Actividad de la telomerasa

Los telómeros son una estructura especial al final de un cromosoma en eucariotas y consisten en una secuencia de ADN repetitiva rica en guanina y sus proteínas asociadas. Los telómeros son esenciales para la estabilidad de los extremos cromosómicos. El mantenimiento de la longitud de los telómeros requiere la presencia de actividad de telomerasa. Las citocinas endógenas juegan un papel importante en la supervivencia a largo plazo de las células inmortalizadas y las células tumorales. La telomerasa es un complejo de ARN y proteína. Es una transcriptasa inversa dependiente de ARN específica. Puede sintetizar ADN telomérico al final del cromosoma a partir de su propio ARN para compensar el telómero durante la división celular. Pérdida de ADN, mantener la longitud de los telómeros, mantener el equilibrio dinámico de los cromosomas y hacer que las células se inmortalicen. Desde el establecimiento de métodos basados ​​en PCR altamente sensibles para detectar la telomerasa, la telomerasa ha atraído una atención generalizada. Se ha descubierto que la telomerasa tiene una estrecha relación con la proliferación celular, la diferenciación y la inmortalidad, y se ha convertido en uno de los puntos críticos de la investigación básica sobre tumores y envejecimiento. Información básica Clasificación del especialista: clasificación del examen oncológico: examen inmune Género aplicable: si los hombres y las mujeres aplican en ayunas: no en ayunas Resultados de análisis: Debajo de lo normal: Valor normal: No Por encima de lo normal: Negativo: El valor normal es negativo. Positivo: (1) Los pacientes con cáncer de hígado tienen una tasa de telomerasa positiva más alta (85%). (2) La telomerasa se expresa altamente en la mayoría de los tejidos tumorales malignos, como el neuroblastoma (94%), el cáncer de mama (93%), el cáncer colorrectal (93%), el cáncer gástrico (85%), el cáncer de próstata. (84%), cáncer de pulmón (80%), etc. La actividad de la telomerasa está estrechamente relacionada con el estadio clínico y el pronóstico del tumor. (3) Puede haber actividad débil de la telomerasa en algunas lesiones benignas (como hepatitis, cirrosis, meningioma benigno, etc.). Consejos: puede haber actividad débil de la telomerasa en algunas lesiones benignas (como hepatitis, cirrosis, meningioma benigno, etc.). Valor normal Negativo Importancia clínica 1, los pacientes con cáncer de hígado tienen una tasa de telomerasa positiva más alta (85%), los niveles de AFP positivos en la actividad de la telomerasa son significativamente más altos que la actividad de la telomerasa negativa. La actividad de la telomerasa no se asoció significativamente con el tamaño del tumor, el grado histológico y la metástasis tumoral. La telomerasa puede ser un marcador tumoral para el diagnóstico de cáncer de hígado. 2. La telomerasa se expresa altamente en la mayoría de los tejidos tumorales malignos, como el neuroblastoma (94%), el cáncer de mama (93%), el cáncer colorrectal (93%), el cáncer gástrico (85%) y el cáncer de próstata ( 84%), cáncer de pulmón (80%), etc. La actividad de la telomerasa está estrechamente relacionada con el estadio clínico y el pronóstico del tumor. Por lo tanto, la telomerasa es actualmente el marcador tumoral más específico y universal. 3. Puede haber actividad débil de la telomerasa en algunas lesiones benignas (como hepatitis, cirrosis, meningioma benigno, etc.). Los resultados positivos pueden ser enfermedades: neuroblastoma, cáncer colorrectal, cáncer de mama, cáncer de estómago, cáncer de hígado, cáncer de próstata, cáncer de colon, carcinoma de células renales, cáncer de tiroides En los últimos años, la "hipótesis de los telómeros y la telomerasa" ha sido confirmada por más y más investigaciones, utilizando el nivel de actividad de la telomerasa como un biomarcador e indicador pronóstico para el diagnóstico de tumores. 1. Preste atención para evitar la contaminación del laboratorio y los falsos positivos o falsos negativos. 2. Preste atención para eliminar el inhibidor de polimerasa contenido en la muestra de tejido para reducir los falsos negativos. 3. La tecnología de análisis de centelleo, el método ELISA, el método de hibridación in situ son más confiables que el método TRAP. Proceso de inspección Comprobar operación: El ADN genómico fue de 0.1 μg; tampón que contiene 50 mmol / L de cloruro de potasio, 10 mmol / LTris-HCl (pH 8.4), 1.5 mmol / L de cloruro de magnesio, 100 μg de gelatina; cada cebador fue de 0.25 μmol / L; dATP, dCTP, dGTP El dTIP fue de 200 μmol / L cada uno; la ADN polimerasa fue de 2.5 U, y el volumen final fue de 100 μl. Agregue unas gotas de parafina líquida para evitar la evaporación. Ciclo de reacción: 1 desnaturalización: 90 ° C 30 ~ 60 s; 2 temperatura de recocido de cebador y plantilla: 40 ~ 60 ° C 30 ~ 60s; 3 extensión: 72 ° C 1-2 min. Después de ciclos repetidos de 30 a 40 veces, la última extensión del cebador de 7 ° 72 ° C se terminó durante 7 minutos. Después de la eliminación de la parafina líquida, el producto está disponible para su análisis. Después de la electroforesis en gel de agarosa, se tiñó con bromuro de etidio, y se observó una tira fluorescente de la longitud de amplificación esperada por irradiación con una lámpara UV. El producto también puede hibridarse con una transferencia Southern o una transferencia puntual con una sonda oligonucleotídica radiomarcada o no radiomarcada. Es más conveniente usar el instrumento automático de PCR. Después de agregar el reactivo de reacción, la plantilla de ADN y la polimerasa Taq-ADN al tubo de ensayo, se coloca en el procedimiento ajustado, es decir, la temperatura, el tiempo y la extensión requeridos de la temperatura y el tiempo respectivos y el número de ciclos. La reacción se lleva a cabo en un instrumento automático para obtener un producto de amplificación satisfactorio. No apto para la multitud. Aquellos que no tienen una prueba adecuada no deben hacerse la prueba. Reacciones adversas y riesgos 1. Infección: Preste atención a la operación aséptica al recolectar sangre, evite la contaminación del agua y otras partes en el sitio de recolección de sangre para evitar la infección local. 2, sangrado: después de que la sangre recibe un tiempo de compresión completo, especialmente coagulopatía, tendencia a sangrado, para evitar exudación subcutánea local, hematomas e hinchazón.