beta-laktamaza

P-laktamaza odnosi się do enzymu inaktywującego zdolnego do katalizowania hydrolizy wiązania amidowego w pierścieniu P-laktamowym w biomolekule. Bakteryjna produkcja β-laktamazy jest głównym mechanizmem oporności bakteryjnej na antybiotyki β-laktamowe. Antybiotyki Β-laktamazy, w tym penicyliny, cefalosporyny, nietypowe β-laktamy itp., Są najczęściej stosowanymi, najczęściej badanymi i najczęściej stosowanymi lekami. Podstawowe informacje Klasyfikacja specjalistyczna: Inspekcja i klasyfikacja chorób zakaźnych: badanie biochemiczne Obowiązująca płeć: czy mężczyźni i kobiety stosują post: nie na czczo Wskazówki: W zależności od stanu odżywienia całego ciała w posiłku podaje się mleko, jaja, owoce, mleko sojowe itp. Wartość normalna Rodzaj i proporcja flory w ciele są normalne, a ciało ludzkie jest w dynamicznej równowadze. Znaczenie kliniczne Mechanizm oporności bakteryjnej: 1. Inaktywowane enzymy - głównie beta-laktamazy (ponad 200 rodzajów), które powodują, że antybiotyki są nieskuteczne. 2, zmiany docelowe - zmiany docelowe z antybiotykami, tak że rola antybiotyków zmniejszyła się. 3, zmiana przepuszczalności błony bakteryjnej - tak, że antybiotyki nie mogą lub rzadko przedostają się do bakterii, aby osiągnąć cel. Rozwój oporności bakteryjnej ze szczepów szpitalnych (takich jak Enterobacteriaceae, Staphylococcus aureus) na szczepy pozaszpitalne (takie jak Streptococcus pneumoniae, Streptococcus pyogenes, Neisseria gonorrhoeae), oporność na oporność na pojedynczy lek Lek rozwija się w oporność na wiele leków, taką jak oporność Staphylococcus aureus na penicylinę; szczep ESBL jest oporny na wiele powszechnie stosowanych antybiotyków. Nieprawidłowe wyniki Enterobacteriaceae, Staphylococcus aureus, Streptococcus pneumoniae, Streptococcus pyogenes, Neisseria gonorrhoeae i inne infekcje, ale stosowanie antybiotyków nie jest skuteczne lub efekt nie jest oczywisty, bakterie wytwarzają lekooporność. Osoby wymagające badania mają pacjentów z powyższymi schorzeniami. Środki ostrożności Niewłaściwy tłum: Nie. Zabronione przed badaniem: Zwróć uwagę na normalne nawyki żywieniowe i zwróć uwagę na higienę osobistą. Wymagania dotyczące kontroli: Aktywnie współpracować z lekarzem. Proces kontroli Wykrywanie β-laktamazy W próbkach klinicznych Staphylococcus aureus, Haemophilus influenzae, Neisseria gonorrhoeae i kilka szczepów Enterococcus okazało się ostatnio opornych na penicylinę i ampicylinę. Ponieważ powyższy szczep wytwarza β-laktamazę, wspomniany antybiotyk jest hydrolizowany. Do wykrycia enzymu stosowane są następujące metody: 1. Metoda zanikania aktywności drobnoustrojów Ta metoda jest wskaźnikiem szczepu Bacillus subtilis, który jest bardzo wrażliwy na penicylinę. Jeśli badany szczep wytwarza β-laktamazę i niszczy penicylinę, po obu stronach linii występuje wzrost Bacillus subtilis, w przeciwnym razie wskaźnik jest nadal bardzo duży. Pierścień antybakteryjny. 2, oznaczanie jodu skrobi Beta-laktamaza niszczy pierścień beta-laktamowy, a jod łączy się z otwartym pierścieniem beta-laktamowym, przekształcając niebieski kompleks skrobia-jod w bezbarwny. METODY: Zawiesinę penicyliny 6000 μg / ml przygotowano z roztworem buforu fosforanowego o pH 6,0. 0,1 ml roztworu umieszczono w studzience płytki do mikrorozcieńczeń. Wybrano kilka kolonii szczepu testowego i zawieszono w niej, wytrząsano przez 30 minut i pozostawiono w temperaturze pokojowej na 1 godzinę. Dodaj 2 krople roztworu skrobi, dodaj 1 kroplę roztworu jodu, natychmiast wymieszaj i obserwuj zmianę koloru. Gdy osoba pozytywna doda roztwór jodu, natychmiast stanie się niebieski, tak jak znika niebieski w ciągu 10 minut, co sugeruje, że bakterie wytwarzają β-wewnętrzny Amidaza 3. Pomiar kwasu Penicylina jest hydrolizowana przez β-endazę do kwasu penicylinowego, wartość pH spada poniżej 6,8, ze wskaźnikiem czerwieni fenolowej, z czerwonego (fioletowego) koloru (roztwór podstawowy: bufor cytrynianowy pH 8,5) → żółty (pH 6,8 Następujące). 4, reakcja barwna cefalosporyny tiofenu Pierścień β-laktamowy nitrocefiny otwiera się za pomocą β-laktamazy, a matryca zmienia kolor z żółtego na czerwony. Metoda płynna: 10 mg cefa nitrotiofenu rozpuszczono w 1 ml dimetylosulfotlenku, a następnie rozcieńczono 1:20 0,1 mol / L PBS (pH 7,0), a na koniec stężenie wynosiło 500 μg / ml, a roztwór był żółty lub jasnopomarańczowy. Przechowuj od 4 do 10 ° C przez kilka tygodni. Weź 0,05 ml roztworu w studzience płytki do mikrozcieńczania lub w małej probówce, wybierz kolonię testu, zrób gęstą zawiesinę, wymieszaj z płynem matrycowym we wklęsłym otworze i zmień nitrotiofen cefalosporyny z żółtego na temperaturę pokojową w temperaturze pokojowej na 10 do 30 minut. Kolor czerwony jest dodatni. Jeśli kolor nie jest oczywisty, obserwację można przedłużyć o 6 godzin. Doniesiono, że wyniki papierowej metody wykrywania β-laktamazy przez Haemophilus influenzae i Neisseria gonorrhoeae są dokładne, ale w przypadku niektórych szczepów niewielka ilość β-laktamazy, która jest ściśle związana z komórkami bakteryjnymi, takimi jak saprofityczne Staphylococcus itp., Lepiej metodą płynną. Kontrola jakości jest stosowana do dowolnej z powyższych metod wykrywania. Nie nadaje się dla tłumu Zasadniczo brak tabu. Działania niepożądane i ryzyko Zasadniczo bez komplikacji i szkód.