การตรวจโครมาตินของเซลล์น้ำคร่ำ

การเจาะน้ำคร่ำสามารถกำหนดเพศของทารกในครรภ์และวินิจฉัยโรคทางเพศสัมพันธ์ทางอ้อมเช่นความผิดปกติ แต่กำเนิด, ข้อบกพร่องการเผาผลาญ แต่กำเนิด, ความผิดปกติของโครโมโซมและโรคติดต่อทางเพศสัมพันธ์เพื่อป้องกันการเกิดของเด็กที่มีโรคทางพันธุกรรม . การเจาะน้ำคร่ำมักดำเนินการในไตรมาสที่สอง (16-21 สัปดาห์ของการตั้งครรภ์) ควรระบายปัสสาวะก่อนการผ่าตัดด้วยมือทั้งสองข้างที่สะโพกแล้วค่อย ๆ หมุนเอวและหน้าท้อง จากนั้นนอนหงายใช้ B-ultrasound เพื่อตรวจจับตำแหน่งเลือกจุดเจาะและเจาะภายใต้สภาวะการทำงานที่ปลอดเชื้ออย่างเข้มงวด ข้อมูลพื้นฐาน หมวดหมู่ผู้เชี่ยวชาญ: การตรวจสอบการตรวจมารดาหมวดหมู่: การทดสอบทางพันธุกรรม (DNA) บังคับเพศ: ไม่ว่าผู้หญิงจะถือศีลอด: การอดอาหาร ผลการวิเคราะห์: ต่ำกว่าปกติ: ค่าปกติ: ไม่ เหนือปกติ: เชิงลบ: ค่าปกติเป็นค่าลบ: X chromatin:> 0.06 สำหรับทารกในครรภ์หญิงและ 0.05 สำหรับทารกในครรภ์ชาย, บวก: ความน่าจะเป็นของการเกิด X-linked recessive recessive disease ขึ้นอยู่กับผลลัพธ์ เคล็ดลับ: การทำถุงน้ำคร่ำมักจะทำในไตรมาสที่สอง (16-21 สัปดาห์ของการตั้งครรภ์) ค่าปกติ X chromatin> 0.06 สำหรับตัวอ่อนหญิง, <0.05 สำหรับตัวอ่อนตัวผู้ Y chromatin> 0.05 เป็นทารกในครรภ์เพศชายและ <0.04 เป็นทารกในครรภ์หญิง ความสำคัญทางคลินิก สำหรับครอบครัวที่มีประวัติครอบครัวของโรค X-linked ถอยทางพันธุกรรมฟีโนไทป์ของผู้ปกครองเป็นเรื่องปกติถ้าแม่เป็นพาหะของยีนที่ก่อให้เกิดโรคความน่าจะเป็นของลูกชายของเด็กคือ 50% ลูกสาวเป็นปกติฟีโนไทป์เมื่อครึ่ง อาจจะเป็นพาหะ เมื่อพ่อเป็นผู้ป่วยลูกชายเป็นปกติและลูกสาวเป็นพาหะทั้งหมดเช่นฮีโมฟีเลีย A, ฮีโมฟีเลีย B, การขาดกลูโคส -6- ฟอสเฟตดีไฮโดรจีเนส, ตาบอด - เขียว - แดง, pseudohypertrophic กล้ามเนื้อเสื่อม, การขาดแกมมาโกลบูลิน แต่กำเนิด ผลลัพธ์ในเชิงบวกอาจเป็นโรค: ตาบอดสีข้อควรระวังฮีโมฟีเลีย การเจาะน้ำคร่ำมักดำเนินการในไตรมาสที่สอง (16-21 สัปดาห์ของการตั้งครรภ์) ควรระบายปัสสาวะก่อนการผ่าตัดด้วยมือทั้งสองข้างที่สะโพกแล้วค่อย ๆ หมุนเอวและหน้าท้อง จากนั้นนอนหงายใช้ B-ultrasound เพื่อตรวจจับตำแหน่งเลือกจุดเจาะและเจาะภายใต้สภาวะการทำงานที่ปลอดเชื้ออย่างเข้มงวด โดยทั่วไปแล้วน้ำคร่ำประมาณ 20 มิลลิลิตรจะถูกนำไปวางในหลอดหมุนเหวี่ยงที่สะอาดและผ่านการฆ่าเชื้อเพื่อการตรวจสอบทันที กระบวนการตรวจสอบ (1) ใช้น้ำคร่ำ 15 ถึง 30 มล. เป็นเวลา 16 ถึง 20 สัปดาห์ของการตั้งครรภ์และหมุนเหวี่ยงที่ 1000 r / ml เป็นเวลา 10 นาที (2) ทิ้งส่วนเกินส่วนเกินออกไป 1 มิลลิลิตรของน้ำคร่ำและเซลล์ที่ตกตะกอนแล้วค่อย ๆ กระจายลงในการระงับเซลล์ (3) ถ่ายโอนลงในขวดเพาะเลี้ยงขนาด 25 มล. เพิ่มสื่อ 3 มล. ที่มีค่า pH 6.5 ถึง 6.8 (บรรจุเพนิซิลิน 100 U / ml, สเตรปโตมัยซิน 100 ไมโครกรัม / มล.) และซีรั่มลูกวัว 1 มล. (4) พบว่ามีจำนวนเซลล์ที่คล้ายกับไฟโบรบลาสต์หรือเซลล์เยื่อบุผิว epithelioid เป็นจำนวนมากหลังจากผ่านไป 7-10 วัน สื่อสดสามารถแลกเปลี่ยนได้ในเวลานี้ (5) เมื่ออาณานิคมของเซลล์ถูกขยายออกเป็นชิ้น ๆ และมีเซลล์ที่แบ่งเป็นวงกลมโปร่งแสงจำนวนมากสามารถเพิ่มโคลชิซินเพื่อทำให้ความเข้มข้นสุดท้ายอยู่ที่ 0.1-0.3 ไมโครกรัมต่อมิลลิลิตร (ขั้นตอนข้างต้นทั้งหมดดำเนินการภายใต้เงื่อนไขปลอดเชื้อ) มาตรฐานการเก็บเกี่ยว: 1 ที่มีไฟโบรบลาสต์เป็นชนิดหลักการเติบโตของเซลล์ 2 กับ 10 eyepieces และการสังเกตวัตถุประสงค์ 20x โคลนเซลล์ที่กำลังเติบโตครอบคลุม 1 หรือมากกว่ามุมมองที่สมบูรณ์ 3 ดูมากกว่า 10 โปร่งแสง เซลล์รูปกลมและเซลล์ที่มีความสว่างมากกว่า 10 คู่ (6) หากเซลล์ไม่เติบโตอย่างแรงวงจรการเติบโตไม่สม่ำเสมอหรือเซลล์มีอายุและมาตรฐานการเก็บเกี่ยวไม่ถึงวัฒนธรรมย่อยสามารถดำเนินต่อไปในขวดดั้งเดิม วิธีการ: ภายใต้สภาวะที่ปลอดเชื้อ, วิธีการเพาะเชื้อจะถูกรินครั้งแรก, และเติมสารละลายทริปซิน trypsin ที่ปราศจากเชื้อ 2.5 g / L สองสามหยด, และส่วนผสมถูกเขย่าและเทลงไป นอกจากนี้ทริปซินลดลง 5 ถึง 10 หยดและเขย่าเบา ๆ ที่ 37 ° C ประมาณ 5 นาทีเพื่อให้เซลล์สานุศิษย์หลุดร่วง เติมซีรัมลูกวัวสดขนาด 4 มล. และเติมเชื้อในอุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 4 ถึง 5 ชั่วโมง เปลี่ยนสื่อวัฒนธรรมอย่างระมัดระวังและทำการเพาะปลูกต่อไปมันสามารถเก็บเกี่ยวได้ 3 ถึง 5 วันหลังจากเนื้อเรื่อง (7) ถ่ายโอนสารละลายวัฒนธรรมไปยังหลอดหมุนเหวี่ยงที่สำเร็จการศึกษาเพิ่ม ED-TA-trypsin 1 มิลลิลิตรลงในขวดวางในตู้อบ 37 ° C เป็นเวลา 5 นาทีแล้วล้างเซลล์ที่เชื่อมต่อด้วยปิเปตข้อศอก (2.5 กรัม / สามารถใช้งานได้) L trypsin ย่อยสลายสารละลาย) เซลล์ที่แยกออกจากผนังขวดถูกเทลงในหลอดหมุนเหวี่ยงผสมกับเฟสของเหลววัฒนธรรมดั้งเดิมและขวดวัฒนธรรมถูกล้างด้วยน้ำเกลือทางสรีรวิทยาที่อบอุ่นในปริมาณเล็กน้อยและเซลล์ที่ล้างแล้วก็ถูกเทลงในหลอดหมุนเหวี่ยงที่ 1000 r / นาทีเป็นเวลา 10 นาที (8) ดูด supernatant เพิ่ม 3 ถึง 5 มล. ของ 0.075 mol / L KCl แก้ปัญหา hypotonic ก่อนอุ่นที่ 37 ° C และตั้งที่ 37 ° C เป็นเวลา 10 ถึง 15 นาที (9) การตรึงการตรึงและการเตรียมตัวล่วงหน้าเหมือนกับวิธีเตรียมของโครโมโซมตัวอย่างเซลล์เม็ดเลือดส่วนปลาย ไม่เหมาะกับฝูงชน 1. มีสัญญาณของการทำแท้งในระหว่างตั้งครรภ์ 2. เมื่ออุณหภูมิของร่างกายเกิน 37.5 ° C 3. การผลัดเซลล์ต้นรก, การติดเชื้อในช่องท้องและหนอง ปฏิกิริยาและความเสี่ยงที่ไม่พึงประสงค์ (1) การบาดเจ็บของมารดา: เข็มเจาะแทงแผลหลอดเลือดที่เกิดจากผนังหน้าท้องเลือดห้อเลือดมดลูก subserosal บางครั้งน้ำคร่ำจะเข้าสู่การไหลเวียนโลหิตของมารดาจากรูเจาะและทำให้เกิดภาวะเส้นเลือดขอดที่น้ำคร่ำ กระเพาะปัสสาวะไม่ถูกระบายออกก่อนการเจาะและกระเพาะปัสสาวะได้รับบาดเจ็บ (2) การบาดเจ็บของทารกในครรภ์, รกและสายสะดือ: เข็มเจาะสามารถสร้างความเสียหายให้กับทารกในครรภ์และอาจทำให้เกิดเลือดออกและรกและสายสะดืออาจทำให้เกิดเลือดออกหรือห้อเลือด ดังนั้นควรระบุแหล่งที่มาของการมีเลือดออกเมื่อถ่ายน้ำคร่ำในภาวะเลือดออก หากคุณสงสัยว่าคุณมาจากทารกในครรภ์คุณควรฟังหัวใจของทารกในครรภ์ต่อไป (3) การรั่วไหลของน้ำคร่ำ: น้ำคร่ำหลังการรั่วไหลจากรูเข็มทำให้เกิดน้ำคร่ำน้อยเกินไปส่งผลต่อการพัฒนาของทารกในครรภ์และอาจทำให้เกิดการคลอดก่อนกำหนดหรือการคลอดก่อนกำหนด (4) การทำแท้งหรือการคลอดก่อนกำหนด: อุบัติการณ์ของการทำแท้งหรือการคลอดก่อนกำหนดคือ 0.1% -0.2% มักจะเกิดขึ้นภายในหนึ่งสัปดาห์หลังการผ่าตัดแม้หลังจากการเจาะการแตกก่อนวัยอันควรของเยื่อหุ้มนำไปสู่การคลอดก่อนกำหนด (5) การติดเชื้อในมดลูก: อาจมีไข้มารดาหลังการผ่าตัด การติดเชื้อในมดลูกอาจทำให้ทารกในครรภ์มีการพัฒนาที่ผิดปกติหรืออาจทำให้ทารกในครรภ์ตายได้ ดังนั้นการเจาะน้ำคร่ำควรเป็นปลอดเชื้ออย่างเคร่งครัด