Bakterien-Endotoxin-Test

Mit dem bakteriellen Endotoxintest soll festgestellt werden, ob das bakterielle Endotoxin im Testgegenstand die Anforderungen erfüllt. Endotoxin ist ein Lipopolysaccharid der Zellwand von gramnegativen Bakterien und seine toxische Komponente ist Lipid A. Die Bakterien starben nach dem Zerfall. Der Test auf bakterielles Endotoxin umfasst zwei Methoden, eine Gelmethode und eine photometrische Methode, wobei die letztere eine turbidimetrische Methode und eine chromogene Substratmethode umfasst. Beim Testen des Tests kann eine der Methoden für den Test verwendet werden. Wenn die Messergebnisse umstritten sind, haben die Ergebnisse der Gelmethode Vorrang, sofern nicht anders angegeben. Grundlegende Informationen Fachkategorie: Inspektionskategorie: Pathogene mikrobiologische Untersuchung Anwendbares Geschlecht: ob Männer und Frauen Fasten anwenden: Fasten Analyseergebnisse: Unter dem normalen Wert: Normalwert: Nein Überdurchschnittlich: Negativ: Das Gel bleibt nicht intakt und ist von der Wand des Röhrchens negativ. Positiv: Positive Aufzeichnungen, die nicht von der Wand rutschten, waren positiv. Tipps: Mit dem bakteriellen Endotoxintest soll festgestellt werden, ob das im Testartikel enthaltene bakterielle Endotoxin den Anforderungen entspricht. Normalwert Die Art und der Anteil der Flora im Körper sind normal und der menschliche Körper befindet sich in einem dynamischen Gleichgewicht. Klinische Bedeutung Das Pyrogen stellt hauptsächlich ein von Bakterien freigesetztes Endotoxin dar. Das Pyrogen gelangt in den Blutkreislauf des Körpers und verursacht eine Reihe von Nebenwirkungen wie Fieber. Daher ist der Pyrogen- oder bakterielle Endotoxintest für die Injektionssicherheit ein wichtiger Qualitätsindex. Ungewöhnliches Ergebnis Wenn eine große Menge der Infusion intravenös verabreicht wird, hat der Patient klinisch Symptome von Schüttelfrost, hohem Fieber, Schwitzen, Ohnmacht und Erbrechen innerhalb von 0,5 bis 1 Stunde aufgrund des Vorhandenseins von Pyrogenen in der Arzneimittellösung.Die Körpertemperatur kann bei hohem Fieber 40 ° C erreichen. Sie können sogar schockieren. Positives Ergebnis kann Krankheit sein: Bacillus licheniformis Enteritis Überlegungen Bei der Festlegung der Testmethode für bakterielles Endotoxin müssen bei der Berechnung des Endotoxingrenzwerts L, der MVD und der MVC wichtige Parameter wie die maximale Personendosis, die Produktspezifikationen, die Empfindlichkeit des Sputumreagenz usw. berücksichtigt werden, da Berechnungsfehler zu allen nachfolgenden Anstrengungen führen. Alles ist fehlgeschlagen. Häufige Probleme sind: 1. Die klinische Dosis wird falsch bestimmt. Es wird nur die konventionelle Dosis verwendet. Die maximal mögliche Dosis und der Verabreichungsweg des menschlichen Körpers werden nicht berücksichtigt. In der Grenzberechnungsformel L = K / M aufgrund der Definition von K-Wert und M-Wert. Unschärfe macht die Zuordnung der K- und M-Werte ungenau, was letztendlich zu einer fehlerhaften Berechnung der Grenzwerte führt. Beispielsweise wird eine Injektion eines klinischen Erwachsenen mit 40 bis 80 mg pro intravenöser Infusion verabreicht, und ein Säugling (drei Monate oder länger) wird mit jeweils 10 bis 20 mg intravenös verabreicht. Die Grenze der Erwachsenendosis (Körpergewicht 60 kg) beträgt 3,75EU / mg, während das Säuglingsgewicht nur etwa 5 kg beträgt, die berechnete Grenze liegt bei etwa 1,25EU / mg, wenn die maximale Dosis pro Kilogramm Körpergewicht nicht berücksichtigt wird, die Grenze für das bakterielle Endotoxin Es wird einen großen Unterschied geben. 2. Der Grenzwert für das bakterielle Endotoxin einiger deklarierter Sorten wird nicht anhand der klinischen Dosierung berechnet, sondern anhand der Dosis derselben Art von Pyrogentest, was zu einem Grenzwertfehler führt. 3. Der Grenzwert für das bakterielle Endotoxin einiger Sorten wurde aus dem ausländischen Arzneibuch kopiert, und die Differenz zwischen der Dosis für die klinische Verwendung des Inlandsmarktes und dem Gewicht der Chinesen und Ausländer wurde nicht berücksichtigt, und der Grenzwert wurde falsch bestimmt. 4. Falsche Berechnung der Tagesdosis (Mehrfachdosis an einem Tag). 5. Wenn sich die Sortenspezifikation (Konzentration) ändert, wird die MVD der Berechnung nicht angepasst. 6. Die zur Festlegung der Methode zu verwendende Höchstdosis hat die in der Klinik verwendete Dosis überschritten. Inspektionsprozess Zunächst die Titerbestimmung Bakterielle Endotoxinstandards werden als Benchmark kalibriert, um die äquivalente Wirksamkeit des Grundgewichts zu bestimmen. Der Titer pro 1 mg Arbeitsstandard sollte nicht weniger als 2 EU, nicht mehr als 50 EU und experimentelle Daten mit Homogenität und Stabilität betragen. Der Titer wird wie folgt bestimmt: Mindestens 4 Proben jeder Charge Arbeitsstandard werden verwendet, und dieselbe Charge Sputumreagenz und derselbe Standard werden verwendet. Jeder Arbeitsstandard wird mit Endotoxintestwasser * entsprechend dem Gewicht und dem Standardprodukt verdünnt. Eine Reihe von zweifachen Verdünnungen der Endotoxinlösung wird hergestellt und mit dem Hydrazin-Reagens umgesetzt. Wenn der Logarithmus des Reaktionsendpunkts der vier Arbeitsstandards erreicht ist Wenn die Standardabweichung (S) des Mittelwerts kleiner als 0,365 ist, werden der geometrische Mittelwert (in ng / mg) der Reaktionsendpunkte der vier Arbeitsstandards und der Reaktionsendpunkt (in EU / mg) des Standards berechnet. Zweitens Testvorbereitung 1. Die in diesem Verfahren verwendeten Utensilien werden behandelt, um eventuell vorhandenes exogenes Endotoxin zu entfernen. Ein 30-minütiges Trockenrösten bei 250 ° C oder ein 2-stündiges Rösten bei 180 ° C können ebenfalls verwendet werden. Andere geeignete Verfahren können ebenfalls verwendet werden. Der Testbetrieb sollte eine mikrobielle Kontamination verhindern. 2. Überprüfen Sie vor dem Test den Sensitivitätskennzeichnungswert des Reagenzes mit der Chargennummer 鲎, der den Anforderungen entsprechen sollte. Die Menge des Hydrazinreagenzlösungsmittels zugeben. Nach dem Auflösen handelt es sich um eine Guanidin-Reagenzlösung, die gebrauchsfertig ist. 3. Verdünnung der Testprobe: Wenn der Empfindlichkeitsmarkierungswert des Reagenzes mit der Chargennummer 鲎 unter der internen Giftgrenze der Testprobe liegt, berechnen Sie ihn nach der folgenden Formel und verdünnen Sie das Reagenz zur Inspektion mit dem Endotoxin-Testwasser *. Verdünnungsfaktor der Testprobe = X / λ X: Endotoxin-Limit (EU / ml) λ: Empfindlichkeitswert des Testmittels für das Testmittel (EU / ml) Drittens überprüfen 4 × 75 mm Reagenzglas (oder 0,1 ml / Satz Original-Sputum-Reagenzampulle) mit 0,1 ml Sputum-Reagenzlösung, von denen 2 mit 0,1 ml für das Reagenzglas und 1 für den 2 & lgr; -Endotoxin-Arbeitsstandard versetzt werden Als Positivkontrollröhrchen wurden 0,1 ml und als Negativkontrollröhrchen 0,1 ml einer Sputumreagenzlösung zugegeben. Nach vorsichtigem Mischen der Teströhrchen wurde das Röhrchen verschlossen und vertikal für 60 ± 2 Minuten in ein Wasserbad von 37 ± 1 ° C gestellt. Seien Sie vorsichtig, wenn Sie das Röhrchen halten und nehmen, um negative Ergebnisse durch Vibrationen zu vermeiden. (4) Beurteilung der Ergebnisse Das Röhrchen wurde vorsichtig aus dem Wasserbad entfernt und um 1800 langsam umgedreht. Das Gel im Röhrchen wurde nicht deformiert. Das positive Gel wurde nicht von der Röhrchenwand abgestreift. (+) Das Gel konnte nicht intakt bleiben und war negativ von der Röhrchenwand. (1). Wenn das Teströhrchen 2 (1) ist, wird davon ausgegangen, dass es den Vorschriften entspricht, und die Pyrogentestmethode (Kaninchenmethode) wird nicht durchgeführt. Wenn beide Röhren (+) sind, sollte davon ausgegangen werden, dass sie nicht den Vorschriften entsprechen. Zum Beispiel ist 1 Röhrchen in 2 Röhrchen (+) und 1 Röhrchen (1). Gemäß der beschriebenen Methode werden 4 Röhrchen erneut getestet. Ein Röhrchen in 4 Röhrchen ist (+), was bedeutet, dass es nicht den Vorschriften entspricht. Sofern im Text nichts anderes bestimmt ist, sind die Prüfgegenstände, die die Anforderungen erfüllen, nach der Pyrogentestmethode (Kaninchenmethode) zu prüfen und nach den Ergebnissen zu beurteilen. Der Grenzwert für das bakterielle Endotoxin im Testgegenstand muss den Bestimmungen des jeweiligen Gegenstands entsprechen. Die positive Kontrolle war (1) oder die negative Kontrolle war (+) und der Test war unwirksam. Anhang: Bakterieller Endotoxintest für steriles Wasser zur Injektion, Wasser zur Injektion, Natriumchlorid-Injektion, 5% und 10% Glukose-Injektion. Nicht für die Menge geeignet Generell keine Tabus. Nebenwirkungen und Risiken Im Allgemeinen kein Schaden.