Enzymkombinierter Sorptionsassay

Der enzymgebundene Immunosorbens-Assay (im Folgenden als ELISA bezeichnet) ist die am häufigsten verwendete Technik im Enzymimmunoassay. Es dient zum Nachweis des zu testenden Antigens (oder Antikörpers), das in der Vertiefung der Festphasenplatte beschichtet ist. Das heißt, der Antikörper wird mit einem Enzym markiert, und das bekannte Antigen oder der bekannte Antikörper wird an der Oberfläche des Festphasenträgers adsorbiert, und die Antigen-Antikörper-Reaktion wird an der Oberfläche des Festphasenträgers durchgeführt, und die freie Komponente in der flüssigen Phase wird durch Waschen weggewaschen und schließlich von dem Enzym beaufschlagt. Die Farbe wird nach dem Substrat entwickelt, um das Ergebnis zu beurteilen. Grundlegende Informationen Fachklassifizierung: Wachstums- und Entwicklungskontrolle Klassifizierung: Biochemische Untersuchung Anwendbares Geschlecht: ob Männer und Frauen Fasten anwenden: Fasten Tipps: Befolgen Sie bei der Überprüfung die Anweisungen des Arztes. Normalwert Das Verhältnis des zu testenden Serums zum bekannten negativen Serum (P / N) betrug <2,1, und der OD-Wert des zu testenden Serums betrug <0,4, was als negativ beurteilt wurde. Klinische Bedeutung Abnormale Ergebnisse: Das Verhältnis des zu testenden Serums zum bekannten negativen Serum (P / N) ≥ 2,1 und der OD-Wert des zu testenden Serums ≥ 0,4 wird als positiv angesehen. Müssen Sie die Menge überprüfen: Antigen und Antikörper erkennen. Vorsichtsmaßnahmen Kontraindikationen vor der Inspektion: Verschiedene Verpackungslösungen vorbereiten und die Konzentration einstellen. Tabu beim Prüfen: 1. Kontrollieren Sie streng die Faktoren, die die Effizienz der Markierung beeinflussen, wie Temperatur, Zeit, pH-Wert, Enzym- und Antikörpermenge. 2. Wenn Sie die Säule installieren, machen Sie die Säule gleichmäßig, die Zylinderoberfläche ist flach, keine Blasen oder Risse. Inspektionsprozess Üblicherweise verwendete ELISA-Verfahren umfassen ein Doppelantikörpersandwich-Verfahren und ein indirektes Verfahren, wobei das erstere zum Nachweis makromolekularer Antigene und das letztere zum Messen spezifischer Antikörper dient. Indirekter ELISA Diese Methode wird hauptsächlich zum Nachweis von Antikörpern eingesetzt. Das Verfahren für den indirekten ELISA ist wie folgt. (1) Materialien 1 Beschichtungsflüssigkeit, Waschflüssigkeit, Wärmekonservierungsflüssigkeit, Substratflüssigkeit und Stoppflüssigkeit. 2DVH-beschichtetes Antigen, enzymmarkierter Anti-Antikörper, negatives und positives DVH-Referenzserum. 3 ELISA-Detektor, Probenehmer, Polystyrol-Mikroplatte. (2) Verfahrensschritte 1 plus Antigen-Beschichtung → 4 ° C über Nacht, dreimal gewaschen, trocken werfen. 2 plus zu testendes Serum → 2 Stunden bei 37 ° C, dreimal gewaschen, trocken werfen. 3 Fügen Sie den enzymmarkierten Antikörper hinzu → 37 ° C für 2 Stunden, waschen Sie ihn dreimal und werfen Sie ihn trocken. 4 Substratlösung hinzufügen → 37 ° C für 30 Minuten, Stopplösung hinzufügen. 5 Der OD-Wert wurde mit einem ELISA-Detektor gemessen und das P / N-Verhältnis berechnet. 2. Doppelter Antikörper-Sandwich-ELISA Diese Methode wird hauptsächlich zum Nachweis von makromolekularen Antigenen eingesetzt. 1 Fügen Sie über Nacht eine Antikörperbeschichtung → 4 ° C hinzu, waschen Sie sie dreimal und werfen Sie sie trocken. 2 Fügen Sie das zu testende Antigen hinzu → 37 ° C für 30 Minuten, waschen Sie es dreimal und werfen Sie es trocken. 3 Den enzymmarkierten Antikörper → 37 ° C 30 Minuten lang zugeben, dreimal waschen und trocknen. 4 Substratlösung → 37 ° C für 15 Minuten zugeben, Stopplösung zugeben. 5 Der OD-Wert wurde mit einem ELISA-Tester gemessen. Nicht für die Menge geeignet Nicht für die Menge geeignet: Nein. Nebenwirkungen und Risiken Keine verwandten Komplikationen oder Gefahren.