PHA-Lymphozyten-Transformationsassay

Der PHA-Lymphozytentransformationstest ist eine morphologische und biochemische Veränderung, bei der T-Lymphozyten und Mitogene in vitro zusammen kultiviert werden und einige kleine Lymphozyten in unreife Mutterzellen transformiert und einer Mitose unterzogen werden. Methode. Grundlegende Informationen Facharztklassifikation: Onkologische Untersuchung Klassifikation: Immununtersuchung Anwendbares Geschlecht: ob Männer und Frauen Fasten anwenden: nicht Fasten Tipps: Achten Sie auf eine gesunde Ernährung und pflegen Sie gute Laune. Normalwert Zählen von Lymphozyten 200, Identifizieren von Lymphoblasten (mehr als 2 bis 4-mal mehr als normale Lymphozyten, klare Kernmembran, lockerer Kernbelag, feiner Kern, offensichtliche Nukleolen, reichlich vorhandenes Zytoplasma, basophil), vorübergehend Lymphozyten (geringere Volumenänderung, nur die oben genannten offensichtlichen Kernveränderungen), kleine Lymphozyten (etwas größer als rote Blutkörperchen, dichtes Kernchromatin, keine Nukleolen), die Umwandlungsrate wurde gezählt. Die normale dermatologische Konversionsrate liegt über 58%. Klinische Bedeutung Die Abnahme der PHA-Lymphozyten-Transformationsrate ist eine Reaktion auf eine Abnahme der zellulären Immunfunktion. Diese Untersuchung, Dermatologie, wird hauptsächlich für die Klassifizierung von Krankheiten (wie Lepra), die Beurteilung von Krankheiten (wie maligne Hauttumoren), die Beobachtung der Arzneimittelwirksamkeit und einige Studien zu Immundefekten und allergischen Hauterkrankungen verwendet. Ungewöhnliches Ergebnis Verschiedene Symptome durch verminderte Immunfunktion. Die untersuchungsbedürftige Person steht im Verdacht, an Symptomen von Lepra oder maligner Hauterkrankung zu leiden. Vorsichtsmaßnahmen 1. Die Zusammensetzung des Mediums hat einen großen Einfluss auf die Konversionsrate, achten Sie auf die effektive Zeit. 2. Kälberserum sollte vor Gebrauch inaktiviert werden. 3. Achten Sie beim Kultivieren darauf, dass genügend Gas vorhanden ist.Im Allgemeinen sollte die Gesamtmenge an Flüssigkeit in der 10-ml-Kulturflasche 2 ml nicht überschreiten. 4. Eine zu hohe PHA-Dosis ist für die Zellen toxisch und zu gering, um die Lymphozytentransformation zu stimulieren. Die Dosis der PHA-Umwandlungsreaktion sollte vor dem Test bestimmt werden. 5. Im Versuch sollte ein strenger aseptischer Betrieb durchgeführt werden, um eine Verschmutzung zu vermeiden. Tabu vor dem Test: Achten Sie auf eine gesunde Ernährung und pflegen Sie gute Laune. Voraussetzungen für die Inspektion: Aktiv mit dem Arzt zusammenarbeiten. Inspektionsprozess Betriebsmethode: 1. Nehmen Sie aseptisches Heparin-Antikoagulans 0,1 ml, geben Sie 1,8 ml Zellkulturmedium hinzu, geben Sie 1000 μg / m 1 PHA 0,1 ml hinzu, kontrollieren Sie das Röhrchen ohne PHA, kultivieren Sie die Zellen bei 37 ° C, 5% CO2 für 3d, schütteln Sie 1 pro Tag Times. 2. Am Ende der Kultur wurde der größte Teil des Überstands verworfen und 8,5 g / l NH & sub4; Cl & sub4; ml wurden zugegeben und gemischt und 10 Minuten in ein Wasserbad von 37ºC gestellt. 10 Minuten bei 3.2500 U / min zentrifugieren, den Überstand verwerfen, 5 ml Fixiermittel zum Pellet geben und 5 Minuten bei Raumtemperatur stehen lassen. 10 Minuten bei 4.2500 U / min zentrifugieren, den Überstand verwerfen, 0,2 ml pelletierte Zellen für die Tablettierung belassen und schnell trocknen. 5. Giemsa-Färbelösung wird 10-20 min gefärbt, mit Wasser gewaschen und getrocknet. 6. Ölspiegel Zählt die Anzahl der in 200 Lymphozyten transformierten Zellen und berechnet die Konversionsrate. Das Ergebnis wird beurteilt: 1. Morphologische Kriterien von Lymphoblasten: die Größe des Kerns, das Verhältnis von Kern zu Zytoplasma, die Färbung des Zytoplasmas und die Struktur des Kerns sowie die Anwesenheit oder Abwesenheit von Nukleolen. (1) Reife kleine Lymphozyten: Die Größe der nicht kultivierten kleinen Lymphozyten beträgt 6 bis 8 & mgr; m, die Kernfärbung ist dicht, keine Nukleolen, das Verhältnis von Kern zu Zytoplasma ist groß und das Zytoplasma ist zu schwach basophil gefärbt. (2) Übergangslymphozyten: Größer als kleine Lymphozyten, etwa 10 bis 20 um, die Kernfärbung ist dicht, es treten jedoch Nukleolen auf, die der Schlüsselpunkt für die Identifizierung reifer kleiner Lymphozyten sind. (3) Lymphoblasten: das Zellvolumen nimmt zu, etwa 20 bis 30 μm, die Form ist nicht sauber, oft kleine Ausstülpung, Kernvergrößerung, Kernfärbung locker, es gibt 1 oder 2 Nukleolen, Zytoplasma-Erweiterung, oft Zytoplasma Leere Blase. (4) Andere Zellen: Zum Beispiel ist nach einer 72-stündigen Neutrophilenkultur der größte Teil des Zerfalls oder Todes eine Fragmentierung. 2. Berechnung der Lymphozyten-Transformationsrate Kopf, Körper und Schwanz wurden in der obigen Klassifikation untersucht und 200 Lymphozyten wurden gezählt, um den Prozentsatz zu berechnen. Transformierte Lymphozyten umfassen Lymphoblasten und Übergangs-Lymphozyten, und nicht transformierte Lymphozyten beziehen sich auf reife kleine Lymphozyten. Unter normalen Umständen beträgt die PHA-induzierte Lymphozyten-Transformationsrate 60 bis 80%, und wenn sie 50 bis 60% beträgt, ist sie niedrig, und wenn sie 50% oder weniger beträgt, ist sie verringert. Entsprechend den Ergebnissen wird die korrekte Beurteilung erhalten. Nicht für die Menge geeignet Unangemessene Menge: vorübergehend unbekannt. Nebenwirkungen und Risiken Es gibt keine damit verbundenen Komplikationen und Gefahren.