Examen de cromosomas en cultivo de células de líquido amniótico

Debido a productos químicos nocivos, exposición a rayos X, factores ambientales, embarazo avanzado, parientes cercanos, etc., que conducen a enfermedades causadas por la variación en el número, la morfología, la estructura y la combinación de cromosomas durante el embarazo. El examen cromosómico de las células de líquido amniótico tiene una gran importancia específica para el diagnóstico prenatal de enfermedades cromosómicas. Información básica Categoría de especialista: Categoría de verificación de examen materno: Pruebas genéticas (ADN) Género aplicable: si las mujeres están en ayunas: en ayunas Resultados de análisis: Debajo de lo normal: Valor normal: No Por encima de lo normal: Negativo: Número total de cromosomas: 46. Autosoma: 22 pares (número 1-22). Cromosomas sexuales: XY para hombres y XX para mujeres. Cariotipo masculino: 46, XY. Cariotipo femenino: 46, XX. Positivo: Los resultados que son diferentes de los valores normales son positivos, lo que sugiere una malformación congénita u otra enfermedad congénita. Consejos: el examen cromosómico debe tomar muestras de líquido amniótico a las 16-20 semanas de gestación. Valor normal El número total de cromosomas es 46. 22 pares de autosomas (numerados del 1 al 22). El cromosoma sexual masculino es XY y la hembra XX. Cariotipo masculino 46, XY. Cariotipo femenino 46, XX. Importancia clínica Número anormal de cromosomas como el síndrome de Down (trisomía 21), trisomía 18, trisomía, trisomía 38, trisomía 21, síndrome de hipoplasia testicular congénita, síntesis XXY Signo, síndrome de Turner, síndrome de trisomía X y síndrome de X cuerpo múltiple. Estructura cromosómica anormal como síndrome de monómero parcial 4p, síndrome de monómero parcial 5p, síndrome de trisomía parcial 9p, síndrome de monómero parcial 9q, síndrome de monómero parcial 21q, síndrome de monómero parcial 22q, trisomía parcial 22q Síndrome, etc. Los resultados positivos pueden ser enfermedades: hipoplasia ovárica congénita, parálisis cerebral pediátrica, síndrome de Down pediátrico, parálisis cerebral pediátrica, síndrome pascal pediátrico, síndrome de Diggolger, síndrome de miau pediátrico, desarrollo testicular congénito pediátrico Consideraciones de enfermedad genética incompletas 1. El examen cromosómico debe tomar muestras de líquido amniótico a las 16-20 semanas de gestación. 2, estas enfermedades genéticas congénitas han aumentado, falta, translocación, inversión y otras anormalidades cuantitativas y estructurales, a menudo manifestadas como un síndrome. La mayoría de los casos, como las malformaciones múltiples, el retraso del crecimiento y el retraso mental, conducen al aborto fetal, parto prematuro o muerte fetal. Proceso de inspección (1) Tomar de 15 a 30 ml de líquido amniótico durante 16 a 20 semanas de embarazo y centrifugar a 1000 r / ml durante 10 minutos. (2) Deseche el exceso de sobrenadante, deje 1 ml de líquido amniótico y células precipitadas, y disperse suavemente en una suspensión celular. (3) Transfiera a un matraz de cultivo cuadrado de 25 ml, agregue 3 ml de un medio que tenga un pH de 6.5 a 6.8 (que contiene penicilina 100 U / ml, estreptomicina 100 μg / ml) y 1 ml de suero de ternera, e incube en una incubadora a 37 ° C. (4) Se observó una gran cantidad de colonias de células epitelioides o fibroblastos después de 7-10 días de cultivo. El medio fresco se puede cambiar en este momento. (5) Cuando las colonias celulares se expanden en pedazos y hay muchas células divisorias circulares translúcidas, se puede agregar colchicina para hacer la concentración final 0.1-0.3 μg / ml, y luego se cultiva en una incubadora a 37 ° C durante 5-6 h. (Todos los procedimientos anteriores se llevan a cabo en condiciones asépticas). Estándares de recolección: 1 con fibroblastos como el tipo principal, el crecimiento de las células; 2 con oculares 10x y observación objetiva 20x, los clones de células en crecimiento cubren 1 o más campos de visión completos; 3 ven más de 10 translúcidos Celdas redondas y más de 10 celdas divisorias brillantes redondas dobles (6) Si las células no están creciendo vigorosamente, el ciclo de crecimiento no es uniforme o las células están envejeciendo, y no se alcanza el estándar de recolección, el subcultivo puede continuar en la botella original. Método: en condiciones estériles, la solución de cultivo se vertió primero, y se añadieron unas gotas de solución de tripsina estéril de 2,5 g / l, y la mezcla se agitó y se vertió. Además, se añadieron 5 a 10 gotas de tripsina, y se agitó suavemente a 37 ° C durante aproximadamente 5 minutos para hacer que las células adherentes se caigan. Se añadieron 4 ml de medio fresco que contenía suero de ternera, y el cultivo se dejó reposar a 37 ° C durante 4 a 5 horas. Cambie cuidadosamente el medio de cultivo y continúe el cultivo, se puede cosechar de 3 a 5 días después del paso. (7) Transfiera la solución de cultivo a un tubo de centrífuga graduado, agregue 1 ml de solución de tripsina ED-TA al matraz, colóquelo en una incubadora a 37 ° C durante 5 minutos y luego enjuague las células adherentes con una pipeta acodada (también se pueden usar 2.5 g /) L digestión en solución de tripsina). Las células separadas de la pared de la botella se vertieron en un tubo de centrífuga, se mezclaron con la fase líquida de cultivo original, y el matraz de cultivo se lavó con una pequeña cantidad de solución salina fisiológica tibia, y las células lavadas también se vertieron en el tubo de centrífuga y se centrifugaron a 1000 r / min durante 10 minutos. (8) Aspire el sobrenadante, añada 3 a 5 ml de solución hipotónica de KCl 0,075 mol / l precalentada a 37 ° C y ajuste a 37 ° C durante 10 a 15 min. (9) La fijación previa, la fijación y la preparación son las mismas que el método de preparación de muestras de cromosomas de células de sangre periférica. No apto para la multitud. 1. Hubo signos de aborto durante el embarazo. 2. Cuando la temperatura corporal supera los 37.5 ° C. 3. Exfoliación precoz de la placenta, infección abdominal y purulenta. Reacciones adversas y riesgos (1) Lesión materna: punción con aguja punzante herida de los vasos sanguíneos causada por hematoma de la pared abdominal hematoma subseroso uterino. Ocasionalmente, el líquido amniótico ingresa a la circulación sanguínea materna desde el orificio de punción y causa embolia del líquido amniótico. La vejiga no se vació antes de la punción, y la vejiga resultó herida. (2) Lesión del feto, la placenta y el cordón umbilical: la aguja de punción puede dañar al feto y puede causar sangrado, y la placenta y el cordón umbilical también pueden causar sangrado o hematoma. Por lo tanto, la fuente de sangrado debe identificarse cuando se toma líquido amniótico hemorrágico. Si sospecha que proviene de un feto, debe continuar escuchando el corazón fetal. (3) Fuga de líquido amniótico: el líquido amniótico postoperatorio se escapa del orificio, causando muy poco líquido amniótico, afectando el desarrollo fetal e incluso causando un aborto espontáneo o un parto prematuro. (4) aborto o parto prematuro: la incidencia de aborto o parto prematuro es 0.1% -0.2%, a menudo ocurre dentro de una semana después de la cirugía, incluso después de la punción, la ruptura prematura de membranas conduce al parto prematuro. (5) infección intrauterina: puede haber fiebre materna después de la cirugía. La infección intrauterina puede causar un desarrollo fetal anormal o incluso la muerte fetal. Por lo tanto, la amniocentesis debe ser estrictamente aséptica.