test delle endotossine batteriche

Il test dell'endotossina batterica serve a determinare se l'endotossina batterica nell'articolo del test soddisfa i requisiti. L'endotossina è un lipopolisaccaride della parete cellulare dei batteri Gram-negativi e il suo componente tossico è il lipide A. I batteri sono morti dopo la disintegrazione. Il test sull'endotossina batterica prevede due metodi, un metodo gel e un metodo fotometrico, quest'ultimo comprendente un metodo turbidimetrico e un metodo cromogenico del substrato. Durante il test del test, è possibile utilizzare uno qualsiasi dei metodi per il test. Quando i risultati della misurazione sono controversi, se non diversamente specificato, devono prevalere i risultati del metodo gel. Informazioni di base Categoria di specialisti: Categoria di ispezione: Esame microbiologico patogeno Genere applicabile: se uomini e donne applicano il digiuno: il digiuno Risultati dell'analisi: Al di sotto del normale: Valore normale: no Sopra normale: negativo: Il gel non rimane intatto ed è negativo dalla parete del tubo. positivo: I record positivi che non sono scivolati via dal muro sono stati positivi. Suggerimenti: il test dell'endotossina batterica serve a determinare se l'endotossina batterica nell'articolo del test soddisfa i requisiti. Valore normale Il tipo e la proporzione della flora nel corpo sono normali e il corpo umano è in equilibrio dinamico. Significato clinico Il pirogeno è principalmente un'endotossina rilasciata dai batteri, che entra nel sistema di circolazione sanguigna del corpo e provoca una serie di reazioni avverse come la febbre, pertanto il test dell'iniezione di pirogeno o endotossina batterica è un importante indice di qualità per garantire la sicurezza dell'iniezione. Risultato anormale Clinicamente, quando viene somministrata una grande quantità di infusione endovenosa, il paziente presenta sintomi di brividi, febbre alta, sudorazione, svenimento, vomito entro 0,5 a 1 ora a causa della presenza di pirogeni nella soluzione farmacologica.La temperatura corporea può raggiungere i 40 ° C durante la febbre alta. Possono persino scioccare. Il risultato positivo può essere una malattia: considerazioni sull'enterite da bacillus licheniformis Nella determinazione del metodo di test dell'endotossina batterica, nel calcolo del limite di endotossina L, MVD e MVC, è necessario prestare attenzione a parametri importanti come la dose massima umana, le specifiche del prodotto, la sensibilità del reagente espettorato, ecc., Poiché gli errori di calcolo porteranno a tutti gli sforzi successivi. Tutto fallito. I problemi comuni sono: 1. La dose clinica viene determinata in modo errato Viene utilizzata solo la dose convenzionale Non vengono prese in considerazione la dose massima possibile e la via di somministrazione del corpo umano Nella formula di calcolo del limite L = K / M, a causa della definizione del valore K e del valore M. La sfocatura rende imprecisa l'assegnazione dei valori K e M, il che alla fine porta a un calcolo errato dei limiti. Ad esempio, un'iniezione di un adulto clinico viene somministrata da 40 a 80 mg per infusione endovenosa e un bambino (tre mesi o più) viene somministrato per via endovenosa da 10 a 20 mg ogni volta. Il limite della dose per adulti (peso corporeo 60 kg) è 3,75 EU / mg, mentre il peso infantile è solo di circa 5 kg, il limite calcolato è circa 1,25 EU / mg, se non viene considerata la dose massima per chilogrammo di peso corporeo, il limite batterico dell'endotossina Ci sarà una grande differenza. 2. Il limite di endotossina batterica di alcune varietà dichiarate non viene calcolato in base al dosaggio clinico, ma viene calcolato in base alla dose dello stesso tipo di test pirogeno, con conseguente errore limite. 3. Il limite di endotossina batterica di alcune varietà è stato copiato dalla farmacopea estera e la differenza tra la dose di uso clinico del mercato interno e il peso dei cinesi e degli stranieri non è stata considerata e il limite è stato determinato in modo errato. 4. Calcolo falso della dose giornaliera somministrata (dosi multiple in un giorno). 5. Quando la specifica della varietà (concentrazione) cambia, il calcolo MVD non viene modificato. 6. La dose massima da utilizzare per stabilire il metodo ha superato la dose utilizzata nella clinica. Processo di ispezione Innanzitutto, la determinazione del titolo Gli standard di endotossina batterica sono calibrati come parametri di riferimento per determinare la potenza equivalente del peso base. Il titolo per 1 mg di standard di lavoro non deve essere inferiore a 2 UE, non superiore a 50 UE e dati sperimentali con uniformità e stabilità. Il titolo viene determinato come segue: vengono utilizzati almeno 4 campioni di ogni lotto di standard di lavoro e vengono utilizzati lo stesso lotto di reagente per espettorato e lo stesso standard. Ogni standard di lavoro viene diluito con acqua di prova dell'endotossina * in base al peso e al prodotto standard. Una serie di diluizioni doppie di soluzione di endotossina viene preparata e fatta reagire con reagente all'idrazina. Quando il logaritmo del punto finale di reazione dei quattro standard di lavoro Quando la deviazione standard (S) della media è inferiore a 0,365, vengono calcolate la media geometrica (in ng / mg) degli endpoint di reazione dei quattro standard di lavoro e l'endpoint di reazione (in EU / mg) dello standard. Secondo, preparazione del test 1. Gli utensili utilizzati in questo metodo sono trattati per rimuovere eventuali endotossine esogene che possono essere presenti, si può anche usare la tostatura a secco a 250 ° C per 30 minuti o 180 ° C per 2 ore, nonché altri metodi adatti. L'operazione di test dovrebbe prevenire la contaminazione microbica. 2. Controllare il valore dell'etichetta di sensibilità del numero di lotto 鲎 reagente prima della prova, che dovrebbe soddisfare i requisiti. Aggiungere la quantità di solvente reagente all'idrazina. Dopo la dissoluzione, è una soluzione di reagente alla guanidina ed è pronta per l'uso. 3. Diluizione del campione di prova: quando il valore del segno di sensibilità del numero di lotto 鲎 reagente è inferiore al limite di veleno interno del campione di prova, calcolarlo con la formula seguente e utilizzare l'acqua di prova dell'endotossina * per diluire il reagente per l'ispezione. Fattore di diluizione del campione di prova = X / λ X: Limite di endotossine limitato di endotossina (EU / ml) λ: valore di sensibilità dell'agente di prova per l'agente di prova (EU / ml) Terzo, controlla 4 provette da 75 mm (o 0,1 ml / set di fiala originale di reagente per espettorato) contenente 0,1 ml di soluzione di reagente per espettorato, di cui 2 aggiunti con 0,1 ml per la provetta e 1 per lo standard di funzionamento dell'endotossina 2 λ Sono stati usati 0,1 ml come provetta di controllo positivo e 0,1 ml di una soluzione di reagente espettorato sono stati aggiunti come provetta di controllo negativa. Dopo aver miscelato delicatamente le provette, la provetta è stata chiusa e posizionata verticalmente a bagnomaria a 37 ± 1 ° C per 60 ± 2 minuti. Fare attenzione quando si tiene il tubo e si prende il tubo per evitare risultati negativi dovuti alle vibrazioni. (4) Giudizio dei risultati Il tubo fu rimosso delicatamente dal bagnomaria e lentamente invertito a 1800. Il gel nel tubo non era deformato, quello positivo non era scivolato dalla parete del tubo. (+) Il gel non poteva rimanere intatto ed era negativo dalla parete del tubo. (a). Se la provetta 2 è (1), deve essere considerata conforme alle normative e la prova del metodo di prova a pirogeno (metodo del coniglio) non deve essere eseguita. Se entrambe le provette sono (+), devono essere considerate non conformi alle normative. Ad esempio, 1 tubo in 2 tubi è (+) e 1 tubo è (1). Secondo il metodo descritto, vengono provate nuovamente 4 provette, mentre una provetta in 4 provette è (+), il che significa che non è conforme alle normative. Salvo quanto diversamente previsto nel testo, gli articoli di prova che soddisfano i requisiti devono essere testati con il metodo di prova a pirogeni (il metodo del coniglio) e giudicati in base ai risultati. Il limite di endotossina batterica nell'articolo di prova deve essere conforme alle disposizioni dei rispettivi articoli. Il controllo positivo era (1) o il controllo negativo era (+) e il test era inefficace. Allegato: test di endotossina batterica per acqua sterile per preparazioni iniettabili, acqua per preparazioni iniettabili, iniezione di cloruro di sodio, iniezione di glucosio al 5% e 10%. Non adatto alla folla Generalmente nessun tabù. Reazioni e rischi avversi Generalmente nessun danno.