Serumproteinelektrophorese (SPE)

Biomoleküle wie Proteine ​​tragen eine negative oder positive Ladung in einem Puffer und bewegen sich in einem elektrischen Feld, das als Elektrophorese bezeichnet wird, zu einer Anode oder einer Kathode. Aufgrund ihrer unterschiedlichen isoelektrischen Punkte, unterschiedlichen Molekülgröße, Form und Ladungs-Masse-Verhältnis haben verschiedene Proteinmoleküle unterschiedliche elektrophoretische Beweglichkeit und verschiedene Proteine ​​können in einem bestimmten Trägermedium getrennt werden. Üblicherweise verwendete Elektrophoresetechniken umfassen Celluloseacetatmembranelektrophorese, Agarosegelelektrophorese, Polyacrylamidgelelektrophorese und Immunelektrophorese. Darüber hinaus weist das multiple Myelom häufig M-Globulin-Banden zwischen der Beta-Globulin-Region und der Gamma-Globulin-Region auf, während die Doppelalbuminämie eine Doppelalbumin-Bande aufweist. Grundlegende Informationen Fachklassifizierung: Wachstums- und Entwicklungskontrolle Klassifizierung: Biochemische Untersuchung Anwendbares Geschlecht: ob Männer und Frauen Fasten anwenden: Fasten Einschließlich Artikel: Serum-β2-Mikroglobulin (β2-MG), Serum-α2-Makroglobulin, Serum-α1-Mikroglobulin Tipps: Fasten 12 Stunden, venöse Blutuntersuchung, Proben müssen frisches Blut sein. Vor dem Test sollten Sie den Arzt über die kürzlich eingenommenen Medikamente und die jüngsten physiologischen Veränderungen informieren. Normalwert Celluloseacetatmembranelektrophorese-Albumin 0,61 ~ 0,71 (61% ~ 71%), α1-Globulin 0,03 ~ 0,04 (3% ~ 4%), α2-Globulin 0,06 ~ 0,10 (6% ~ 10%), Beta-Globulin 0,07 bis 0,11 (7 bis 11%) und Gammaglobulin 0,09 bis 0,18 (9 bis 18%). Klinische Bedeutung 1, Albumin-Reduktion wird bei chronischer Hepatitis, Leberzirrhose, Leberkrebs und so weiter gefunden. 2, α1-Globulin (Glykoprotein) erhöhte sich bei primärem Leberkrebs. Es ist bei schwerer Hepatitis, Leberzirrhose und Leberkoma vermindert und korreliert positiv mit Albumin. Die Bestimmung von α1-Globulin bei Lebererkrankungen hat einen Referenzwert für die Beurteilung der Schwere und Prognose von Hepatitis. Im Allgemeinen zeigt der Anstieg von α1-Globulin an, dass der Zustand mild ist, und der Abfall von α1-Globulin zeigt an, dass der Zustand schwerer ist. Bei schwerem Leberversagen kann der Serumgehalt signifikant verringert werden. 3. Es gab keine signifikante Veränderung im Anfangsstadium der & agr; 2-Globulin-Virus-Hepatitis, die nach einer Woche allmählich zunahm. Subakute Hepatitis und akute Lebernekrose und dekompensierte Leberzirrhose waren reduziert. 4, Beta-Globulin erhöht in Fettleber, Hyperlipidämie, nephrotisches Syndrom, Diabetes mit Hypercholesterinämie, obstruktiver Gelbsucht, bösartigen Tumoren. Bei der Cholestase-Lebererkrankung nimmt ihr Gehalt parallel zum Anstieg von α2-Globulin zu. Reduziert bei akuter und chronischer Hepatitis nahmen die Leberzirrhose, insbesondere die dekompensierte Leberzirrhose und die nekrotische Leberzirrhose am signifikantesten ab. 5, Gammaglobulin erhöht bei chronischer Hepatitis, Leberzirrhose, Leber- und Gallenblasenerkrankung. Eine typische Zirrhose kann in der Fusion von β- und γ-Banden gesehen werden, um eine β-γ-Brücke zu bilden. Veränderungen des Gammaglobulins bei Patienten mit Lebererkrankungen können den Schweregrad der Erkrankung widerspiegeln. Wenn sich der Zustand bessert, kann sich sein Gehalt allmählich normalisieren.Wenn er auf einem hohen Niveau weiter absinkt, deutet dies darauf hin, dass der Zustand schwerwiegend ist, die Prognose schlecht ist und die Tendenz besteht, chronische Hepatitis und Leberzirrhose zu entwickeln. Darüber hinaus können auch Infektionen, Bilharziose, Multiples Myelom, Bindegewebserkrankungen usw. erhöht sein. Reduzieren Sie die Inzidenz von Gammaglobulinmangel, partielle Chemotherapie-Patienten. Darüber hinaus weist das multiple Myelom häufig M-Globulin-Banden zwischen der Beta-Globulin-Region und der Gamma-Globulin-Region auf, während die Doppelalbuminämie eine Doppelalbumin-Bande aufweist. Niedrige Ergebnisse können Krankheiten sein: Hohe Ergebnisse von cholestatischem Ikterus können Krankheiten sein: Leberzirrhose, primärer Leberkrebs, multiples Myelom bei älteren Menschen 1, Fasten 12 Stunden, venöse Blutuntersuchung, Proben müssen frisches Blut sein. 2. Vor dem Test sollten Sie den Arzt über die kürzlich eingenommenen Medikamente und die jüngsten physiologischen Veränderungen informieren. 3. Physiologische Erhöhungen können in folgenden Fällen auftreten: (1) Der Anstieg von α1-Globulin ist nach 6 Monaten Schwangerschaft erkennbar. (2) Die Zunahme von α2-Globulin ist bei Säuglingen im Alter von 1 bis 6 Monaten zu beobachten, mit einer moderaten Zunahme von 4 bis 6 Monaten in der Schwangerschaft und einer signifikanten Zunahme von 7 bis 9 Monaten. (3) Eine Erhöhung des β-Globulinspiegels ist bei Säuglingen nach der Geburt im vierten bis sechsten Schwangerschaftsmonat zu beobachten. (4) Der Anstieg von & ggr; -Globulin ist nach dem Impfimmunisierungsimpfstoff zu sehen. Inspektionsprozess 1. Den Puffer in den Elektrophoresetank geben und den Puffer in den Tanks auf beiden Seiten so einstellen, dass sie in der gleichen Ebene liegen. 2. Vorbereitung des Celluloseacetatfilms: Nehmen Sie einen Celluloseacetatfilm (2 cm × 8 cm) und zeichnen Sie mit einem Bleistift eine horizontale Linie bei 1,5 cm (eine Seite der Negativseite) der rauen Oberfläche, um eine gepunktete Markierung zu erhalten. Nach der Nummerierung und Kennzeichnung der positiven und negativen Elektroden wurde der Film in die Barbiturat-Barbital-Natriumpufferlösung getaucht, und nach einer ausreichenden Sättigung (üblicherweise 20 Minuten) wurde der überschüssige Puffer durch Einlegen des sauberen Filterpapiers entfernt. 3. Das Celluloseacetatfilmhaar wird an dem Elektrophoresetankhalter befestigt und begradigt. Pipettieren Sie 3 ~ 5 μl nicht hämolytisches Serum mit einer Mikropipette und geben Sie es entlang der horizontalen Linie in die horizontale Linie. Die Probe sollte in einem bestimmten Abstand vom Rand des Films gehalten werden, um eine Verformung der Proteinbande im Elektrophoresemuster zu vermeiden. Nachdem das Serum in den Film eingedrungen ist, wird der Film umgekehrt. Kleben Sie den Film mit der hellen Seite nach oben flach auf die Halterung des Elektrophoresetanks und verbinden Sie die beiden Enden des Films mit zweilagigem Filterpapier oder vier Lagen Gaze mit dem Puffer. Warten Sie eine Weile. 4, schalten Sie die Energie ein, beachten Sie die positiven und negativen Elektroden auf dem Zelluloseacetatfilm, schließen Sie nicht falsch an. Spannung 90 ~ 150 v, strom 0,4 ~ 0,6 mA / cm (verschiedene elektrophorese erforderlich spannung, strom kann unterschiedlich sein, sollte flexibel sein), sommer power 45 min, winter power-on zeit ist etwas länger, über 60 min, elektrophorese zone expansion über 25 ~ 35mm können sein. 5, Färben: Nach Beendigung der Stromversorgung den Film entfernen und direkt in die Lichunhong S-Farbstofflösung oder die Amino Black 10B-Färbelösung eintauchen, 5 bis 10 Minuten färben (durch die Albumin-Zone), dann den Rest in der Spüllösung abspülen. Färben, bis der Hintergrund farblos ist. 6, quantitativ: 1 kolorimetrische Methode: Den gespülten Film abtupfen, die gefärbte Proteinfläche in das entsprechende Röhrchen schneiden, 0,6 ml / l Natriumhydroxid 6 ml in das Albuminröhrchen geben (Extinktion multipliziert mit 2 berechnen), den Rest 3 ml in jedes Röhrchen geben, mehrmals schütteln und 20 Minuten in einen Wassertank mit 37 ° C legen, damit die Farbe ausblutet. Amino Black 10B-Färbung Die Extinktion jedes Röhrchens wurde bei 620 nm unter Verwendung eines Spektrophotometers abgelesen, und dann wurde der Inhalt jedes Röhrchens berechnet (gleichzeitige Blindröhrchenkontrolle). Wenn das Lichunhong S gefärbt wurde, wurde das Sickerwasser mit 0,1 mol / l Natriumhydroxid behandelt und die Menge war dieselbe wie oben. Nach 10 Minuten 0,6 ml 400 ml / l Essigsäure in das Albuminröhrchen geben (Extinktion mit 2 multiplizieren) und 0,3 ml in die anderen Röhrchen geben, um etwas Natriumhydroxid zu neutralisieren, um die Farbe zu vertiefen. Die Extinktion jedes Röhrchens wurde bei 520 nm mit einem Spektrophotometer (gleichzeitige Blindwertkontrolle) abgelesen, und dann wurden die jeweiligen Gehalte berechnet. 2 Densitometer-Scanmethode: A. Transparent: Die Spülflüssigkeit auf dem Film aufsaugen (um zu verhindern, dass die transparente Flüssigkeit verdünnt wird, um das transparente Ergebnis zu beeinträchtigen), den Film 2 bis 3 Minuten in die transparente Flüssigkeit eintauchen, dann herausnehmen und rollend glätten. Reinigen Sie das kratzfreie Glasstück (keine Blasen bilden), stellen Sie den Objektträger für eine Weile ein, entfernen Sie die überschüssige transparente Flüssigkeit, legen Sie es in einen Ofen mit einer konstanten Temperatur von 90 ° C bis 100 ° C, backen Sie es 10 bis 15 Minuten lang, entfernen Sie es und lassen Sie es abkühlen Bei Raumtemperatur sind die durch diese Methode transparenten Proteinbereiche unterschiedlich, der Film ist flach und kann direkt gescannt und dauerhaft konserviert werden (transparent mit Wasserstoffnaphthalin oder flüssigem Paraffin. Der gespülte Film sollte getrocknet und transparent sein, und der transparente Film kann nicht transparent sein). Es hält lange an und neigt zu Falten. B. Scan-Quantifizierung: Der transparente Film wird zur Scan-Analyse in ein vollautomatisches Densitometer oder eine andere Densitometer-Dunkelkammer gelegt. Nicht für die Menge geeignet Nr Nebenwirkungen und Risiken Nr