ไคโลไมครอน

chylomicrons เป็นอนุภาคไลโปโปรตีนที่ใหญ่ที่สุดในพลาสมาของมนุษย์และ CM เป็นส่วนใหญ่ของ TG อาหารที่ส่งมาจากลำไส้เล็กดูดซึมไปยังการไหลเวียนของระบบ ความเร็วในการล้าง CM เร็วครึ่งชีวิตคือ 10 นาทีและบุคคลทั่วไปไม่สามารถตรวจจับได้หลังจากผ่านไป 12 ชั่วโมงในการอดอาหารเมื่อ lipoprotein ถูก electrophoresed CM จะเป็นจุดกำเนิด มันควรจะสังเกตว่าตัวอย่างควรจะสดในช่วงเซรั่ม lipoprotein electrophoresis และไม่ควรเก็บไว้แช่แข็ง ข้อมูลพื้นฐาน การจำแนกผู้เชี่ยวชาญ: การจำแนกการตรวจย่อยอาหาร: การตรวจเลือด บังคับเพศ: ไม่ว่าจะเป็นผู้ชายและผู้หญิงใช้การอดอาหาร: การอดอาหาร ผลการวิเคราะห์: ต่ำกว่าปกติ: ค่าปกติ: ไม่ เหนือปกติ: เชิงลบ: ปกติ บวก: Hyperlipoproteine ​​mia ประเภท 1, Hyperlipoproteine ​​mia ประเภท V เคล็ดลับ: ก่อนการตรวจอาหารจะเบาและห้ามดื่มแอลกอฮอล์ ค่าปกติ เชิงลบ ความสำคัญทางคลินิก ภาวะไขมันในเลือดสูงบวกชนิดที่ 1, ไขมันในเลือดสูงชนิดที่ 5 ผลลัพธ์ในเชิงบวกอาจเป็นโรค: ไขมันในเลือดสูงชนิดที่ 1, ข้อควรระวังในไขมันในเลือดสูงประเภท V 1. วิธีการวัดความขุ่น Immunoturbidimetric: (1) เกี่ยวกับ antiserum: การทดสอบความขุ่นมีความต้องการ antiserum สูงกว่าวิธีอื่น วิธี turbidimetric โดยเฉพาะอย่างยิ่ง polyclonal antibody Anti-serum ต้องปลอดจาก anti-serum ต้องให้ความสนใจเป็นอย่างยิ่งกับ apoA-I ที่สกัดจากเซรั่มของมนุษย์เพื่อให้ได้ภูมิต้านทานความบริสุทธิ์ของโครมาโตกราฟีและอิเล็กโตรโฟเรซิสบริสุทธิ์ซึ่งเป็นไปไม่ได้ในห้องปฏิบัติการทั่วไป antiserum titer (titer) ไม่ควรน้อยกว่า 16 ในปัจจุบันน้ำยารีเอเจนต์เชิงพาณิชย์ในประเทศบางเครื่อง apoA-I antiserum มี titer ที่ต่ำมากดังนั้นจึงต้องระมัดระวังเมื่อซื้อชุด หากคุณไม่มีประสบการณ์ในการระบุคุณภาพของ antisera ก่อนซื้อคุณควรขอให้หน่วยที่มีคุณสมบัติเหมาะสมทำการระบุ (2) ตัวอย่างในวิธีการด้านบน (ซีรัม) เจือจาง 200 เท่าสำหรับการใช้งานด้วยตนเอง (100 μlของตัวอย่าง) และหากเป็นตัวอย่างที่แม่นยำก็สามารถเจือจางได้ 20 เท่า (ใช้ 10 μl) เพื่อปรับให้เข้ากับสภาพของห้องปฏิบัติการที่แตกต่างกัน (เช่นเครื่องมืออัตโนมัติชนิดต่าง ๆ ) สัดส่วนของแอนติเจนและแอนติบอดีควรให้ความสนใจเมื่อทำการปรับเปลี่ยนที่เหมาะสมมันจะต้องสังเกตว่าไม่ควรมีแอนติเจนเกินในระบบปฏิกิริยาและขีด จำกัด บนเชิงเส้น กล่าวอีกนัยหนึ่งปริมาณ antiserum ต้องเพียงพอมิฉะนั้นผลลัพธ์จะต่ำเมื่อ apoA-I สูงในตัวอย่าง ในปัจจุบันชุดยาในประเทศบางชนิดไม่เพียง แต่มีแอนติบอดีต่ำในซีรั่ม แต่ปริมาณของตัวอย่างในการดำเนินการมีขนาดใหญ่เกินไป (เช่น 3 ~ 5μl) แอนติบอดีไม่เพียงพออย่างเห็นได้ชัดและผลการวัดที่ไม่ถูกต้องอย่างหลีกเลี่ยงไม่ได้ (3) เพื่อให้การวัดมีความแม่นยำผลการคำนวณกราฟการสอบเทียบจะต้องทำในการวัด apoA-I และ B turbidimetric (วิธีจุดสิ้นสุด) ความเข้มข้นบางช่วง (ปริมาณตัวอย่างต่ำ) (X) นั้นเป็นเส้นตรงกับความขุ่น (Y) และการถดถอยเชิงเส้นคำนวณการสกัดกั้นบางอย่างบนแกน Y (ค่า <0.1) ดังนั้นค่าเบี่ยงเบนของผลการคำนวณจึงถูกคำนวณโดยการสอบเทียบจุดเดียว ยิ่งใหญ่ผลลัพธ์ที่วัดได้ไม่สามารถสะท้อนระดับที่สูงได้อย่างแม่นยำ (สูงต่ำไปต่ำสูง) อย่าละเลยความถูกต้องของการวัดเนื่องจากความเรียบง่ายของวิธีการจุดเดียว ไม่ว่าจะใช้เครื่องมืออัตโนมัติประเภทใดคุณต้องลองใช้กราฟการปรับเทียบก่อน หากการทดสอบซ้ำภายใต้เงื่อนไขของเครื่องมือและเงื่อนไขเฉพาะการสกัดกั้นของสายการถดถอยไม่ชัดเจนจากนั้นจึงสามารถใช้วิธีการสอบเทียบจุดเดียว เมื่อปริมาณของตัวอย่างคือ 3 ถึง 5 μlแม้ว่าปริมาณของ antiserum จะเพิ่มขึ้นความเข้มข้นและความขุ่นจะไม่เป็นเส้นตรงและสามารถคำนวณได้หลังจากที่เส้นโค้งถูกแปลงเป็นเส้นตรงเท่านั้น (4) ปัจจัยรบกวนหลักคือความขุ่นของซีรัมเอง (เช่นเซรั่มไขมันสูง) และวิธีการปรับสภาพเช่นอัลตร้าเซนทริกูเวชั่นหรือไลเปสไฮโดรไลซิสไม่สามารถนำไปใช้ได้จริง ผลของความขุ่นกับสารลดแรงตึงผิวก็มี จำกัด เช่นกันดังนั้นจึงต้องทำหลอดเปล่าในการทดสอบ นอกเหนือจากวิธีการสองจุดที่ใช้ในการวิเคราะห์อัตโนมัติมันเป็นความผิดพลาดที่จะใช้รีเอเจนต์เดี่ยวด้วยตนเองโดยไม่ต้องลบตัวอย่างเปล่า เพื่อที่จะลดผลกระทบของเมทริกซ์ที่มีต่อการตอบสนองต่อความขุ่นต้องใช้เซรั่มที่มีค่าคงที่เป็นเครื่องสอบเทียบ นอกจากนี้จะต้องไม่รวมสิ่งรบกวนเช่นฝุ่นละอองและรอยขีดข่วนที่ขุ่น (5) ชุดทางการค้าบางตัว (รวมถึงผลิตภัณฑ์ที่นำเข้าบางตัว) มีค่าซีรั่มการสอบเทียบที่ไม่ถูกต้องซึ่งเป็นแหล่งที่มาของข้อผิดพลาดที่สำคัญ 2. จรวดอิเล็กโทร: (1) การเลือกปัจจัยเจือจางแอนติเจนและปริมาณของ antiserum ควรมีความชัดเจนความชันของเส้นโค้งการสอบเทียบอยู่ในระดับปานกลางและเส้นโค้งการจัดตำแหน่งนั้นเหมาะสม วิธีการวัดพร้อมกัน apoA-I และ apoB และควรปรับปริมาณของ antisera ทั้งสองเพื่อให้ความสูงสูงสุดของทั้งสองนั้นแตกต่างกันและความสูงสูงสุดของ apoB ไม่น้อยกว่า 1 ซม. (2) Antisera จากแหล่งต่าง ๆ (เช่นกระต่ายและแกะ) ทดสอบในราคาที่เท่ากันผลลัพธ์จะแตกต่างกัน การทดสอบ apoA-I นั้นเป็นวิธีป้องกันกระต่ายที่ดีกว่า เมื่อใช้เซรั่มกระต่ายรูปร่างสูงสุดจะแหลมและยอดสูงสุดที่ผลิตโดยซีรัมแกะนั้นหนายอดปลายยอดจะกลมและทื่อและบางครั้งก็มีภาพผีปรากฏขึ้นมาก่อนยอดเขา ความชันของกราฟการปรับเทียบสำหรับซีรั่มการสอบเทียบนั้นแตกต่างกัน อย่างไรก็ตามไม่ว่าจะใช้ antiserum ใดก็ตามผลลัพธ์เชิงปริมาณไม่แตกต่างกันมากนัก (3) อิเล็กโทรโฟรีซิสภายใต้เงื่อนไขบางอย่างความสูงสูงสุดของซีรั่มการสอบเทียบของการเจือจางที่แตกต่างกันจะไม่เปลี่ยนแปลงอย่างมีนัยสำคัญและความชันของเส้นโค้งการสอบเทียบนั้นเหมือนกัน หากความสูงสูงสุดของชิ้นงานเกินช่วงโค้งการปรับเทียบควรปรับและทดสอบการเจือจางของชิ้นงานทดสอบอีกครั้ง CV ระหว่างบอร์ดมักจะน้อยกว่า 5% (4) ผลของอิเล็กโทรโฟเรซิสสามารถเห็นได้จากการย้อมสีหรือการสังเกตด้วยสายตาโดยตรงจากจุดสูงสุดของจรวด อดีตใช้ชิ้นงานทดสอบน้อยกว่าและบันทึก antiserum แต่ถ้าชิ้นงานตัวอย่างและ antiserum เพิ่มขึ้นอย่างเหมาะสมจะสะดวกกว่าที่จะไม่เปื้อน agarose ที่ใช้ควรเป็น electroosmotic มาตรฐานหรือ hypotonic การเพิ่มปริมาณที่เหมาะสมของ dextran หรือ polyethylene glycol ในเจลจะทำให้จรวดมีความชัดเจนมากขึ้น (5) การวัดยอดจรวดสามารถคำนวณพื้นที่หรือความสูงสูงสุดและพื้นที่คือความสูงสูงสุดคูณด้วยความกว้างสูงสุด (ความกว้างที่ความสูงครึ่งหนึ่งของจุดสูงสุด) ความแม่นยำในการวัดยิ่งกว่า 0.1 มม. ต้องใช้อุปกรณ์ขยายสัญญาณเชิงกลหรืออิเล็กทรอนิกส์ ความสูงสูงสุดในช่วงของเส้นโค้งมาตรฐานจะดีกว่า 1 ถึง 4 ซม. (6) กฎหมายนี้ใช้กับการวิเคราะห์ตัวอย่างจำนวนเล็กน้อย ยังเหมาะสำหรับการคำนวณ apoAII, CI, CII, CIII, D, E และ Lp (a) กระบวนการตรวจสอบ 1. วิธีการวัดความขุ่น Immunoturbidimetric: (1) ตัวอย่างควรเป็นซีรัมที่แยกตัวเร็วซึ่งสามารถแยกได้ในเวลาซึ่งสามารถเก็บไว้ในตู้เย็นที่อุณหภูมิ 2 ถึง 6 °ซวัดได้ภายใน 1 สัปดาห์และเก็บไว้ที่ -20 ° C นานครึ่งปี (2) เมื่อใช้เครื่องวิเคราะห์อัตโนมัติอย่างสมบูรณ์ควรเลือกอัตราส่วนของแอนติเจนต่อแอนติบอดีและเวลาปฏิกิริยาตามพารามิเตอร์การออกแบบเครื่องมือที่แตกต่างกันอย่างสมเหตุสมผล นอกจากนี้ยังสามารถใช้เป็นอัตราการกระจัดกระจาย nephelometry CM เช่น Beckman turbidimeter ICS หรือระบบ proteinarray) (3) เครื่องมือที่ใช้ในวิธีการด้วยตนเอง: เครื่องวัดความแม่นยำด้วยตัวกรอง 340nm (หรือตัวแยก) ปริมาตรตัวอย่างโดยเฉพาะอย่างยิ่ง 0.5ml (เพื่อบันทึก antiserum) โดยเฉพาะอย่างยิ่งกับถ้วยไหลการเจือจางตัวอย่างจะเจือจางที่ดีที่สุด ตัวอย่างที่ถูกต้อง (4) การรักษาตัวอย่าง: ตัวอย่างซีรั่มและซีรั่มควบคุมคุณภาพเจือจาง 1: 200 โดยใช้ตัวอย่างเจือจางนั่นคือเจือจางเป็นครั้งแรก 1:20 (5.0 μlซีรั่ม + 95 เจือจางμl) แล้วเจือจาง 1:10 ( เกิน 1:20 เซรั่มเพื่อหา apoB) หลังจากผสมจะได้รับอนุญาตให้ยืนที่ 25 ถึง 37 ° C เป็นเวลา 30 นาทีและมีความขุ่นที่ความยาวคลื่น 340 nm ผลที่ได้อ่านบนเส้นโค้งมาตรฐานตามค่า A ของ U-UB วิธีนี้มีประวัติย่อ <5% (5) เส้นโค้งการปรับเทียบ: สำหรับการทำงานด้วยตนเองและกึ่งอัตโนมัติแต่ละชุดจะต้องใช้เส้นโค้งการปรับเทียบและซีรัมการสอบเทียบสามารถเจือจางเป็นสี่ความเข้มข้น 1: 100, 1: 200, 1: 300 และ 1: 400 ซึ่งเหมือนกับตัวอย่าง การดำเนินการคำนวณความเข้มข้น CM ของแต่ละหลอดมาตรฐานตามค่าคงที่และวางแผนความเข้มข้น (X) ด้วยค่า A (Y) ที่สอดคล้องกัน (คำนวณโดยการถดถอยเชิงเส้น) ซึ่งเป็นพื้นตรง แต่โดยทั่วไปมีการสกัดกั้นแกน Y บางอย่าง ดังนั้นคุณไม่สามารถใช้มาตรฐานจุดเดียว เมื่อการดำเนินการถูกต้องค่าสัมประสิทธิ์สหสัมพันธ์ระหว่างความเข้มข้นและค่า A ควรมากกว่า 0.985 หากมีการสอบเทียบสามซีรั่มที่ความเข้มข้นสูงปานกลางและต่ำก็สามารถดำเนินการในลักษณะเดียวกับตัวอย่างและสามารถใช้สำหรับการสอบเทียบสามจุดนอกจากนี้ยังสามารถใช้สำหรับการสอบเทียบห้าจุดได้ (เช่นเซรั่มเข้มข้นปานกลาง ความเข้มข้นของซีรั่มถูกผสมในปริมาณที่เท่ากันเพื่อกลายเป็นซีรั่มการสอบเทียบอีกสองตัว) ช่วงเชิงเส้นของวิธีนี้: 0.4 ~ 2.5g / ลิตร 2. จรวดอิเล็กโทร: (1) แผ่นเท: 10g / L agarose 10ml ต่อแผ่นละลายในอ่างน้ำเดือดผสมให้เข้ากันเพิ่ม50μlของ CM antiserum และ apoB antiserum 8μlเมื่อเย็นถึง 50 ~ 55 ° C (ปริมาณขึ้นอยู่กับ antiserum titer) ) ผสมอย่างรวดเร็วและเทลงบนแผ่นแก้วที่ตั้งไว้ล่วงหน้าบนแพลตฟอร์มน้ำเย็นแล้ววางไว้ที่ 4 ° C หลังจาก 20 นาทีเจาะรูหลุมที่ปลายแคโทดของแผ่นเส้นผ่าศูนย์กลางรู 3 มม. ระยะห่างหลุมอย่างน้อย 5 มม. และความจุของหลุมคือ 5 μl วางแผ่นในถังอิเล็กโทรและสะพานด้วยกระดาษกรอง (2) การเจือจางแอนติเจน: ซีรั่มการสอบเทียบถูกเจือจางเป็น 1: 100, 1: 150, 1: 200, 1: 300, และ 1: 400 (สำหรับเส้นโค้งการปรับเทียบ) ด้วยสารละลาย 0.15 mol / L NaCl และตัวอย่างซีรัมคือ 1: ปรับลดใน 200 ใส่ตู้เย็นที่ 4 ° C เป็นเวลาไม่เกิน 3 วัน (3) กำลังโหลด: 5 μl (ถูกต้อง) ของซีรั่มเจือจางและตัวอย่างถูกถ่ายในสถานะปัจจุบันต่ำ (10 mA / แผ่น) และเพิ่มตัวอย่าง agarose gel คณะกรรมการแต่ละคนจะต้องทำชุดของมาตรฐาน (4) Power-on: การไหลคงที่ 24 mA / แผ่นแรงดันไฟฟ้าเทอร์มินัล 6 ~ 8V / cm ระบายความร้อนด้วยน้ำไหลเพื่อรักษา agarose 15 ° C อิเล็กโทร 3 ~ 4h (5) Deproteinization และฟิล์มแห้ง: แผ่น agarose หลังจากอิเลคโตรโฟรีซิสถูกแช่ใน 0.15mol / L NaCl เป็นเวลา 30 นาทีและวางฟิล์มลงบนแผ่นฟิล์มโพลีเอสเตอร์และทำให้แห้งโดยความดันเบาภายใต้กระดาษกรองหลายชั้น ความชื้นในกาวจะถูกทำให้แห้งตามธรรมชาติด้วยกระดาษกรองฟิล์มและฟิล์มโพลีเอสเตอร์หรือเป่าด้วยเครื่องเป่าลมร้อนหลังจากการอบแห้งฟิล์มจะถูกแยกออกจากกระดาษกรองและฟิล์มโพลีเอสเตอร์ตามธรรมชาติ (6) การย้อมสี: ภาพยนตร์ agarose แช่อยู่ในสารละลายย้อมสีเป็นเวลา 20 ถึง 30 นาที (7) การลดสี: แช่ฟิล์มสีย้อมด้วยน้ำยาล้างสีจนกว่าจุดสูงสุดของจรวดจะชัดเจนและพื้นหลังไม่มีสี มันสามารถจับยึดในสองชิ้นของกระดาษแก้วในน้ำและสามารถเก็บไว้เป็นเวลานานหลังจากการอบแห้ง นอกจากนี้ยังสามารถแช่ในน้ำไหลเพื่อลบพื้นหลัง หมายเหตุ: 1 ควรเลือกสัดส่วนการเจือจางของแอนติเจนและปริมาณของ antiserum เพื่อให้จุดสูงสุดของจรวดมีความชัดเจนความลาดชันของเส้นโค้งการสอบเทียบอยู่ในระดับปานกลางและมีความเหมาะสม วิธีการวัดพร้อมกัน apoA-I และ apoB และควรปรับปริมาณของ antisera ทั้งสองเพื่อให้ความสูงสูงสุดของทั้งสองนั้นแตกต่างกันและความสูงสูงสุดของ apoB ไม่น้อยกว่า 1 ซม. 2 มีการทดสอบ antiserums ที่แตกต่างกัน (เช่นกระต่ายและแกะ) ในราคาที่เท่ากันและผลลัพธ์จะแตกต่างกัน การทดสอบ apoA-I นั้นเป็นวิธีป้องกันกระต่ายที่ดีกว่า เมื่อใช้เซรั่มกระต่ายรูปร่างสูงสุดจะแหลมและยอดสูงสุดที่ผลิตโดยซีรัมแกะนั้นหนายอดปลายยอดจะกลมและทื่อและบางครั้งก็มีภาพผีปรากฏขึ้นมาก่อนยอดเขา ความชันของกราฟการปรับเทียบสำหรับซีรั่มการสอบเทียบนั้นแตกต่างกัน อย่างไรก็ตามไม่ว่าจะใช้ antiserum ใดก็ตามผลลัพธ์เชิงปริมาณไม่แตกต่างกันมากนัก 3 อิเล็กโตรโฟรีซีสภายใต้เงื่อนไขบางอย่างความสูงสูงสุดของซีรั่มการสอบเทียบของการเจือจางที่แตกต่างกันจะไม่เปลี่ยนแปลงอย่างมีนัยสำคัญและความชันของเส้นโค้งการสอบเทียบนั้นเหมือนกัน หากความสูงสูงสุดของชิ้นงานเกินช่วงโค้งการปรับเทียบควรปรับและทดสอบการเจือจางของชิ้นงานทดสอบอีกครั้ง CV ระหว่างบอร์ดมักจะน้อยกว่า 5% 4 สามารถสังเกตผลของอิเล็กโทรโฟเรซิสได้โดยการย้อมสีหรือการสังเกตด้วยสายตาโดยตรงจากจุดสูงสุดของจรวด อดีตใช้ชิ้นงานทดสอบน้อยกว่าและบันทึก antiserum แต่ถ้าชิ้นงานตัวอย่างและ antiserum เพิ่มขึ้นอย่างเหมาะสมจะสะดวกกว่าที่จะไม่เปื้อน agarose ที่ใช้ควรเป็น electroosmotic มาตรฐานหรือ hypotonic การเพิ่มปริมาณที่เหมาะสมของ dextran หรือ polyethylene glycol ในเจลจะทำให้จรวดมีความชัดเจนมากขึ้น 5 การวัดยอดจรวดสามารถคำนวณพื้นที่หรือความสูงสูงสุดและพื้นที่คือความสูงสูงสุดคูณด้วยความกว้างสูงสุด (ความกว้างที่ความสูงครึ่งหนึ่งของจุดสูงสุด) ความแม่นยำในการวัดยิ่งกว่า 0.1 มม. ต้องใช้อุปกรณ์ขยายสัญญาณเชิงกลหรืออิเล็กทรอนิกส์ ความสูงสูงสุดในช่วงของเส้นโค้งมาตรฐานจะดีกว่า 1 ถึง 4 ซม. 6 วิธีนี้ใช้ได้กับการวิเคราะห์ตัวอย่างจำนวนเล็กน้อย ยังเหมาะสำหรับการคำนวณ apoAII, CI, CII, CIII, D, E และ Lp (a) ไม่เหมาะกับฝูงชน ไม่มีเลย ปฏิกิริยาและความเสี่ยงที่ไม่พึงประสงค์ ไม่มีเลย