Apolipoprotein AⅡ

Apolipoprotein ist eine Plasma-Lipoprotein-Fraktion, die eine Vielzahl von Lipoproteinen und mehrere verschiedene spezifische Apolipoproteine ​​enthält. Bisher wurden mehr als 20 Arten von Apolipoproteinen entdeckt. Unter diesen sind hauptsächlich aPOA1, AII, B-100, B48, CI, CII, CIII, D, E und dergleichen. Grundlegende Informationen Fachklassifikation: kardiovaskuläre Untersuchung Klassifikation: biochemische Untersuchung Anwendbares Geschlecht: ob Männer und Frauen Fasten anwenden: Fasten Tipps: Vermeiden Sie in der letzten Mahlzeit vor der Blutentnahme fettreiche Speisen und Getränke. Fasten Sie 12 Stunden lang und entnehmen Sie Unterarmvenenblut. Normalwert 250 ~ 520 mg / l Klinische Bedeutung Reduziert bei koronaren Herzerkrankungen, Diabetes, nephrotischem Syndrom, hereditärem ApoA-I-Mangel (Tangier-Krankheit), familiärer niedriger Alpha-Lipoproteinämie, Fischaugenerkrankung, schwerer Mangelernährung, aktiver Hepatitis und Leberfunktion. Geringe Ergebnisse können Krankheiten sein: Koronare Herzkrankheit, Überlegungen zu Diabetes (1) Immunturbidimetrie: 1 Bezüglich Antiserum: Der turbidimetrische Assay stellt höhere Anforderungen an Antiserum als andere Methoden. Das turbidimetrische Verfahren ist vorzugsweise ein polyklonaler Antikörper. Antiserum muss frei von Antiserum sein. Das aus Humanserum extrahierte ApoA-II muss besonders beachtet werden, um Immunreinheit, chromatographische Reinheit und Elektrophoresereinheit zu erzielen, was im allgemeinen Labor nicht möglich ist. Der Antiserumtiter (Titer) sollte nicht unter 16 liegen. Gegenwärtig weist das ApoA-II-Antiserum in einigen im Handel erhältlichen Haushaltsreagenzien einen extrem niedrigen Titer auf, weshalb Sie beim Kauf des Kits aufpassen müssen. Wenn Sie vor dem Kauf keine Erfahrung mit der Identifizierung der Antisera-Qualität haben, sollten Sie das qualifizierte Gerät bitten, diese zu identifizieren. 2 Die obere Standardprobe (Serum) wird für den manuellen Betrieb 200-fach verdünnt (100 μl Probe), und wenn ein Präzisionsprobenehmer vorhanden ist, kann sie 20-fach verdünnt werden (unter Verwendung von 10 μl). Um sich an die Bedingungen verschiedener Laboratorien anzupassen (z. B. an verschiedene Arten von automatisierten Instrumenten), sollte der Anteil an Antigen-Antikörper beachtet werden, wenn geeignete Modifikationen vorgenommen werden. Es muss beachtet werden, dass das Reaktionssystem keinen Antigenüberschuss aufweist und die lineare Obergrenze nicht unter 2,5 g / l liegen sollte. Mit anderen Worten, die Menge an Antiserum muss ausreichend sein, andernfalls sind die Ergebnisse gering, wenn das ApoA-I in der Probe hoch ist. Gegenwärtig haben einige Hausarzneimittelkits nicht nur einen niedrigen Antiserumtiter, sondern die Dosierung der Proben bei der Operation ist zu hoch (wie 3 bis 5 & mgr; l), der Antikörper ist offensichtlich unzureichend und die gemessenen Ergebnisse sind unvermeidlich ungenau. 3 Um eine genaue Messung zu erreichen, müssen die Ergebnisse der Kalibrierungskurvenberechnung in der ApoA-II- und B-Trübungsmessung (Endpunktmethode) durchgeführt werden. Eine bestimmte Bereichskonzentration (niedrige Probendosis) (X) ist im Wesentlichen linear mit der Trübung (Y), und die lineare Regression berechnet einen bestimmten Achsenabschnitt auf der Y-Achse (A-Wert <0,1), sodass die Abweichung des Berechnungsergebnisses durch Einzelpunktkalibrierung berechnet wird. Größer, die gemessenen Ergebnisse können den Pegel von hoch (hoch niedrig, niedrig hoch) nicht genau wiedergeben. Vernachlässigen Sie wegen der Einfachheit der Einpunktmethode nicht die Genauigkeit der Messung. Unabhängig vom Typ des automatisierten Instruments müssen Sie zuerst die Kalibrierungskurve ausprobieren. Wenn der Test unter den Bedingungen des Instruments und den spezifischen Bedingungen wiederholt wird, ist der Schnittpunkt der Regressionslinie nicht offensichtlich, und es kann die Einpunkt-Kalibrierungsmethode verwendet werden. Beträgt die Probenmenge 3 bis 5 μl, sind die Konzentration und die Trübung nicht linear und können erst nach linearer Umrechnung der Kurve berechnet werden, auch wenn die Menge an Antiserum erhöht wird. 4 Der Hauptinterferenzfaktor ist die Trübung des Serums selbst (wie fettreiches Serum), und die Vorbehandlungsmethoden wie Ultrazentrifugation oder Lipasehydrolyse sind nicht praktikabel. Die Wirkung der Trübung mit Tensiden ist ebenfalls begrenzt, so dass im Assay ein Blindröhrchen hergestellt werden muss. Zusätzlich zu der in der automatisierten Analyse verwendeten Zweipunktmethode ist es ein Fehler, ein einzelnes Reagenz manuell zu verwenden, ohne den Probenrohling zu subtrahieren. Um die Auswirkung von Matrixeffekten auf die Trübungsreaktion zu verringern, muss ein festwertiges Serum als Kalibrator verwendet werden. Außerdem müssen Störungen wie Staubpartikel und trübe Geschirrkratzer ausgeschlossen werden. 5 Einige kommerzielle Kits (einschließlich einiger importierter Produkte) mit ungenauen Kalibrierungsseren sind eine wichtige Fehlerquelle. (2) Raketenelektrophoreseverfahren: 1 Das Verdünnungsverhältnis des Antigens und die Menge an Antiserum sollten so gewählt werden, dass der Raketenpeak klar ist, die Steigung der Kalibrierungskurve moderat ist und die Linie geeignet ist. Das Verfahren misst gleichzeitig ApoA-II und ApoB, und die Menge der beiden Antiseren sollte so eingestellt werden, dass die Peakhöhen der beiden unterschiedlich sind und die ApoB-Peakhöhe nicht weniger als 1 cm beträgt. 2 Verschiedene Arten von Antiserums (wie Kaninchen und Schafe) werden zum entsprechenden Preis getestet, und die Ergebnisse sind unterschiedlich. Der ApoA-I-Assay ist vorzugsweise Kaninchen-Antiserum. Wenn das Kaninchenserum verwendet wird, ist die Peakform scharf und der vom Schafserum erzeugte Peak ist dick, die Peakspitze ist rund und stumpf, und manchmal erscheint ein Geisterbild vor dem Peak. Die Steigung der Eichkurve für das Eichserum ist ebenfalls unterschiedlich. Unabhängig davon, welches Antiserum verwendet wird, sind die quantitativen Ergebnisse nicht sehr unterschiedlich. 3 Elektrophorese Unter bestimmten Bedingungen ändert sich die Peakhöhe des Kalibrierungsserums mit verschiedenen Verdünnungen nicht wesentlich und die Steigung der Kalibrierungskurve ist im Wesentlichen dieselbe. Wenn die Peakhöhe der Probe den Kalibrierungskurvenbereich überschreitet, sollte der Probenverdünnungsfaktor angepasst und erneut getestet werden. Der interne Lebenslauf beträgt in der Regel weniger als 5%. 4 Ergebnisse der Raketenelektrophorese können durch Anfärben oder direkte visuelle Beobachtung des Raketenpeaks beobachtet werden. Ersteres verwendet weniger Proben und spart Antiserum, aber wenn die Proben und das Antiserum entsprechend erhöht werden, ist es bequemer, nicht zu färben. Die verwendete Agarose sollte elektroosmotisch oder hypotonisch sein. Durch Zugabe einer geeigneten Menge Dextran oder Polyethylenglykol zum Gel wird der Raketenpeak klarer. 5 Die Messung des Raketenpeaks kann die Fläche oder Peakhöhe berechnen. Die Fläche ist die Peakhöhe multipliziert mit der Peakbreite (der Breite in der halben Höhe des Peaks). Die Messgenauigkeit beträgt vorzugsweise bis zu 0,1 mm. Es müssen mechanische oder elektronische Verstärkungsgeräte verwendet werden. Die Peakhöhe im Bereich der Standardkurve beträgt vorzugsweise 1 bis 4 cm. 6 Diese Methode ist auf die Analyse einer kleinen Menge von Proben anwendbar. Auch zur Bestimmung von apoAII, CI, CII, CIII, D, E und Lp (a) geeignet. Inspektionsprozess Raketenelektrophorese: 1 Gießplatte: 10 g / l Agarose 10 ml pro Platte, im kochenden Wasserbad schmelzen, gut mischen, 50 μl ApoA-II-Antiserum und 50 μl ApoB-Antiserum in kaltem Zustand auf 50 bis 55 ° C zugeben (die Menge hängt vom Antiserumtiter ab) ), schnell mischen und auf die auf der Wasserplattform voreingestellte Glasplatte gießen, abkühlen lassen und dann bei 4 ° C platzieren, nach 20 min Löcher stanzen, das Loch befindet sich am Kathodenende der Platte, der Lochdurchmesser beträgt 3 mm, der Lochabstand beträgt mindestens 5 mm und das Lochvolumen beträgt 5 μl. Legen Sie die Platte in den Elektrophoresebehälter und überbrücken Sie sie mit Filterpapier. 2 verdünntes Antigen: Das Kalibrierungsserum wurde mit 0,15 mol / l NaCl-Lösung auf 1: 100, 1: 150, 1: 200, 1: 300 und 1: 400 (für die Kalibrierungskurve) verdünnt, und die Serumprobe wurde 1: 200 verdünnt. Stellen Sie den Kühlschrank nicht länger als 3 Tage auf 4 ° C. 3 Laden: Verdünnen Sie das fixierte Serum und die Proben im Niedrigstromzustand (10 mA / Platte), um 5 μl (genau) zu absorbieren, und geben Sie sie in die Agarosegel-Probenvertiefung. Jedes Board muss eine Reihe von Standards erfüllen. 4 Leistung: Gleichmäßiger Fluss 24 mA / Platine, Klemmenspannung 6 ~ 8 V / cm, Kühlung mit fließendem Wasser, um die Agarose bei 15 ° C zu halten, Elektrophorese 3 ~ 4 h. 5 deproteiniertes Protein und trockener Film: Die Agaroseplatte wurde nach der Elektrophorese 30 Minuten in 0,15 mol / l NaCl eingetaucht, und der Film wurde auf den Polyesterfilm gelegt, und der Klebstoff wurde durch das mehrschichtige Filterpapier unter leichtem Druck absorbiert. Befeuchten Sie das Filterpapier, die Folie und die Polyesterfolie und trocknen Sie sie dann zusammen oder trocknen Sie sie mit einem Heißluftgebläse. Nach dem Trocknen trennt sich die Folie auf natürliche Weise vom Filterpapier und der Polyesterfolie. 6 Färbung: Der Agarosefilm wurde 20 bis 30 Minuten in die Färbelösung getaucht. 7 Entfärbung: Tränken Sie den gefärbten Film mit einer Entfärbungslösung, bis der Raketenpeak klar und der Hintergrund im Wesentlichen farblos ist. Es kann in zwei Stück Cellophan in Wasser eingespannt und nach dem Trocknen lange gelagert werden. Es kann auch in fließendem Wasser eingeweicht werden, um den Hintergrund zu entfernen. Nicht für die Menge geeignet Im Allgemeinen keine Menschenmassen. Nebenwirkungen und Risiken 1. Infektion: Achten Sie bei der Entnahme von Blutproben auf aseptische Operationen und stoppen Sie die Blutung nach der Blutentnahme, um eine Kontamination von Wasser und Flüssigkeit zu vermeiden und eine lokale Infektion zu vermeiden. 2, Blutung: nachdem das Blut eine volle Kompressionszeit gegeben wird, besonders Gerinnungsstörung, Blutungsneigung, um lokales subkutanes Durchsickern, Quetschen und Schwellen zu vermeiden.