Elettroforesi delle lipoproteine ​​sieriche e delle lipoproteine ​​sieriche

L'elettroforesi delle lipoproteine ​​viene utilizzata principalmente per la classificazione dell'iperlipoproteinemia ed è anche utile comprendere lo stato lipidico del sangue delle malattie coronariche e guidare meglio la diagnosi e il trattamento clinici. Informazioni di base Classificazione specialistica: classificazione dell'esame cardiovascolare: esame biochimico Genere applicabile: se uomini e donne applicano il digiuno: il digiuno Risultati dell'analisi: Al di sotto del normale: Trovato in lipoproteinemia bassa e così via. Valore normale: Lipoproteine ​​a bassissima densità: 0,06-0,3 g / l Lipoproteine ​​a bassa densità: 0-7g / L Lipoproteine ​​ad alta densità (maschio): 0,41-0,63 g / l Zheng ad alta densità? .42-0,68 g / l Sopra normale: Trovato nell'iperlipidemia primaria e così via. negativo: positivo: Suggerimenti: prima dell'esame, la dieta è leggera e l'alcol è vietato. Controlla la pancia vuota al mattino. Valore normale Elettroforesi su membrana in acetato di cellulosa Particelle di cardo mariano 0g / L (0mg / dl); Lipoproteine ​​a bassissima densità 0,06 ~ 0,3 g / L (6 ~ 30 mg / dl); Lipoproteine ​​a bassa densità <7g / L (<700mg / dl); Lipoproteine ​​ad alta densità: Maschio 0,52 ± 0,11 g / L (43 ± 18 mg / dl); Femmina 0,55 ± 0,13 g / L (47 ± 2 mg / dl). Significato clinico 1, aumentato: visto nell'iperlipidemia primaria. 2, inferiore: osservato in lipoproteinemia bassa. Alti risultati possono essere malattie: iperlipidemia, iperlipoproteinemia di tipo II, considerazioni sulle malattie coronariche 1. Campione: la lipoproteina può essere isolata dal siero fresco e non congelato. Il plasma non è adatto all'elettroforesi delle lipoproteine ​​perché apparirà una banda di fibrinogeno. 2. I profili delle lipoproteine ​​con chiari componenti di separazione sono prerequisiti per un'interpretazione accurata. Se queste condizioni sono ben soddisfatte, l'elettroforesi delle lipoproteine ​​e il metodo di riferimento (ultracentrifugazione) possono essere abbastanza coerenti. La precisione di ciascun componente è diversa ed è stimata dal coefficiente di variazione, che generalmente è inferiore al 5%. 3. Occasionalmente, le alfa-lipoproteine ​​scompaiono e / o appare una banda stretta alfa-lipoproteine. Questo perché gli acidi grassi liberi sono presenti. L'accumulo di alfa-lipoproteine ​​fa sì che queste particelle abbiano la stessa carica. All'aumentare della densità della zona α, il risultato è elevato. Rispetto alle tecniche di precipitazione, l'elettroforesi quantitativa delle lipoproteine ​​è costosa. Processo di ispezione Immediatamente dopo la raccolta del sangue venoso, l'operazione di prova: 1. Aggiungere il tampone al serbatoio di elettroforesi e regolare il tampone nei serbatoi su entrambi i lati per renderli sullo stesso piano. 2. Preparazione del film di acetato di cellulosa: prendere un film di acetato di cellulosa (2 cm × 8 cm) e tracciare una linea orizzontale con una matita a 1,5 cm (un lato del lato negativo) della superficie ruvida per lasciare un segno punteggiato. Dopo aver numerato e indicato gli elettrodi positivi e negativi, il film è stato immerso nella soluzione tampone di sodio barbiturico-barbitale e dopo essere stato sufficientemente saturo (di solito 20 minuti), il tampone in eccesso è stato rimosso inserendo la carta da filtro pulita. 3. I peli di pellicola di acetato di cellulosa sono fissati al supporto del serbatoio per elettroforesi e stirati. Pipettare 3 ~ 5μl di siero non emolitico con una micropipetta e aggiungerlo lungo la linea orizzontale sulla linea orizzontale. Il campione deve essere tenuto ad una certa distanza dal bordo del film per evitare la deformazione della banda proteica nel modello di elettroforesi. Dopo che il siero penetra nel film, il film viene invertito. Con il lato chiaro rivolto verso l'alto, appiattilo sulla staffa del serbatoio dell'elettroforesi e collega le due estremità del film al tampone con carta da filtro a doppio strato o quattro strati di garza e attendi qualche istante. 4, accendere l'alimentazione, prestare attenzione agli elettrodi positivi e negativi sul film di acetato di cellulosa, non collegare in modo errato. Tensione 90 ~ 150 V, corrente 0,4 ~ 0,6 mA / cm (diversa tensione richiesta per elettroforesi, la corrente può essere diversa, dovrebbe essere flessibile), potenza estiva 45 minuti, tempo di accensione invernale leggermente più lungo, circa 60 minuti, espansione della zona di elettroforesi circa 25 ~ 35mm può essere. 5, colorazione: dopo aver completato l'alimentazione, rimuovere il film e immergere direttamente nella soluzione di colorante Lichunhong S o nella soluzione di colorazione 10B di aminoacidi, colorare per 5-10 minuti (dalla zona dell'albumina), quindi sciacquare il resto nella soluzione di risciacquo. Tingi fino a quando lo sfondo è incolore. 6, quantitativo: 1 metodo colorimetrico: asciugare il film risciacquato, tagliare l'area della proteina tinta nella provetta corrispondente, aggiungere 0,6 ml / L di idrossido di sodio 6 ml nella provetta di albumina (calcolare l'assorbanza moltiplicata per 2), il resto Aggiungi 3 ml a ogni provetta, agitalo più volte e posizionalo in un serbatoio d'acqua a 37 ° C per 20 minuti per rendere lisciante il colore. Colorazione Amino Black 10B L'assorbanza di ciascuna provetta è stata letta a 620 nm usando uno spettrofotometro, quindi sono stati calcolati i contenuti di ciascuna provetta (controllo simultaneo delle provette vuote). Quando il Lichunhong S è stato tinto, il percolato è stato trattato con 0,1 mol / L di idrossido di sodio e la quantità era la stessa di cui sopra. Dopo 10 minuti, aggiungere 0,6 ml di acido acetico 400 ml / L alla provetta di albumina (moltiplicare l'assorbanza per 2) e aggiungere 0,3 ml alle altre provette per neutralizzare parte dell'idrossido di sodio per rendere il colore più profondo. Se necessario, centrifugare e prendere il surnatante. L'assorbanza di ciascuna provetta è stata letta a 520 nm da uno spettrofotometro (controllo in bianco simultaneo), quindi sono stati calcolati i rispettivi contenuti. 2 Metodo di scansione del densitometro: A. Trasparente: aspirare il liquido di risciacquo sul film (per evitare che il liquido trasparente venga diluito per influire sul risultato trasparente), immergere il film nel liquido trasparente per 2-3 minuti, quindi estrarlo e appiattirlo in modo rotolante. Vetrini di vetro puliti e senza graffi (non creare bolle), erigere i vetrini per un po ', rimuovere il liquido trasparente in eccesso, mettere in un forno a una temperatura costante di 90-100 ° C, cuocere per 10-15 minuti, rimuovere e raffreddare a temperatura ambiente. Le aree proteiche trasparenti con questo metodo sono distinte, il film è piatto e può essere scansionato direttamente e permanentemente conservato (trasparente con idrogeno naftalene o paraffina liquida. Il film risciacquato deve essere essiccato e trasparente e il film trasparente non può essere conservato. Lunga e facile da rughe). 2 Quantificazione della scansione: la pellicola trasparente viene posizionata in un densitometro completamente automatico o in un'altra scatola scura di densitometro per l'analisi della scansione. Non adatto alla folla Persone non appropriate: generalmente non ci sono persone che non sono adatte. Reazioni e rischi avversi 1, emorragia sottocutanea locale: dopo la raccolta del sangue deve essere premuto per un tempo sufficiente, in particolare quelli con tendenza al sanguinamento, in modo da non causare trasudazioni e lividi sottocutanei a causa della mancanza di coagulazione del sangue. 2, infezione: attenzione al funzionamento asettico durante la raccolta del sangue venoso, in modo da non causare infezione locale.