเหลือง) - 6.8 (สีม่วง)] ถูกเพิ่มไว้ล่วงหน้าเมื่อเตรียมสื่อและเมื่อกรดถูกผลิตโดยการหมักอาหารจะเปลี่ยนจากสีม่วงเป็นสีเหลือง การสร้างก๊าซสามารถเห็นได้จากการมีหรือไม่มีฟองอากาศในท่อ Dehan แบบกลับด้านในหลอดหมัก ขั้นตอนการทดลองเฉพาะ: 1 ของเหลวแบคทีเรียถูกทำให้เจือจางอย่างเหมาะสมและจากนั้นในสภาพแวดล้อมที่ปลอดเชื้อสารละลายฉีดเจือจางจำนวนหนึ่งจะถูกฉีดเข้าไปในหลอดบ่งชี้ทางชีวเคมีและปิดผนึกด้วยฟิล์มผนึกที่ผ่านการฆ่าเชื้อแล้ว 2 ใส่หลอดระบุเชื้อลงในถังแอนนาโรบิคและวางไว้ในตู้อบอุณหภูมิคงที่ 37 ° C ด้วยไนโตรเจนที่เพียงพอ สังเกตการเปลี่ยนสีและปริมาณการผลิตก๊าซของแต่ละหลอดหลังจาก 324 ชั่วโมง 2 การทดลองการสลายตัวของโปรตีน 1 ของเหลวแบคทีเรียถูกทำให้เจือจางอย่างเหมาะสมและจากนั้นในสภาพแวดล้อมที่ปลอดเชื้อสารละลายฉีดเจือจางจำนวนหนึ่งจะถูกฉีดเข้าไปในหลอดบ่งชี้ทางชีวเคมีและปิดผนึกด้วยฟิล์มผนึกที่ผ่านการฆ่าเชื้อแล้ว 2 ใส่หลอดระบุเชื้อลงในถังแอนนาโรบิคและวางไว้ในตู้อบอุณหภูมิคงที่ 37 ° C ด้วยไนโตรเจนที่เพียงพอ หลังจาก 324 ชั่วโมงท่อจะถูกทำปฏิกิริยากับมิเรนปฏิกิริยาไฮดราซีนปฏิกิริยาสีเหลืองและปฏิกิริยาน้ำยาบ้วนปากตามลำดับ การทดลองย่อยสลายแป้งด้วย 3 1 ของเหลวแบคทีเรียถูกทำให้เจือจางอย่างเหมาะสมและจากนั้นในสภาพแวดล้อมที่ปลอดเชื้อสารละลายฉีดเจือจางจำนวนหนึ่งจะถูกฉีดเข้าไปในหลอดบ่งชี้ทางชีวเคมีและปิดผนึกด้วยฟิล์มผนึกที่ผ่านการฆ่าเชื้อแล้ว 2 ใส่หลอดระบุเชื้อลงในถังแอนนาโรบิคและวางไว้ในตู้อบอุณหภูมิคงที่ 37 ° C ด้วยไนโตรเจนที่เพียงพอ หลังจาก 324 ชั่วโมงจะเติมไอโอดีนของไอโอดีนในปริมาณที่เหมาะสมลงในหลอดแต่ละหลอดเพื่อสังเกตการย่อยสลายของแป้ง ไม่เหมาะกับฝูงชน ไม่มีข้อมูลที่เกี่ยวข้อง ปฏิกิริยาและความเสี่ยงที่ไม่พึงประสงค์ ไม่พบภาวะแทรกซ้อนและอันตรายที่เกี่ยวข้อง