Attività telomerasica

I telomeri sono una struttura speciale alla fine di un cromosoma negli eucarioti e consistono in una sequenza ripetitiva di DNA ricca di guanina e delle sue proteine ​​associate. I telomeri sono essenziali per la stabilità delle estremità cromosomiche. Il mantenimento della lunghezza dei telomeri richiede la presenza dell'attività della telomerasi. Le citochine endogene svolgono un ruolo importante nella sopravvivenza a lungo termine delle cellule immortalizzate e delle cellule tumorali. La telomerasi è un complesso di RNA e proteine, è una trascrittasi inversa specifica dell'RNA e può sintetizzare il DNA telomerico alla fine del cromosoma dal proprio RNA per compensare il telomero durante la divisione cellulare. Perdita di DNA, mantenimento della lunghezza dei telomeri, mantenimento dell'equilibrio dinamico dei cromosomi e immortalizzazione delle cellule. Dall'istituzione di metodi altamente sensibili basati sulla PCR per la rilevazione della telomerasi, la telomerasi ha attirato l'attenzione diffusa. È stato scoperto che la telomerasi ha una stretta relazione con la proliferazione cellulare, la differenziazione e l'immortalità ed è diventata uno dei punti caldi della ricerca di base sul tumore e l'invecchiamento. Informazioni di base Classificazione specialistica: Classificazione dell'esame oncologico: esame immunitario Genere applicabile: se uomini e donne applicano il digiuno: non il digiuno Risultati dell'analisi: Al di sotto del normale: Valore normale: no Sopra normale: negativo: Il valore normale è negativo. positivo: (1) I pazienti con carcinoma epatico hanno un tasso positivo di telomerasi più elevato (85%). (2) La telomerasi è altamente espressa nella maggior parte dei tessuti tumorali maligni, come neuroblastoma (94%), carcinoma mammario (93%), carcinoma del colon-retto (93%), carcinoma gastrico (85%), carcinoma prostatico. (84%), cancro ai polmoni (80%), ecc. L'attività della telomerasi è strettamente correlata allo stadio clinico e alla prognosi del tumore. (3) Potrebbero esserci attività telomerasi debole in alcune lesioni benigne (come epatite, cirrosi, meningioma benigno, ecc.). Suggerimenti: Potrebbe esserci una debole attività della telomerasi in alcune lesioni benigne (come epatite, cirrosi, meningioma benigno, ecc.). Valore normale Negativo. Significato clinico 1, i pazienti con carcinoma epatico hanno un tasso positivo di telomerasi più elevato (85%), i livelli di AFP positivi per l'attività della telomerasi sono significativamente più alti di quelli negativi per l'attività della telomerasi. L'attività della telomerasi non era significativamente associata alla dimensione del tumore, al grado istologico e alle metastasi del tumore. La telomerasi può essere un marker tumorale per la diagnosi di cancro al fegato. 2. La telomerasi è altamente espressa nella maggior parte dei tessuti tumorali maligni, come neuroblastoma (94%), carcinoma mammario (93%), carcinoma del colon-retto (93%), carcinoma gastrico (85%) e carcinoma prostatico ( 84%), cancro ai polmoni (80%), ecc. L'attività della telomerasi è strettamente correlata allo stadio clinico e alla prognosi del tumore. Pertanto, la telomerasi è attualmente il marker tumorale più specifico e universale. 3. Potrebbero esserci attività telomerasi debole in alcune lesioni benigne (come epatite, cirrosi, meningioma benigno, ecc.). I risultati positivi possono essere malattie: neuroblastoma, carcinoma del colon-retto, carcinoma mammario, tumore allo stomaco, carcinoma epatico, carcinoma prostatico, carcinoma del colon, carcinoma a cellule renali, carcinoma tiroideo Negli ultimi anni, l '"ipotesi dei telomeri, telomerasi" è stata confermata da sempre più ricerche, usando il livello di attività della telomerasi come biomarcatore e indicatore prognostico per la diagnosi del tumore. 1. Prestare attenzione a prevenire contaminazioni di laboratorio e falsi positivi o falsi negativi. 2. Prestare attenzione a rimuovere l'inibitore della polimerasi contenuto nel campione di tessuto per ridurre i falsi negativi. 3. La tecnologia di analisi della scintillazione, il metodo ELISA, il metodo di ibridazione in situ sono più affidabili del metodo TRAP. Processo di ispezione Verifica funzionamento: Il DNA genomico era 0,1 μg; tampone contenente 50 mmol / L cloruro di potassio, 10 mmol / LTris-HCl (pH 8,4), 1,5 mmol / L cloruro di magnesio, 100 μg di gelatina; ogni primer era 0,25 μmol / L; dATP, dCTP, dGTP Il dTIP era di 200 μmol / L ciascuno; la DNA polimerasi era di 2,5 U e il volume finale era di 100 μl. Aggiungi alcune gocce di paraffina liquida per evitare l'evaporazione. Ciclo di reazione: 1 denaturazione: 90 ° C 30 ~ 60 s; 2 temperatura di ricottura del primer e della mascherina: 40 ~ 60 ° C 30 ~ 60s; 3 prolunghe: 72 ° C 1-2 min. Dopo ripetuti cicli da 30 a 40 volte, l'ultima estensione del primer 7 ° 72 ° C è stata terminata per 7 minuti. Dopo la rimozione della paraffina liquida, il prodotto è disponibile per l'analisi. Dopo elettroforesi su gel di agarosio, è stato colorato con bromuro di etidio e si è osservata una striscia fluorescente della lunghezza di amplificazione prevista mediante irradiazione con una lampada UV. Il prodotto può anche essere ibridato con una macchia Southern o una macchia spot con una sonda oligonucleotidica radiomarcata o non radiomarcata. È più conveniente utilizzare lo strumento automatico PCR. Dopo aver aggiunto il reagente di reazione, il modello di DNA e la Taq-DNA polimerasi alla provetta, viene inserito nella procedura regolata, ovvero la temperatura, il tempo richiesti e l'estensione della rispettiva temperatura e tempo e il numero di cicli. La reazione viene condotta in uno strumento automatico per ottenere un prodotto di amplificazione soddisfacente. Non adatto alla folla Coloro che non hanno un test adeguato non devono essere testati. Reazioni e rischi avversi 1. Infezione: prestare attenzione all'operazione asettica durante la raccolta del sangue, evitare la contaminazione di acqua e altre parti nel sito di raccolta del sangue per evitare l'infezione locale. 2, sanguinamento: dopo che al sangue è stato concesso un tempo di compressione completo, in particolare coagulopatia, tendenza al sanguinamento, per evitare trasudazioni, ecchimosi e gonfiore sottocutaneo locale.