ヘリコバクター・ピロリの免疫学的検出

ヘリコバクターピロリ免疫学的検査では、血清中のヘリコバクターピロリ抗体を測定することにより、受動的血球凝集アッセイ、免疫ブロット法、酵素結合免疫吸着アッセイ（ELISA）を含むH. pylori感染を検出します。 患者は脳脊髄液を採取し、96ウェルV型血球凝集プレートで抗原を希釈してJE抗原を希釈したため、各ウェルには25 uLが含まれ、試験する血清は各希釈液で1:10に希釈されました。 25uLを追加し、凍結乾燥した日本脳モノクローナル抗体を追加して羊赤血球25uLを感作し、37°C​​で数時間放置した後の結果を観察します。 基本情報 専門家分類：成長および発達検査分類：血液検査 該当する性別：男性と女性が断食を適用するかどうか：断食 ヒント：試験中は空腹を避けてください。 正常値 結果は否定的でした。 臨床的意義 異常な結果： 1.試験の血清凝集力価は、抗原コントロールの4倍以上です。 回復期間中の血清抗原力価は、急性期の4倍以上であり、陽性でした。 2.特定のタンパク質が存在することを証明する特別な色反応があります。 3.検査対象の血清と既知の陰性血清（P / N）≥2.1の比率、および検査対象の血清のOD値が≥0.4である場合、陽性と判断されます。 群衆を確認する必要がある：消化性潰瘍の患者。 注意事項 検査前の禁忌：脳の保護に注意を払い、さまざまな包装液を準備し、濃度を設定します。 チェック時のタブー： 1.患者は、頭部を傷つけないように脳脊髄液を飲んで座ります。 2.羊の赤血球を感作して使用前に凍結乾燥するために使用されるモノクローナル抗体。 3.さまざまなタンパク質の最適条件を決定するために、一次抗体と二次抗体の希釈、作用時間、温度を事前に実験する必要があります。 4.発色現像液を新たに構成し、最終的にH2O2に追加する必要があります。 5. DABはがんを引き起こす可能性があるため、取り扱いには注意してください。 6.温度、時間、pH、酵素、抗体量など、標識の効率に影響する要因を厳密に制御します。 7.カラムを取り付けるときは、カラムを均一にし、シリンダーの表面が平らで、気泡や亀裂がないようにします。 検査プロセス まず、受動的な血液凝固 患者は脳脊髄液を採取し、96ウェルV型血球凝集プレートで抗原を希釈してJE抗原を希釈したため、各ウェルには25 uLが含まれ、試験する血清は各希釈液で1:10に希釈されました。 25 uLを追加し、凍結乾燥した日本の脳モノクローナル抗体により感作羊赤血球25 uLを追加し、37°C​​で数時間放置した後の結果を観察します。 第二に、イムノブロッティング技術 （A）得られたタンパク質サンプル：細菌による発現の誘導後、電気泳動ローディングバッファー、真核細胞とホモジナイゼーションバッファー、機械的または超音波室温ホモジネート0.5-1分で細胞を直接溶解できます。 次に、4℃で15分間13,000gで遠心分離しました。 サンプルとして上清を取ります。 （2）電気泳動：電気泳動ゲルを調製し、SDS-PAGEにかけた。 （3）転送：（セミドライ転送） 1.電気泳動が終了したら、ストリップを適切なサイズに切断し、膜バッファーで5分×3回平衡化します。 2.膜処理：ストリップと同じサイズの濾紙とNC膜を事前に切断し、転写バッファーに10分間浸漬しました。 3.転写フィルム：フィルム転写装置は、アノードカーボンプレート、24層のろ紙、NCフィルム、ゲル、24層のろ紙およびカソードカーボンプレートの順序に従って下から上に順番に配置されます。気泡は一段階で除去され、５００ｇの重量がそれに加えられ、カーボンプレート上の過剰な液体を乾燥させた。 電源を入れ、定電流1mA / cm2、1.5時間を転送します。 転写が完了したら、電源を切り、膜を取り出し、試験するストリップをイムノブロッティング用に切断します。 タンパク質標準ストリップを染色し、膜染色溶液に50秒間入れ、50％メタノールで数回脱色して透明な背景にし、再蒸留水で洗浄し、2層のろ紙で風乾し、放置して着色しました結果が比較されます。 （4）免疫反応： 1. 0.01 M PBSで5分間x 3回膜を洗浄します。 2.コーティング溶液を加え、室温で2時間穏やかに振とうします。 3.溶液を捨て、膜を0.01 M PBSで5分×3回洗浄します。 4.一次抗体（適切な希釈率で0.01 M PBSで希釈、液体は膜全体を覆う必要がある）を追加し、4°Cで12時間以上放置します。 ネガティブコントロールでは、一次抗体が1％BSAに置き換えられ、残りのステップは実験グループと同じでした。 5.一次抗体と1％BSAを廃棄し、膜を0.01 M PBSで5分×4回洗浄します。 6.西洋ワサビペルオキシダーゼ結合二次抗体（適切な希釈率で0.01 M PBSで希釈）を加え、室温で2時間穏やかに振とうします。 7.二次抗体を捨て、メンブレンを0.01 M PBSで5分×4回洗浄します。 8.着色溶液を加え、光を避け、バンドが現れるまで発色し、再蒸留水を入れて反応を停止します。 第三に、酵素結合吸着測定 一般的に使用されるELISA法には、二重抗体サンドイッチ法と間接法があり、前者は高分子抗原を検出し、後者は特定の抗体を測定します。 間接ELISA この方法は、主に抗体の検出に使用されます。 間接ELISAの手順は次のとおりです。 （1）材料 1コーティング液、洗浄液、保温液、下地液、および停止液。 2DVH被覆抗原、酵素標識抗抗体、陰性および陽性のDVH参照血清; 3 ELISA検出器、サンプラー、ポリスチレンマイクロプレート。 （2）メソッドの手順 1プラス抗原コーティング→4°C、一晩、3回洗浄、乾燥乾燥; テストする2プラス血清→37°C、2時間、3回洗浄、乾燥乾燥; 3プラス酵素標識抗体→37°C、2時間、3回洗浄、乾燥乾燥; 4基質溶液を追加→37°Cで30分間、停止溶液を追加。 5 OD値をELISA検出器で測定し、P / N比を計算しました。 2.二重抗体サンドイッチELISA この方法は、主に高分子抗原の検出に使用されます。 1プラス抗体コーティング→4°C、一晩、3回洗浄、乾燥乾燥; 2プラステストする抗原→37℃、30分間、3回洗浄、乾燥乾燥。 3プラス酵素標識抗体→37°C、30分間、3回洗浄、乾燥乾燥; 4基質溶液を追加→37°C、15分間、停止溶液を追加。 5 OD値はELISAテスターで測定しました。 群衆に適していない 群衆のチェックには適していません：なし。 副作用とリスク 関連する合併症や危険はありません。