Detecção imunológica de Helicobacter pylori

Os testes imunológicos do Helicobacter pylori detectam a infecção por H. pylori ao medir os anticorpos do Helicobacter pylori no soro, incluindo ensaios de hemaglutinação passiva, técnicas de immunoblotting e ensaios imunoenzimáticos (ELISA). O paciente tomou o líquido cefalorraquidiano e diluiu o antígeno com a placa de hemaglutinação do tipo V de 96 poços para diluir o antígeno JE, de modo que cada poço continha 25 µL, e o soro a ser testado foi diluído 1:10 com cada diluição. Adicione 25µL, adicione o anticorpo monoclonal cerebral japonês liofilizado para sensibilizar os glóbulos vermelhos das ovelhas de 25µL e observe os resultados depois de repousar a 37 ° C durante várias horas. Informação básica Classificação de especialista: classificação de exame de crescimento e desenvolvimento: exame de sangue Sexo aplicável: se homens e mulheres aplicam jejum: jejum Dicas: Mantenha o estômago vazio no exame. Valor normal O resultado foi negativo. Significado clínico Resultados anormais: 1. O título de aglutinação do soro do teste é 4 vezes ou mais de 4 vezes maior do que o controle de antígeno. O título de antígeno sérico durante o período de recuperação foi 4 ou mais vezes maior que a fase aguda e foi positivo. 2. Há uma reação de cor especial, que prova que existe uma certa proteína. 3. A razão entre o soro a ser testado e o soro negativo conhecido (P / N) ≥ 2,1, e o valor do OD do soro a ser testado é ≥ 0,4, então é considerado positivo. Precisa verificar a multidão: pacientes com úlcera péptica. Precauções Contra-indicações antes da inspeção: Preste atenção à proteção do cérebro, prepare vários líquidos de embalagem e configure a concentração. Tabu ao verificar: 1. O paciente leva o líquido cefalorraquidiano para se sentar, para não machucar a cabeça. 2. Anticorpos monoclonais utilizados para sensibilizar os glóbulos vermelhos das ovelhas a serem liofilizados antes da sua utilização. 3. A diluição, a duração da ação e a temperatura dos anticorpos primário e secundário devem ser pré-experimentadas para determinar as condições ótimas para diferentes proteínas. 4. A solução de revelação de cor deve ser recém-configurada e finalmente adicionada a H2O2. 5. DAB tem o potencial de causar câncer, por isso tenha cuidado ao manusear o câncer. 6. Estritamente controle fatores que afetam a eficiência da rotulagem, como temperatura, tempo, pH, enzima e quantidade de anticorpos. 7. Ao instalar a coluna, torne a coluna uniforme, a superfície do cilindro é plana e não há bolhas ou rachaduras. Processo de inspeção Primeiro, coagulação sanguínea passiva O paciente tomou o líquido cefalorraquidiano e diluiu o antígeno com a placa de hemaglutinação do tipo V de 96 poços para diluir o antígeno JE, de modo que cada poço continha 25 µL, e o soro a ser testado foi diluído 1:10 com cada diluição. Adicione 25 µL e adicione 25 µL de glóbulos vermelhos de ovelha sensibilizados por anticorpo monoclonal cerebral japonês liofilizado e observe os resultados após permanecer a 37ºC por várias horas. Em segundo lugar, tecnologia de immunoblotting (A) amostra de prote�a obtida: ap� indu�o bacteriana de express�, as c�ulas podem ser directamente lisadas por tamp� de carga de electroforese, c�ulas eucari�icas mais tamp� de homogeneiza�o, homogeneizado de temperatura ambiente ultra-s�ico ou mec�ico 0,5-1 min. Foi ent centrifugado a 13.000 g durante 15 min a 4. Tome o sobrenadante como uma amostra. (2) Electroforese: Preparou-se um gel de electroforese e submeteu-se a SDS-PAGE. (3) Transferência: (transferência semi-seca) 1. Após a eletroforese terminar, corte a tira no tamanho apropriado e equilibre com o tampão da membrana, 5 min × 3 vezes. 2. Tratamento da membrana: O papel de filtro e a membrana NC do mesmo tamanho da tira foram pré-cortados e imersos no tampão de transferência durante 10 min. 3. Película de transferência: O dispositivo de transferência de filme é colocado em ordem de baixo para cima de acordo com a ordem da placa de carbono do anodo, 24 camadas de papel de filtro, filme NC, gel, 24 camadas de papel de filtro e placa de carbono catódico. As bolhas foram removidas num passo, e foi aplicado um peso de 500 g para secar o excesso de líquido na placa de carbono. Ligue o poder, corrente constante 1mA / cm2, transferência de 1.5hr. Após a conclusão da transferência, a energia é removida e a membrana é removida, e a tira a ser testada é cortada para immunoblotting. As tiras padrão de proteína foram coradas, colocadas na solução de coloração da membrana por 50 s, e depois descoloradas em 50% metanol várias vezes em um fundo claro, depois lavadas com água bidestilada, secas ao ar em duas camadas de papel de filtro e deixadas para colorir Os resultados são comparados. (4) resposta imune: 1. Lave a membrana com PBS a 0,01 M durante 5 min x 3 vezes. 2. Adicione a solução de revestimento e agite suavemente à temperatura ambiente por 2 horas. 3. Descarte a solução e lave a membrana com PBS 0,01 M por 5 min × 3 vezes. 4. Adicione o anticorpo primário (diluído com 0,01 M PBS em uma razão de diluição adequada, o líquido deve cobrir toda a membrana), e deixe a 4 ° C por mais de 12 horas. No controlo negativo, o anticorpo primário foi substituído por BSA a 1% e os restantes passos foram os mesmos que no grupo experimental. 5. Elimine o anticorpo primário e 1% de BSA e lave a membrana com 0,01 M de PBS, 5 min × 4 vezes. 6. Adicione o anticorpo secundário conjugado com peroxidase de rábano (diluído com 0,01 M PBS na razão de diluição apropriada) e agite suavemente durante 2 horas à temperatura ambiente. 7. Descartar o anticorpo secundário e lavar a membrana com PBS 0,01 M por 5 min × 4 vezes. 8. Adicione a solução de coloração, evite a luz e desenvolva a cor até que a faixa apareça, coloque a água bidestilada para interromper a reação. Em terceiro lugar, determinação de adsorção combinada enzimática Os métodos ELISA comumente usados ​​incluem um método sanduíche de duplo anticorpo e um método indireto, o primeiro para detectar antígenos macromoleculares e o último para medir anticorpos específicos. ELISA indireto Este método é usado principalmente para detectar anticorpos. O procedimento para o ELISA indireto é o seguinte. (1) materiais 1 lquido de revestimento, lquido de lavagem, lquido de preservao de calor, lquido de substrato e lquido de paragem; Antigénio revestido a 2DVH, anti-anticorpo marcado com enzima, soro de referência de DVH negativo e positivo; 3 detector ELISA, amostrador, microplaca de poliestireno. (2) Etapas do método 1 mais revestimento antigico? 4 durante a noite, lavado tr vezes, seco; 2 mais soro a ser testado → 37 ° C por 2 horas, lavado três vezes, seco; 3 mais anticorpo marcado com enzima → 37 ° C por 2 horas, lavado três vezes, seco; 4 adicionar solução de substrato → 37 ° C por 30 minutos, adicionar solução de parada; 5 O valor da DO foi medido por um detector de ELISA, e a relação P / N foi calculada. 2. ELISA em sanduíche de duplo anticorpo Este método é usado principalmente para detectar antígenos macromoleculares. 1 mais revestimento de anticorpo? 4 durante a noite, lavado tr vezes, seco; 2 mais o antígeno a ser testado → 37 ° C por 30 minutos, lavado três vezes, seco; 3 mais anticorpo marcado com enzima → 37 durante 30 minutos, lavado tr vezes, seco; 4 adicionar solução de substrato → 37 ° C por 15 minutos, adicionar solução stop; 5 O valor da DO foi medido por um testador de ELISA. Não é adequado para a multidão Não é adequado para verificar a multidão: nenhum. Reações adversas e riscos Sem complicações ou riscos relacionados.