Esame del cromosoma della coltura cellulare del liquido amniotico

A causa di sostanze chimiche dannose, esposizione ai raggi X, fattori ambientali, gravidanza avanzata, parenti stretti, ecc., Che portano a malattie causate dalla variazione del numero, morfologia, struttura e combinazione dei cromosomi durante la gravidanza. L'esame cromosomico delle cellule del liquido amniotico ha un grande significato specifico per la diagnosi prenatale delle malattie cromosomiche. Informazioni di base Categoria di specialisti: Esame materno Categoria di controllo: Test genetici (DNA) Genere applicabile: se le donne digiunano: il digiuno Risultati dell'analisi: Al di sotto del normale: Valore normale: no Sopra normale: negativo: Numero totale di cromosomi: 46. Autosoma: 22 coppie (numero 1-22). Cromosomi sessuali: XY per gli uomini e XX per le donne. Cariotipo maschile: 46, XY. Cariotipo femminile: 46, XX. positivo: I risultati che differiscono dai valori normali sono positivi, suggerendo una malformazione congenita o altra malattia congenita. Suggerimenti: l'esame cromosomico deve prelevare campioni di liquido amniotico a 16-20 settimane di gestazione. Valore normale Il numero totale di cromosomi è 46. 22 coppie di autosomi (numerate da 1 a 22). Il maschio cromosoma sessuale è XY e la femmina è XX. Cariotipo maschio 46, XY. Cariotipo femminile 46, XX. Significato clinico Numero anomalo di cromosomi come sindrome di Down (trisomia 21), trisomia 18, trisomia, trisomia 38, trisomia 21, sindrome da ipoplasia testicolare congenita, sintesi XXY Segno, sindrome di Turner, sindrome da trisomia X e sindrome del corpo X multiplo. Struttura cromosomica anormale come sindrome del monomero parziale 4p, sindrome del monomero parziale 5p, sindrome della trisomia parziale 9p, sindrome del monomero parziale 9q, sindrome del monomero parziale 21q, sindrome del monomero parziale 22q, trisomia parziale 22q Sindrome, ecc. I risultati positivi possono essere malattie: ipoplasia ovarica congenita, paralisi cerebrale pediatrica, sindrome di Down pediatrica, paralisi cerebrale pediatrica, sindrome di Pascal pediatrica, sindrome di Diggolger, sindrome di miagola pediatrica, sviluppo testicolare congenito pediatrico Considerazioni incomplete sulla malattia genetica 1. L'esame cromosomico deve prelevare campioni di liquido amniotico a 16-20 settimane di gestazione. 2, queste malattie genetiche congenite sono aumentate, carenti, traslocazione, inversione e altre anomalie quantitative e strutturali, spesso manifestate come sindrome. La maggior parte dei casi, come malformazioni multiple, ritardo della crescita e ritardo mentale, porta ad aborto fetale, parto prematuro o parto morto. Processo di ispezione (1) Prendere da 15 a 30 ml di liquido amniotico per 16-20 settimane di gravidanza e centrifugare a 1000 r / ml per 10 minuti. (2) Eliminare il surnatante in eccesso, lasciare 1 ml di liquido amniotico e cellule precipitate e disperdere delicatamente in una sospensione cellulare. (3) Trasferire in un matraccio da 25 ml di coltura quadrata, aggiungere 3 ml di un terreno con un pH compreso tra 6,5 ​​e 6,8 (contenente penicillina 100 U / ml, streptomicina 100 μg / ml) e 1 ml di siero di vitello e incubare in un incubatore a 37 ° C. (4) Un gran numero di colonie cellulari simil-fibroblasti o epitelioidi sono state osservate dopo 7-10 giorni di coltura. Il mezzo fresco può essere scambiato in questo momento. (5) Quando le colonie cellulari vengono espanse in pezzi e ci sono molte cellule divisorie circolari traslucide, la colchicina può essere aggiunta per rendere la concentrazione finale 0,1-0,3 μg / ml, e quindi coltivata in un incubatore a 37 ° C per 5-6 ore. (Le procedure di cui sopra sono tutte eseguite in condizioni asettiche). Standard di raccolta: 1 con fibroblasti come tipo principale, crescita delle cellule; 2 con 10 oculari e 20x osservazione obiettiva, i cloni cellulari in crescita coprono 1 o più campi visivi completi; 3 vedono più di 10 traslucidi Celle rotonde e più di 10 celle divisorie luminose rotonde doppie. (6) Se le cellule non crescono vigorosamente, il ciclo di crescita non è uniforme o le cellule invecchiano e lo standard di raccolta non viene raggiunto, la sottocultura può essere continuata nella bottiglia originale. Metodo: In condizioni sterili, la soluzione di coltura è stata prima versata e sono state aggiunte alcune gocce di 2,5 g / L di soluzione di tripsina sterile e la miscela è stata agitata e versata. Inoltre, sono state aggiunte da 5 a 10 gocce di tripsina e agitate delicatamente a 37 ° C per circa 5 minuti per far cadere le cellule aderenti. Sono stati aggiunti 4 ml di terreno fresco contenente siero di vitello e la coltura è stata lasciata riposare a 37 ° C per 4-5 ore. Cambia con cura il terreno di coltura e continua la coltura, che può essere raccolto 3-5 giorni dopo il passaggio. (7) Trasferire la soluzione di coltura in una provetta da centrifuga graduata, aggiungere 1 ml di soluzione di tripsina ED-TA nel pallone, posizionare in un incubatore a 37 ° C per 5 minuti, quindi risciacquare le cellule aderenti con una pipetta a gomito (2,5 g / può anche essere usata) L digestione della soluzione di tripsina). Le cellule staccate dalla parete della bottiglia sono state versate in una provetta da centrifuga, mescolate con la fase liquida di coltura originale, e il pallone da coltura è stato lavato con una piccola quantità di soluzione salina fisiologica calda, e le cellule lavate sono state anche versate nella provetta da centrifuga e centrifugate a 1000 r / min per 10 minuti. (8) Aspirare il surnatante, aggiungere da 3 a 5 ml di soluzione ipotonica KCl 0,075 mol / L preriscaldata a 37 ° C e impostare a 37 ° C per 10-15 minuti. (9) La pre-fissazione, la fissazione e la preparazione sono le stesse del metodo di preparazione dei campioni di cromosoma delle cellule del sangue periferico. Non adatto alla folla 1. Ci sono stati segni di aborto durante la gravidanza. 2. Quando la temperatura corporea supera i 37,5 ° C. 3. Esfoliazione precoce della placenta, infezione addominale e purulenta. Reazioni e rischi avversi (1) Lesione materna: puntura dell'ago pugnalata ferita vasi sanguigni causati da ematoma della parete addominale ematoma subserosale uterino. Occasionalmente, il liquido amniotico entra nella circolazione sanguigna materna dal foro della puntura e provoca embolia del liquido amniotico. La vescica non è stata svuotata prima della puntura e la vescica è stata ferita. (2) Lesioni del feto, della placenta e del cordone ombelicale: l'ago della puntura può danneggiare il feto e causare emorragie e la placenta e il cordone ombelicale possono anche causare sanguinamento o ematoma. Pertanto, la fonte di sanguinamento deve essere identificata durante l'assunzione di liquido amniotico emorragico. Se sospetti di provenire da un feto, dovresti continuare ad ascoltare il cuore del feto. (3) Perdita di liquido amniotico: il liquido amniotico postoperatorio fuoriesce dal foro stenopeico, causando una quantità insufficiente di liquido amniotico, influenzando lo sviluppo fetale e persino causando aborto spontaneo o parto prematuro. (4) aborto o parto prematuro: l'incidenza dell'aborto o del parto prematuro è dello 0,1% -0,2%, spesso si verifica entro una settimana dopo l'intervento chirurgico, anche dopo la puntura, la rottura prematura delle membrane porta al parto prematuro. (5) infezione intrauterina: potrebbe esserci febbre materna dopo l'intervento chirurgico. L'infezione intrauterina può causare uno sviluppo fetale anormale o persino la morte del feto. Pertanto, l'amniocentesi dovrebbe essere rigorosamente asettica.