Badanie chromosomów w hodowli komórek płynu owodniowego

Ze względu na szkodliwe chemikalia, narażenie na promieniowanie rentgenowskie, czynniki środowiskowe, zaawansowaną ciążę, bliskich krewnych itp., Prowadzące do chorób spowodowanych zmianami liczby, morfologii, budowy i kombinacji chromosomów podczas ciąży. Badanie chromosomowe komórek płynu owodniowego ma szczególne znaczenie w diagnostyce prenatalnej chorób chromosomalnych. Podstawowe informacje Kategoria specjalistyczna: Kontrola matek Sprawdź Kategoria: Testy genetyczne (DNA) Dotyczy płci: czy kobiety są na czczo: na czczo Wyniki analizy: Poniżej normy: Wartość normalna: Nie Powyżej normalnego: Negatywne: Całkowita liczba chromosomów: 46. Autosom: 22 pary (numer 1-22). Chromosomy płci: XY dla mężczyzn i XX dla kobiet. Męski kariotyp: 46, XY. Kobieta kariotyp: 46, XX. Pozytywne: Wyniki, które różnią się od wartości normalnych, są pozytywne, co sugeruje wrodzoną wadę rozwojową lub inną wrodzoną chorobę. Wskazówki: Badanie chromosomów powinno obejmować próbki płynu owodniowego w 16-20 tygodniu ciąży. Wartość normalna Całkowita liczba chromosomów wynosi 46. 22 pary autosomów (ponumerowane od 1 do 22). Męski chromosom płci to XY, a kobieta to XX. Męski kariotyp 46, XY. Kobieta kariotyp 46, XX. Znaczenie kliniczne Nieprawidłowa liczba chromosomów, takich jak zespół Downa (trisomia 21), trisomia 18, trisomia, trisomia 38, trisomia 21, zespół wrodzonej hipoplazji jąder, synteza XXY Znak, zespół Turnera, zespół trisomii X i zespół mnogiego ciała X. Nieprawidłowa struktura chromosomowa, taka jak zespół częściowego monomeru 4p, zespół częściowego monomeru 5p, zespół częściowej trisomii 9p, zespół częściowego monomeru 9p, zespół częściowego monomeru 21q, zespół częściowego monomeru 22q, częściowa trisomia 22q Syndrom itp. Pozytywnymi wynikami mogą być choroby: wrodzona niedorozwój jajników, dziecięce porażenie mózgowe, pediatryczny zespół Downa, dziecięce porażenie mózgowe, pediatryczny zespół pascal, zespół Diggolgera, pediatryczny zespół miau, pediatryczny wrodzony rozwój jąder Niekompletne, genetyczne uwarunkowania choroby 1. W badaniu chromosomowym należy pobrać próbki płynu owodniowego w 16–20 tygodniu ciąży. 2, te wrodzone choroby genetyczne wzrosły, brakuje, translokacji, inwersji i innych nieprawidłowości ilościowych i strukturalnych, często objawiających się jako zespół. Większość przypadków, takich jak liczne wady rozwojowe, opóźnienie wzrostu i upośledzenie umysłowe, prowadzi do aborcji płodu, przedwczesnego porodu lub martwego porodu. Proces kontroli (1) Weź 15 do 30 ml płynu owodniowego przez 16 do 20 tygodni ciąży i wiruj przy 1000 r / ml przez 10 min. (2) Odrzuć nadmiar supernatantu, zostaw 1 ml płynu owodniowego i wytrąconych komórek i delikatnie zdysperguj w zawiesinie komórkowej. (3) Przenieść do 25 ml kwadratowej kolby hodowlanej, dodać 3 ml pożywki o pH 6,5 do 6,8 (zawierającej 100 U / ml penicyliny, streptomycyny 100 μg / ml) i 1 ml surowicy cielęcej i inkubować w inkubatorze w 37 ° C. (4) Po 7-10 dniach hodowli zaobserwowano dużą liczbę kolonii komórek podobnych do fibroblastów lub nabłonkowych. Świeżą pożywkę można w tym momencie wymienić. (5) Gdy kolonie komórkowe są ekspandowane na kawałki i istnieje wiele półprzezroczystych okrągłych dzielących się komórek, można dodać kolchicynę, aby uzyskać końcowe stężenie 0,1-0,3 μg / ml, a następnie hodować w inkubatorze w 37 ° C przez 5-6 godzin. (Wszystkie powyższe procedury są przeprowadzane w warunkach aseptycznych). Standardy zbioru: 1 z fibroblastami jako głównym rodzajem wzrostu komórek; 2 z 10-krotnymi okularami i 20-krotną obserwacją obiektywów, rosnące klony komórkowe pokrywają 1 lub więcej pełnych pól widzenia; 3 patrz więcej niż 10 półprzezroczystych Okrągłe komórki i ponad 10 podwójnie okrągłych jasnych dzielących komórek. (6) Jeśli komórki nie rosną energicznie, cykl wzrostu nie jest jednorodny lub komórki starzeją się, a standard zbioru nie zostanie osiągnięty, subkulturę można kontynuować w oryginalnej butelce. Metoda: W sterylnych warunkach najpierw wylano roztwór kultury i dodano kilka kropli sterylnego roztworu trypsyny o masie 2,5 g / l, i mieszaninę wytrząsano i wlano. Następnie dodano 5 do 10 kropli trypsyny i delikatnie wytrząsano w 37 ° C przez około 5 minut, aby spowodować odpadnięcie przylegających komórek. Dodano 4 ml świeżej pożywki zawierającej surowicę cielęcą i hodowlę pozostawiono do odstania w 37 ° C na 4 do 5 godzin. Ostrożnie zmień pożywkę hodowlaną i kontynuuj hodowlę, którą można zebrać 3 do 5 dni po pasażu. (7) Przenieść roztwór kultury do probówki z podziałką, dodać 1 ml roztworu ED-TA-trypsyny do kolby, umieścić w inkubatorze w 37 ° C na 5 minut, a następnie przepłukać przylegające komórki za pomocą pipety łokciowej (2,5 g / można również użyć) L trawienie roztworem trypsyny). Komórki odłączone od ścianki butelki wlano do probówki wirówkowej, zmieszano z oryginalną fazą płynną hodowli, a kolbę hodowlaną przemyto niewielką ilością ciepłej soli fizjologicznej, a przemyte komórki wlano również do probówki wirówkowej i wirowano przy 1000 r / min przez 10 minut. (8) Odessać supernatant, dodać 3 do 5 ml hipotonicznego roztworu KCl o stężeniu 0,075 mol / L wstępnie ogrzanego do 37 ° C i ustawić w 37 ° C na 10 do 15 minut. (9) Prefiksja, fiksacja i przygotowanie są takie same, jak metoda przygotowania próbek chromosomów krwi obwodowej. Nie nadaje się dla tłumu 1. Podczas ciąży wystąpiły oznaki aborcji. 2. Gdy temperatura ciała przekroczy 37,5 ° C. 3. Wczesne złuszczanie łożyska, zakażenie brzucha i ropne. Działania niepożądane i ryzyko (1) Uraz matki: nakłucie igły wbite w naczynia krwionośne z powodu krwiaka ściany brzucha krwiak podtwardówki macicy. Czasami płyn owodniowy dostaje się do krążenia krwi matki z dziury nakłucia i powoduje zatorowość płynu owodniowego. Pęcherz nie został opróżniony przed nakłuciem, a pęcherz został zraniony. (2) Uraz płodu, łożyska i pępowiny: Igła do nakłuwania może uszkodzić płód i może powodować krwawienie, a łożysko i pępowina mogą również powodować krwawienie lub krwiak. Dlatego podczas przyjmowania krwotocznego płynu owodniowego należy zidentyfikować źródło krwawienia. Jeśli podejrzewasz, że jesteś z płodu, powinieneś nadal słuchać serca płodu. (3) Wyciek płynu owodniowego: pooperacyjny wyciek płynu owodniowego powoduje wyciek z otworków, powodując zbyt mało płynu owodniowego, wpływając na rozwój płodu, a nawet powodując poronienie lub przedwczesny poród. (4) aborcja lub przedwczesny poród: częstość aborcji lub przedwczesnego porodu wynosi 0,1% -0,2%, często występuje w ciągu tygodnia po operacji, nawet po nakłuciu, przedwczesne pęknięcie błon prowadzi do przedwczesnego porodu. (5) zakażenie wewnątrzmaciczne: po operacji może wystąpić gorączka matki. Infekcja wewnątrzmaciczna może powodować nieprawidłowy rozwój płodu, a nawet śmierć płodu. Dlatego amniopunkcja powinna być ściśle aseptyczna.