Zellkultur-Chromosomenuntersuchung des Fruchtwassers

Aufgrund von schädlichen Chemikalien, Röntgenstrahlen, Umwelteinflüssen, fortgeschrittener Schwangerschaft, nahen Verwandten usw., die zu Krankheiten führen, die durch die Variation der Anzahl, Morphologie, Struktur und Kombination von Chromosomen während der Schwangerschaft verursacht werden. Die Chromosomenuntersuchung von Fruchtwasserzellen hat eine große spezifische Bedeutung für die pränatale Diagnose von Chromosomenerkrankungen. Grundlegende Informationen Fachkategorie: Mütteruntersuchungsprüfung Kategorie: Gentests (DNA) Anwendbares Geschlecht: Ob Frauen fasten: Fasten Analyseergebnisse: Unter dem normalen Wert: Normalwert: Nein Überdurchschnittlich: Negativ: Gesamtzahl der Chromosomen: 46. Autosome: 22 Paare (Nummer 1-22). Geschlechtschromosomen: XY für Männer und XX für Frauen. Männlicher Karyotyp: 46, XY. Weiblicher Karyotyp: 46, XX. Positiv: Ergebnisse, die von den normalen Werten abweichen, sind positiv und deuten auf eine angeborene Fehlbildung oder eine andere angeborene Krankheit hin. Tipps: Bei der Chromosomenuntersuchung sollten nach 16 bis 20 Schwangerschaftswochen Fruchtwasserproben entnommen werden. Normalwert Die Gesamtzahl der Chromosomen beträgt 46. 22 Autosomenpaare (nummeriert von 1 bis 22). Das Geschlechtschromosom männlich ist XY und die Frau ist XX. Männlicher Karyotyp 46, XY. Weiblicher Karyotyp 46, XX. Klinische Bedeutung Anormale Chromosomenzahl wie Down-Syndrom (Trisomie 21), Trisomie 18, Trisomie, Trisomie 38, Trisomie 21, angeborenes Hodenhypoplasie-Syndrom, XXY-Synthese Zeichen, Turner-Syndrom, X-Trisomie-Syndrom und Multiple-X-Body-Syndrom. Anormale Chromosomenstruktur wie 4p-Teilmonomersyndrom, 5p-Teilmonomersyndrom, 9p-Teiltrisomiesyndrom, 9q-Teilmonomersyndrom, 21q-Teilmonomersyndrom, 22q-Teilmonomersyndrom, 22q-Teiltrisomie Syndrom usw. Positive Ergebnisse können Krankheiten sein: angeborene Ovarialhypoplasie, pädiatrische Zerebralparese, pädiatrisches Down-Syndrom, pädiatrische Zerebralparese, pädiatrisches Pascal-Syndrom, Diggolger-Syndrom, pädiatrisches Meow-Syndrom, pädiatrische kongenitale Hodenentwicklung Unvollständige Überlegungen zu genetischen Krankheiten 1. Bei der Chromosomenuntersuchung sollten nach 16 bis 20 Schwangerschaftswochen Fruchtwasserproben entnommen werden. 2, diese angeborenen genetischen Erkrankungen haben zugenommen, fehlen, Translokation, Inversion und andere quantitative und strukturelle Anomalien, oft als Syndrom manifestiert. Die meisten Fälle wie multiple Missbildungen, Wachstumsstörungen und geistige Behinderungen führen zu Schwangerschaftsabbrüchen, Frühgeburten oder Totgeburten. Inspektionsprozess (1) Nehmen Sie 15 bis 30 ml Fruchtwasser für 16 bis 20 Wochen der Schwangerschaft und zentrifugieren Sie bei 1000 U / ml für 10 Minuten. (2) Den überschüssigen Überstand verwerfen, 1 ml Fruchtwasser und ausgefällte Zellen zurücklassen und vorsichtig in einer Zellsuspension dispergieren. (3) In einen 25-ml-Quadratkulturkolben überführen, 3 ml eines Mediums mit einem pH-Wert von 6,5 bis 6,8 (enthaltend Penicillin 100 E / ml, Streptomycin 100 μg / ml) und 1 ml Kälberserum zugeben und in einem Inkubator bei 37 ° C inkubieren. (4) Eine große Anzahl von Fibroblasten-ähnlichen oder Epithelioid-Zellkolonien wurde nach 7 bis 10 Tagen Kultur beobachtet. Das frische Medium kann zu diesem Zeitpunkt ausgetauscht werden. (5) Wenn die Zellkolonien in Stücke expandiert sind und es viele durchscheinende, sich kreisförmig teilende Zellen gibt, kann Colchicin zugesetzt werden, um die Endkonzentration von 0,1 bis 0,3 & mgr; g / ml zu erreichen, und dann in einem Inkubator bei 37 ° C für 5 bis 6 Stunden kultiviert werden. (Die obigen Verfahren werden alle unter aseptischen Bedingungen durchgeführt). Erntestandards: 1 mit Fibroblasten als Haupttyp, Wachstum der Zellen, 2 mit 10-fach Okularen und 20-fach objektiver Beobachtung, die wachsenden Zellklone decken 1 oder mehr vollständige Sichtfelder ab, 3 sehen mehr als 10 durchscheinende Runde Zellen und mehr als 10 doppelte runde, hell teilende Zellen. (6) Wenn die Zellen nicht kräftig wachsen, der Wachstumszyklus nicht gleichmäßig ist oder die Zellen altern und der Erntestandard nicht erreicht wird, kann die Subkultur in der ursprünglichen Flasche fortgesetzt werden. Methode: Unter sterilen Bedingungen wurde die Kulturlösung zuerst gegossen, und einige Tropfen von 2,5 g / l steriler Trypsinlösung wurden zugegeben, und die Mischung wurde geschüttelt und gegossen. Ferner wurden 5 bis 10 Tropfen Trypsin zugesetzt und bei 37ºC etwa 5 Minuten lang vorsichtig geschüttelt, um zu bewirken, daß die anhaftenden Zellen abfallen. 4 ml frisches Medium, das Kälberserum enthielt, wurden zugegeben und die Kultur 4 bis 5 Stunden bei 37ºC stehengelassen. Wechseln Sie das Kulturmedium vorsichtig und setzen Sie die Kultur fort. Es kann 3 bis 5 Tage nach der Passage geerntet werden. (7) Die Kulturlösung in ein Messröhrchen überführen, 1 ml ED-TA-Trypsinlösung in den Kolben geben, 5 Minuten in einen Inkubator bei 37 ° C stellen und dann die anhaftenden Zellen mit einer Ellenbogenpipette abspülen (2,5 g / kann auch verwendet werden). Verdau mit L-Trypsinlösung). Die von der Flaschenwand abgelösten Zellen wurden in ein Zentrifugenröhrchen gegossen, mit der ursprünglichen flüssigen Kulturphase gemischt, und der Kulturkolben wurde mit einer kleinen Menge warmer physiologischer Kochsalzlösung gewaschen, und die gewaschenen Zellen wurden ebenfalls in das Zentrifugenröhrchen gegossen und 10 Minuten bei 1000 U / min zentrifugiert. (8) Absaugen des Überstands, Zugabe von 3 bis 5 ml einer auf 37 ° C vorgewärmten hypotonen KCl-Lösung mit 0,075 mol / l und 10 bis 15 min bei 37 ° C. (9) Die Vorfixierung, Fixierung und Präparation entspricht der Präparationsmethode für Chromosomenproben peripherer Blutzellen. Nicht für die Menge geeignet 1. Während der Schwangerschaft gab es Anzeichen für einen Schwangerschaftsabbruch. 2. Wenn die Körpertemperatur 37,5 ° C überschreitet. 3. Frühes Peeling der Plazenta, Bauchinfektion und eitrige. Nebenwirkungen und Risiken (1) Verletzung der Mutter: Stichverletzte Blutgefäße der Punktionsnadel, verursacht durch ein Hämatom der Bauchdecke und des Uterus-Hämatoms der Unterhaut. Gelegentlich gelangt Fruchtwasser aus dem Einstichloch in den mütterlichen Blutkreislauf und führt zu Fruchtwasserembolien. Die Blase wurde vor der Punktion nicht entleert und die Blase wurde verletzt. (2) Verletzung des Fötus, der Plazenta und der Nabelschnur: Die Punktionsnadel kann den Fötus beschädigen und Blutungen verursachen, und die Plazenta und die Nabelschnur können ebenfalls Blutungen oder Hämatome verursachen. Daher sollte die Blutungsquelle bei der Einnahme von hämorrhagischem Fruchtwasser identifiziert werden. Wenn Sie vermuten, dass Sie von einem Fötus stammen, sollten Sie weiterhin auf das fötale Herz hören. (3) Austreten von Fruchtwasser: Nach der Operation tritt Fruchtwasser aus der Lochblende aus, das zu wenig Fruchtwasser verursacht, die Entwicklung des Fötus beeinträchtigt und sogar zu Fehlgeburten oder Frühgeburten führt. (4) Schwangerschaftsabbruch oder Frühgeburt: Die Häufigkeit eines Schwangerschaftsabbruchs oder einer Frühgeburt beträgt 0,1% -0,2% und tritt häufig innerhalb einer Woche nach der Operation auf, selbst nach der Punktion führt ein vorzeitiger Bruch der Membranen zu einer vorzeitigen Entbindung. (5) intrauterine Infektion: Nach der Operation kann es zu Mütterfieber kommen. Eine intrauterine Infektion kann zu einer abnormalen Entwicklung des Fötus oder sogar zum Tod des Fötus führen. Daher sollte die Amniozentese streng aseptisch sein.