Isolamento e identificazione dei batteri anaerobici

L'isolamento e l'identificazione dei batteri anaerobici è un test per la separazione e l'identificazione di batteri con elevata sensibilità all'ossigeno: poiché i microrganismi anaerobici sono ampiamente distribuiti in natura e hanno una grande varietà, le loro funzioni fisiologiche hanno ricevuto crescente attenzione. I batteri anaerobici obbligati sono molto sensibili all'ossigeno, pertanto la chiave della loro separazione, coltura e contabilità è quella di fornire un ambiente di coltura privo di ossigeno e basso potenziale redox. Informazioni di base Classificazione specialistica: classificazione del controllo di crescita e sviluppo: esame biochimico Genere applicabile: se uomini e donne applicano il digiuno: il digiuno Suggerimenti: se la colonia è troppo piccola, usa una lente d'ingrandimento per osservare le colonie. Valore normale Il tipo e la proporzione della flora nel corpo sono normali e il corpo umano è in uno stato di equilibrio dinamico e salute. Significato clinico Tecnologia del tubo di rotolamento anaerobico di Hengate, la tecnologia del tubo di rotolamento anaerobico di Hengate è una tecnologia di cultura anaerobica, proposta per la prima volta dal microbiologo americano Hengate nel 1950 e applicata alla ricerca sul microrganismo anaerobico di rum. Risultati anormali: malattie speciali causate da anaerobici di Clostridium come gangrena gassosa, tetano, botulismo, ecc. Persone che devono essere esaminate: pazienti con diabete, gravi malattie del fegato, cirrosi, uremia, ulcere emorroidi, cancrena degli arti, botulismo e altri sintomi. precauzioni Nel processo di separazione e identificazione dei batteri anaerobici, è necessario tenere presente quanto segue: (1) I campioni anaerobici devono essere isolati dall'aria durante la raccolta e il trasporto e devono essere completati entro 30 minuti, evitando la contaminazione della flora normale. (2) Il mezzo deve essere preparato di recente: se conservato per troppo tempo, l'ossigeno si dissolve sulla superficie o il perossido si trova nel mezzo, il che non favorisce la crescita di batteri anaerobici. (3) Se la colonia è troppo piccola, la colonia dovrebbe essere osservata con una lente d'ingrandimento. (4) Per eseguire un test di tolleranza all'ossigeno, è necessario selezionare da 4 a 5 colonie di tratti diversi da ciascuna piastra di agar, inoculare piastre di agar sangue aerobiche e anaerobiche e posizionarle in ambienti aerobici, diossido di carbonio e anaerobici. (5) Se si esegue l'identificazione dell'enzima extracellulare, è necessario disporre di una concentrazione batterica sufficiente. Processo di ispezione separato (1) numero Prendi cinque tubi sterili per acqua e contrassegnali con un pennarello per indicare 10-1, 10-2, ... 10-5. (2) diluizione In una scatola per guanti anaerobica ultra-pulita sterile senza ossigeno, utilizzare una siringa sterile per prelevare 1 ml di campione liquido ben miscelato, aggiungerlo a una provetta anaerobica contenente soluzione salina fisiologica pre-ridotta e miscelarlo uniformemente con un oscillatore. Effettuare una diluizione 10-1. Una diluizione da 1 ml 10-1 è stata pipettata in una provetta anaerobica separata contenente 9 ml di soluzione fisiologica usando una siringa sterile per fare una diluizione 10-2. Diluito in serie da 10 volte a 10-6 per ottenere diverse diluizioni del campione. Il conteggio delle provette viene solitamente selezionato da tre diluizioni di 10-4, 10-5 e 10-6. (3) Separazione dei rulli 1) Tubo di rotolamento Il mezzo di agar sterile anaerobico è stato sciolto in un bagno di acqua bollente, posto in un bagno d'acqua a una temperatura costante di 46-50 ° C e usato, e quando il mezzo è stato estratto dalla bottiglia, è stato gonfiato con N 2 nel mezzo. Quindi gonfiare con N2 nella provetta, rimuovere tutta l'aria all'interno della provetta, quindi aggiungere il mezzo alla provetta e tappare immediatamente il tappo. Quando il tappo viene inserito nel tubo, l'ago di gonfiaggio viene estratto in tempo. Pipettare 0,1 mL di ciascuna delle diluizioni 10-4, 10-5 e 10-6 in una provetta da utilizzare, quindi posizionarla su una piastra di porcellana contenente acqua ghiacciata e arrotolare rapidamente. L'agar solubilizzato forma uno strato solidificato immediatamente sulla parete interna della provetta. 2) Separazione e purificazione Le colonie risultanti devono essere raccolte ed esaminate per la loro morfologia e purezza. Se non è stata ottenuta una coltura pura, diluire nuovamente la provetta e raccogliere nuovamente i due punti fino a ottenere una coltura pura. Le singole colonie da raccogliere vengono preliminarmente osservate sotto una lente d'ingrandimento e contrassegnate. La provetta media viene quindi fissata su un supporto adatto e il tappo di gomma della provetta viene aperto e un ago di azoto riempito di gas avente un flusso d'aria adeguato e un batterio infiammato viene rapidamente inserito nella provetta. Allo stesso tempo, un altro tubo anaerobico liquido viene rimosso dal tappo di gomma e inserito in un altro ago di ventilazione sterilizzato. Inserire con cura i capillari del gomito preparati nel mezzo solido, identificare le colonie da raccogliere, aspirarle delicatamente, trasferirle in una provetta liquida e tappare. La coltura è stata coltivata a 37 ° C per 24 ore o più o dopo il controllo della torbidità della soluzione di coltura e la purezza della coltura isolata è stata esaminata. 3) Separazione tratteggiata Un'estremità del tappo di gomma della provetta viene bruciata sulla fiamma e l'ago di aspirazione del gas viene utilizzato per tappare l'ugello.Prima di rimuovere rapidamente l'ago, l'aria viene ventilata per 15-20 secondi e un'estremità della provetta viene bruciata per un po 'sulla fiamma. Stringere il tappo del tubo e il tubo a spirale viene eretto e isolato Utilizzare CO2: H2 = 80: 20. Poiché la CO2 è più pesante dell'aria, il tappo non avrà residui d'aria dopo l'apertura. Il tubo di scribing può essere cresciuto a 34-37 gradi per far crescere colonie. Identificazione di ceppi 1 test di fermentazione dello zucchero Gli esperimenti di fermentazione dello zucchero sono le reazioni biochimiche più comunemente utilizzate e sono particolarmente importanti per l'identificazione dei batteri intestinali. La maggior parte dei batteri può utilizzare lo zucchero come fonte di carbonio e fonte di energia, ma presenta notevoli differenze nella loro capacità di abbattere lo zucchero. Alcuni batteri possono scomporre lo zucchero e produrre acido (come acido lattico, acido acetico, acido propionico, ecc.) E gas (come Idrogeno, metano, anidride carbonica, ecc .; alcuni batteri producono solo acido e non producono gas. Ad esempio, Escherichia coli può decomporre il lattosio e il glucosio per produrre acido e produrre gas; La Salmonella typhimurium può decomporre il glucosio per produrre acido e non produrre gas e non può decomporre il lattosio; il comune Proteus decompone il glucosio per produrre acido e produce gas, che non può decomporre il lattosio. La produzione di acido può essere determinata usando un indicatore. Il bromocresolo viola [pH 5,2 (giallo) - 6,8 (viola)] è stato aggiunto in anticipo quando il mezzo è stato preparato e quando l'acido è stato prodotto per fermentazione, il mezzo è stato cambiato dal viola al giallo. La generazione di gas può essere evidenziata dalla presenza o dall'assenza di bolle nel tubo Dehan invertito nel tubo di fermentazione. Passaggi sperimentali specifici: 1 Il liquido batterico viene opportunamente diluito, quindi in un ambiente sterile, una certa quantità della soluzione diluita viene iniettata nel tubo di identificazione biochimica e sigillata con un film sigillante sterile. 2 Collocare il tubo di identificazione inoculato in un serbatoio anaerobico e posizionarlo in un incubatore a temperatura costante a 37 ° C con azoto sufficiente. Il cambiamento di colore e la produzione di gas di ciascuna provetta sono stati osservati dopo 324 ore. 2 esperimento di decomposizione proteica 1 Il liquido batterico viene opportunamente diluito, quindi in un ambiente sterile, una certa quantità della soluzione diluita viene iniettata nel tubo di identificazione biochimica e sigillata con un film sigillante sterile. 2 Collocare il tubo di identificazione inoculato in un serbatoio anaerobico e posizionarlo in un incubatore a temperatura costante a 37 ° C con azoto sufficiente. Dopo 324 ore, le provette sono state sottoposte rispettivamente alla reazione di Mirren, alla reazione di idrazina, alla reazione gialla e alla reazione di colluttorio. Esperimento di idrolisi a 3 amidi 1 Il liquido batterico viene opportunamente diluito, quindi in un ambiente sterile, una certa quantità della soluzione diluita viene iniettata nel tubo di identificazione biochimica e sigillata con un film sigillante sterile. 2 Collocare il tubo di identificazione inoculato in un serbatoio anaerobico e posizionarlo in un incubatore a temperatura costante a 37 ° C con azoto sufficiente. Dopo 324 ore, una quantità appropriata di soluzione di iodio di Lugol è stata aggiunta a ciascuna provetta per osservare l'idrolisi dell'amido. Non adatto alla folla Nessuna informazione pertinente. Reazioni e rischi avversi Non sono state trovate complicanze e pericoli correlati.