Esame della cromatina delle cellule del liquido amniotico

Per le famiglie con una storia familiare di malattie ereditarie recessive legate all'X, il fenotipo parentale è normale: se la madre è portatrice del gene che causa la malattia, la probabilità del figlio del bambino è del 50%; la figlia ha un fenotipo normale, ma metà di esso. Può essere un corriere. Quando il padre è un paziente, i figli sono tutti normali e le figlie sono tutte portatrici dell'esame della cromatina a cellule fluide amniotiche per predire il sesso del feto per stimare la probabilità che si verifichino determinate malattie ereditarie. Informazioni di base Categoria di specialisti: Esame materno Categoria di controllo: Test genetici (DNA) Genere applicabile: se le donne digiunano: non digiunano Risultati dell'analisi: Al di sotto del normale: Valore normale: no Sopra normale: negativo: Cromatina X:> 0,06 per il feto femmina e 0,05 per il feto maschio. positivo: La probabilità di una malattia recessiva legata all'X è determinata sulla base dei risultati. Suggerimenti: l'amniocentesi viene solitamente eseguita nel secondo trimestre (16-21 settimane di gestazione). Valore normale Cromatina X> 0,06 per i feti femminili, <0,05 per i feti maschi; La cromatina Y> 0,05 è un feto maschio e <0,04 è un feto femmina. Significato clinico Per le famiglie con una storia familiare di malattie ereditarie recessive legate all'X, il fenotipo parentale è normale: se la madre è portatrice del gene che causa la malattia, la probabilità del figlio del bambino è del 50%; la figlia ha un fenotipo normale, ma metà di esso. Può essere un corriere. Quando il padre è un paziente, il figlio è tutto normale e la figlia è tutta portatrice, come emofilia A, emofilia B, deficit di glucosio-6-fosfato deidrogenasi, cecità rosso-verde, distrofia muscolare pseudoipertrofica Carenza congenita di gamma globulina. I risultati positivi possono essere malattie: emofilia, iperammonemia congenita nei bambini, daltonismo L'amniocentesi viene solitamente eseguita nel secondo trimestre (16-21 settimane di gestazione). L'urina deve essere drenata prima dell'intervento chirurgico, con entrambe le mani sui fianchi e ruotare delicatamente la vita e l'addome. Quindi supino, utilizzare l'ecografia B per rilevare il posizionamento, selezionare il punto di puntura e la puntura in condizioni operative asettiche rigorose. Generalmente, circa 20 ml di liquido amniotico vengono prelevati e posti in una provetta da centrifuga pulita e sterilizzata per l'ispezione immediata. Processo di ispezione (1) Prendere da 15 a 30 ml di liquido amniotico per 16-20 settimane di gravidanza e centrifugare a 1000 r / ml per 10 minuti. (2) Eliminare il surnatante in eccesso, lasciare 1 ml di liquido amniotico e cellule precipitate e disperdere delicatamente in una sospensione cellulare. (3) Trasferire in un matraccio da 25 ml di coltura quadrata, aggiungere 3 ml di un terreno con un pH compreso tra 6,5 ​​e 6,8 (contenente penicillina 100 U / ml, streptomicina 100 μg / ml) e 1 ml di siero di vitello e incubare in un incubatore a 37 ° C. (4) Un gran numero di colonie cellulari simil-fibroblasti o epitelioidi sono state osservate dopo 7-10 giorni di coltura. Il mezzo fresco può essere scambiato in questo momento. (5) Quando le colonie cellulari vengono espanse in pezzi e ci sono molte cellule divisorie circolari traslucide, la colchicina può essere aggiunta per rendere la concentrazione finale 0,1-0,3 μg / ml, e quindi coltivata in un incubatore a 37 ° C per 5-6 ore. (Le procedure di cui sopra sono tutte eseguite in condizioni asettiche). Standard di raccolta: 1 con fibroblasti come tipo principale, crescita delle cellule; 2 con 10 oculari e 20x osservazione obiettiva, i cloni cellulari in crescita coprono 1 o più campi visivi completi; 3 vedono più di 10 traslucidi Celle rotonde e più di 10 celle divisorie luminose rotonde doppie. (6) Se le cellule non crescono vigorosamente, il ciclo di crescita non è uniforme o le cellule invecchiano e lo standard di raccolta non viene raggiunto, la sottocultura può essere continuata nella bottiglia originale. Metodo: In condizioni sterili, la soluzione di coltura è stata prima versata e sono state aggiunte alcune gocce di 2,5 g / L di soluzione di tripsina sterile e la miscela è stata agitata e versata. Inoltre, sono state aggiunte da 5 a 10 gocce di tripsina e agitate delicatamente a 37 ° C per circa 5 minuti per far cadere le cellule aderenti. Sono stati aggiunti 4 ml di terreno fresco contenente siero di vitello e la coltura è stata lasciata riposare a 37 ° C per 4-5 ore. Cambia con cura il terreno di coltura e continua la coltura, che può essere raccolto 3-5 giorni dopo il passaggio. (7) Trasferire la soluzione di coltura in una provetta da centrifuga graduata, aggiungere 1 ml di soluzione di tripsina ED-TA nel pallone, posizionare in un incubatore a 37 ° C per 5 minuti, quindi risciacquare le cellule aderenti con una pipetta a gomito (2,5 g / può anche essere usata) L digestione della soluzione di tripsina). Le cellule staccate dalla parete della bottiglia sono state versate in una provetta da centrifuga, mescolate con la fase liquida di coltura originale, e il pallone da coltura è stato lavato con una piccola quantità di soluzione salina fisiologica calda, e le cellule lavate sono state anche versate nella provetta da centrifuga e centrifugate a 1000 r / min per 10 minuti. (8) Aspirare il surnatante, aggiungere da 3 a 5 ml di soluzione ipotonica KCl 0,075 mol / L preriscaldata a 37 ° C e impostare a 37 ° C per 10-15 minuti. (9) La pre-fissazione, la fissazione e la preparazione sono le stesse del metodo di preparazione dei campioni di cromosoma delle cellule del sangue periferico. Non adatto alla folla Tabù: 1. Ci sono stati segni di aborto durante la gravidanza. 2. Quando la temperatura corporea supera i 37,5 ° C. 3. Esfoliazione precoce della placenta, infezione addominale e purulenta. Reazioni e rischi avversi (1) Lesione materna: puntura dell'ago pugnalata ferita vasi sanguigni causati da ematoma della parete addominale ematoma subserosale uterino. Occasionalmente, il liquido amniotico entra nella circolazione sanguigna materna dal foro della puntura e provoca embolia del liquido amniotico. La vescica non è stata svuotata prima della puntura e la vescica è stata ferita. (2) Lesioni del feto, della placenta e del cordone ombelicale: l'ago della puntura può danneggiare il feto e causare emorragie e la placenta e il cordone ombelicale possono anche causare sanguinamento o ematoma. Pertanto, la fonte di sanguinamento deve essere identificata durante l'assunzione di liquido amniotico emorragico. Se sospetti di provenire da un feto, dovresti continuare ad ascoltare il cuore del feto. (3) Perdita di liquido amniotico: il liquido amniotico postoperatorio fuoriesce dal foro stenopeico, causando una quantità insufficiente di liquido amniotico, influenzando lo sviluppo fetale e persino causando aborto spontaneo o parto prematuro. (4) aborto o parto prematuro: l'incidenza dell'aborto o del parto prematuro è dello 0,1% -0,2%, spesso si verifica entro una settimana dopo l'intervento chirurgico, anche dopo la puntura, la rottura prematura delle membrane porta al parto prematuro. (5) infezione intrauterina: potrebbe esserci febbre materna dopo l'intervento chirurgico. L'infezione intrauterina può causare uno sviluppo fetale anormale o persino la morte del feto. Pertanto, l'amniocentesi dovrebbe essere rigorosamente asettica.