Sekretorisches IgE im Sputum

Die Stelle von SIgE ähnelt der von SIgA und wird auch von Plasmazellen in der Lamina propria der Atemwege produziert und in Schleimhäuten und exokrinen Flüssigkeiten verteilt. IgE ist ein Monomer, 8S, 19 × 104 ku, und seine schwere Kette ist länger als die γ-Kette. Eine weitere funktionelle Region (CH4), die an Zellen (wie Mastzellen, Basophile) binden und unter bestimmten Bedingungen die Freisetzung intrazellulärer bioaktiver Substanzen auslösen kann, weshalb IgE der Hauptantikörper ist, der eine Typ-I-Allergie verursacht. . Grundlegende Informationen Facharzteinstufung: Atemwegsuntersuchung Einstufung: Sputumuntersuchung Anwendbares Geschlecht: ob Männer und Frauen Fasten anwenden: Fasten Erinnerung: Wenn die Hauptreagenzienkomponenten unsachgemäß vorbereitet oder gelagert werden, können sie leicht abgebaut und inaktiviert werden. Normalwert 0,1 bis 9 mg / l. Klinische Bedeutung Zunahme: IgE ist ein Monomer, 8S, 19 × 104 ku, und seine schwere Kette ist länger als die γ-Kette. Eine weitere funktionelle Region (CH4), die an Zellen (wie Mastzellen, Basophile) binden und unter bestimmten Bedingungen die Freisetzung intrazellulärer bioaktiver Substanzen auslösen kann, weshalb IgE der Hauptantikörper ist, der eine Typ-I-Allergie verursacht. . Bei Patienten mit Asthma bronchiale und Hypersensitivitätspneumonitis kann der SIGE-Gehalt im Sputum erhöht sein. Hohe Ergebnisse können Krankheiten sein: Asthma bronchiale, allergische Lungenentzündung Die Hauptbestandteile der Reagenzien im ELISA, wie Antigene, Antikörper, Enzymkonjugate, Substrate usw., werden leicht abgebaut und inaktiviert, wenn sie nicht ordnungsgemäß hergestellt oder unsachgemäß gelagert werden. Es gibt viele Schritte im ELISA, und wenn die Operation nicht standardisiert ist, ist es schwierig, genaue Ergebnisse zu erhalten. Um die Wirksamkeit des Tests sicherzustellen, muss daher für jeden Test eine Qualitätskontrolle durchgeführt werden. Die in den ausgezeichneten Kits enthaltenen positiven und negativen Kontrollen können im Allgemeinen als Qualitätskontrolle für den Test verwendet werden.Anhand der Anweisungen kann die Wirksamkeit des Tests anhand der erhaltenen Extinktionswerte beurteilt werden. Am Beispiel des in klinischen Tests am häufigsten verwendeten HBsAg-Tests sollte die negative Kontrolle im Kit HBsAg-negatives Humanserum sein, und die positive Kontrolle sollte den HBsAg-Gehalt anzeigen (z. B. 9 ± 2 ng / ml). Für jede Testcharge sollten drei Negativkontrollen und zwei Positivkontrollen gleichzeitig durchgeführt werden. Der Extinktionswert, der durch den Negativkontrollassay erhalten wird, sollte kleiner als ein bestimmter Wert sein (zum Beispiel 0,100), und der Mittelwert der Extinktion der Positivkontrolle abzüglich der Extinktion der Negativkontrolle sollte größer als ein bestimmter Wert sein (zum Beispiel 0,200). Diese Werte sind spezifische experimentelle Werte für den Kit unter den angegebenen Testbedingungen. Wenn die Testergebnisse den Anforderungen entsprechen, gibt dies sowohl die Wirksamkeit der verwendeten Reagenzien als auch die Richtigkeit des Vorgangs an. Nur in diesem Fall ist der Chargentest wirksam. Einige der im Kit enthaltenen Positiv- und Negativkontrollen erfüllen nicht die Anforderungen für die Qualitätskontrolle oder die Messbedingungen des Labors, wie z. B. das Kolorimeter usw., und der Unterschied in der Beschreibung des Kits macht es erforderlich, die der tatsächlichen Situation entsprechende Qualität zu verwenden. Aus dem Experiment abgeleitete Kontrollen und Qualitätskontrollwerte aus dem Labor. Das Qualitätskontrollserum der Ware ist teuer. Die qualitative Bestimmung von ELISA-Qualitätskontrollprodukten kann im Allgemeinen selbst durchgeführt werden. Der HBsAg-Test wird weiterhin als Beispiel genommen. Negativkontrollen können von HBsAg-negativen Blutspendern mit hochwertigen Reagenzien durchgeführt werden. Die Positivkontrolle kann hergestellt werden, indem eine geeignete Menge HBsAg-positives Serum zu dem Negativkontrollserum gegeben wird und das gemischte Serum mit einem Referenzstandard oder einer quantitativen Kontrolle verglichen wird, um den HBsAg-Gehalt zu bestimmen. Dann wird eine geeignete Verdünnung durchgeführt, um das HBsAg-positive Serum mit der gewünschten Konzentration zu erhalten, und dann wird eine geeignete Menge antibakterieller Konservierungsmittel wie Gentamicin und Salicylsäure zugegeben und dann bei einer niedrigen Temperatur kryokonserviert. Inspektionsprozess ELISA ist eine mehrstufige Testmethode mit mehreren Reaktionen und Reagenzien, die je nach Anforderung sorgfältig durchgeführt werden muss, da sonst keine genauen Ergebnisse erzielt werden. Die zum Nachweis verschiedener Gegenstände verwendeten ELISA-Verfahren unterscheiden sich geringfügig, umfassen jedoch Schritte wie Beladen, Halten, Waschen und Kolorimetrie.Die Betriebspunkte jedes Schritts sind nachstehend beschrieben. 1. Vorbereitung der Reagenzien: Verdünnen oder bereiten Sie die für den Test erforderlichen Reagenzien gemäß den Anweisungen des Kits vor. Im ELISA verwendetes destilliertes oder entionisiertes Wasser, auch zum Waschen, sollte frisch und von hoher Qualität sein. Der in sich geschlossene Puffer sollte mit einem pH-Meter gemessen werden. Die Temperatur des aus dem Kühlschrank entnommenen Testreagenzes sollte nach Erreichen der Raumtemperatur verwendet werden. Bei Tests mit HRP als Marker sind mit Metall kontaminierte Behälter nicht verfügbar. 2. Laden: Bereiten Sie nach Bedarf eine gute ELISA-Platte vor. Serumproben (Enthäutungsflüssigkeit) sollten frisch entnommen oder ordnungsgemäß im Kühlschrank aufbewahrt werden. Stark hämolysierte oder trübe Proben sollten nicht verwendet werden. Proben, die Natriumazid als Konservierungsmittel enthalten, sind für einen einstufigen ELISA zur HRP-Markierung nicht verfügbar. Wenn Sie die Probe hinzufügen, geben Sie die Probe auf den Boden des Lochs, vermeiden Sie es, sie in den oberen Teil der Lochwand zu geben, und achten Sie darauf, dass Sie nicht darauf spritzen. Es dürfen keine Luftblasen entstehen. Die Genauigkeit der bei der quantitativen Bestimmung zugesetzten Probenmenge sollte den quantitativen Anforderungen entsprechen. Bei der qualitativen Messung wird die Genauigkeit der Probenmenge manchmal nicht betont, zum Beispiel wird sie als Tropfen vorgeschrieben. Zu diesem Zeitpunkt sollten Sie den Tropfenzähler mit dem gleichen Durchmesser verwenden und die richtige Ladeposition beibehalten, damit das Volumen jedes Tropfens im Wesentlichen gleich ist. Der Vorgang und die Anforderungen für die Zugabe des Enzymkonjugats und die Zugabe des Substrats sind die gleichen wie für die Zugabe der Probe. 3. Isolierung: Im ELISA finden im Allgemeinen zwei Antigen-Antikörper-Reaktionen statt, dh nach Zugabe der Probe und nach Zugabe der Kombination. Zu diesem Zeitpunkt sollten die Temperatur und die Zeit der Reaktion so genau wie erforderlich sein. Der isolierte Behälter ist vorzugsweise ein Wasserbad, und der Boden der ELISA-Platte sollte in das Wasser gelegt werden, um die Temperatur schnell auszugleichen. Jede ELISA-Platte sollte nicht zusammen gestapelt werden. Um Verdunstung zu vermeiden, sollte die Platte abgedeckt werden. Der Teller kann auch flach in eine nasse Box mit nasser Gaze auf dem Boden gelegt werden. Die Nasszelle sollte auf die angegebene Temperatur vorgewärmt werden, zum Beispiel ist die Isolierung des Inkubators wichtiger. 4, Waschen: Waschen im ELISA-Verfahren ist kein Reaktionsschritt, sondern entschied sich, den Schlüssel zum Erfolg zu schließen. Der Zweck des Waschens besteht darin, die Substanzen in der Reaktionslösung, die an das Festphasenantigen oder -antikörper gebunden sind, und die Störsubstanzen, die während der Reaktion nicht spezifisch an den Festphasenträger adsorbiert werden, wegzuspülen. Die Adsorption von Proteinen durch Kunststoffe wie Polystyrol ist universell, daher sollte eine unspezifische Adsorption während des ELISA-Assays so weit wie möglich vermieden werden, und diese unspezifisch adsorbierte Störsubstanz sollte während des Waschens abgewaschen werden. Die Zugabe von Tween zur Waschflüssigkeit kann den Wascheffekt verbessern. Wenn das Waschen nicht gründlich ist, insbesondere beim letzten Mal, wenn das Enzymkonjugat unspezifisch adsorbiert wird, wird der Blindwert erhöht. Wenn bei der indirekten Methode das unspezifische IgG in der Probe an der festen Phase adsorbiert wird, ohne gewaschen zu werden, interferiert es auch mit dem enzymmarkierten Antikörper. Die ELISA-Platte wird im Allgemeinen nach den folgenden Methoden gewaschen: 1 Absorbieren der Reaktionslösung, 2 Füllen der Platte mit der Waschlösung, 3 Platzieren für 2 Minuten, leichtes Schütteln, 4 Absorbieren oder Gießen der Flüssigkeit in das Loch und Klopfen auf das absorbierende Papier. Die Anzahl der Waschvorgänge beträgt in der Regel das 3- bis 4-fache und manchmal sogar das 5- bis 6-fache. Ein Platten-ELISA-Waschautomat kann ebenfalls verwendet werden, der tatsächliche Gebrauch des Instruments sollte jedoch zuerst überprüft werden. Jede Pipette der Waschmaschine muss auch nahe am Boden des entsprechenden Lochs platziert werden. Um den gleichen Wascheffekt für jedes Loch zu gewährleisten. 5. Farbentwicklung und kolorimetrisch: Die Temperatur und die Zeit der Reaktion nach Zugabe des Substrats bei der quantitativen Bestimmung sollten noch genau den Vorschriften entsprechen. Die Reaktion kann jedoch im Allgemeinen bei Raumtemperatur in einem qualitativen Assay durchgeführt werden. Wenn das Substrat OPD ist, sollte es nicht in der Nähe von Licht platziert werden. Die Reaktionszeit muss nicht streng kontrolliert werden, und manchmal kann die Stopplösung entsprechend der Färbung der positiven Kontrolle und der negativen Kontrolle rechtzeitig zugegeben werden. Um für jede Vertiefung die gleiche Reaktionszeit zu gewährleisten, sollten die Vorgehensweise und die Geschwindigkeit der Zugabe der Stopplösung mit der Zugabe des Substrats übereinstimmen. Qualitative Bestimmung, wie eine negative Reaktion, ist leicht und manchmal können die Ergebnisse visuell beurteilt werden. Der Platten-ELISA verwendet im Allgemeinen einen Enzym-Label-Reader, um die Extinktion bei einer bestimmten Wellenlänge abzulesen. Der automatische Etikettenleser sollte vor der Verwendung auf Kompatibilität mit den Vertiefungen der verwendeten ELISA-Platte und die Wiederholbarkeit der Ergebnisse getestet werden. Bei der kolorimetrischen Messung zuerst den Nullpunkt mit destilliertem Wasser prüfen, die Substratporen (die Poren ohne Reaktion und nur das Substrat zugeben) und die Blindvertiefungen (die Poren, die von der Kochsalzlösung oder PBS anstelle der Probe für den gesamten Prozess gemessen wurden) ablesen, um diese Zeit aufzuzeichnen. Der Reagenzienstatus des Tests. Danach kann mit dem Blindloch der Nullpunkt kalibriert und die Extinktion des Probenlochs, des Standardlochs und des Kontrolllochs abgelesen werden. Wenn der Nullpunkt immer noch durch destilliertes Wasser korrigiert wird, sollte die Extinktion der obigen Löcher von der Extinktion der Blindlöcher in der Berechnung abgezogen werden. Nicht für die Menge geeignet Unangemessene Personen: Im Allgemeinen gibt es keine Personen, die nicht geeignet sind. Nebenwirkungen und Risiken Keine nachteiligen Reaktionen.