Test toksyczności limfocytów

Gdy określone efektorowe limfocyty T kontaktują się z komórkami docelowymi in vitro, mogą wykazywać właściwość niszczenia i lizy komórek docelowych, zwaną toksycznością limfocytów. Komórka docelowa może być komórką nowotworową lub inną komórką tkankową. Sposób, w jaki limfocyty zabijają komórki docelowe, może niszczyć komórki docelowe poprzez bezpośrednie zabijanie lub produkcję limfokin. To jest test toksyczności limfocytów. Niektóre limfocyty, takie jak CTL, NK, LAK itp., Mają bezpośredni efekt zabijania komórek docelowych i zależnie od charakteru wykrywanych komórek efektorowych można wybrać odpowiednie komórki docelowe, takie jak komórki nowotworowe, komórki dawcy transplantacji itp. Ten eksperyment może być wykorzystany w badaniach odporności na nowotwory, odrzuceniu przeszczepu, infekcji wirusowej i tym podobnych. Metody obejmują: metodę uwalniania chromu, metodę uwalniania dehydrogenazy mleczanowej i test komórek apoptotycznych. Podstawowe informacje Klasyfikacja specjalistyczna: Klasyfikacja badań onkologicznych: badanie immunologiczne Obowiązująca płeć: czy mężczyźni i kobiety stosują post: post Wyniki analizy: Poniżej normy: Wartość normalna: Nie Powyżej normalnego: Negatywne: Normalne Pozytywne: Obecnie brak odpowiednich danych. Wskazówki: zachowaj normalny sposób myślenia. Wartość normalna Metodę badania morfologicznego porównano między grupą testową a grupą kontrolną, p <0,05. Metoda 125I lub 51Cr P> 0,05. Znaczenie kliniczne Nieprawidłowe wyniki: Ten test może być stosowany jako wskaźnik do pomiaru odporności komórkowej u pacjentów z nowotworami in vitro; może również określać rokowanie u pacjentów z nowotworami poprzez pomiar zdolności komórek odpornościowych do zabijania komórek nowotworowych; może także identyfikować funkcjonalne subpopulacje limfocytów. Populacja, którą należy zbadać: Test krzyżowy toksyczności limfocytów nazywany jest również testem cytotoksyczności zależnej od dopełniacza (CDC). Ma to na celu sprawdzenie, czy u biorcy przeszczepu narządu znajduje się dawca, czy też przeciw biorcy HLA dawcy przeciwko biorcy i musi wykonać test CDC przed przeszczepem narządu. Środki ostrożności (1) W celu pomiaru zdolności badanych limfocytów do atakowania komórek nowotworowych, komórki nowotworowe i limfocyty podmiotu dodano do grupy eksperymentalnej, a docelowe komórki nowotworowe i pożywkę hodowlaną dodano do grupy kontrolnej. Jeśli w odporność komórkową zaangażowane są inne próbki, takie jak antygeny nowotworowe lub immunogeny, leki terapeutyczne itp., Należy dodać trzecią grupę W tej grupie testowej najpierw limfocyty reagują z badaną próbką, a następnie są myte, a następnie obserwowane. Cytotoksyczny wpływ uczulonych limfocytów na docelowe komórki nowotworowe. Dwie pierwsze grupy stały się w tej chwili grupą kontrolną. (2) Wskaźnik przeżycia komórek docelowych i limfocytów powinien być w optymalnym stanie, na ogół> 90%. (3) Surowicę cielęcą dodaną do roztworu hodowlanego należy najpierw zbadać pod kątem toksyczności. (4) Liczba zaszczepionych komórek docelowych i limfocytów powinna być dokładna. (5) Grupa eksperymentalna i grupa kontrolna powinny być umieszczone na tej samej płycie, aby zmniejszyć błąd. (6) pH roztworu kultury wynosi najkorzystniej 6,8 do 7,2. Proces kontroli (1) Zaszczepianie komórek docelowych: Wybierz komórki nowotworowe, które mogą rosnąć adherentnie, przemyj je roztworem Hanka, trawi 2,5 g / l trypsyny przez 2–3 minuty, wlewa roztwór trypsyny (komórki są nadal przymocowane do ścianki butelki) i używa Hanka. Komórki delikatnie przemyto 3 razy i wlano roztwór Hanka. Przylegające komórki przemyto roztworem RPMI1640 zawierającym 10% do 20% surowicy cielęcej, i osad komórek usunięto przez filtrację przez filtr 100 mesh, aby przygotować zawiesinę pojedynczych komórek nowotworowych 1 x 106 / ml, a zawiesinę komórek pipetowano za pomocą zakraplacza. Upuść na 40-studzienkową płytkę hodowlaną, 1 kroplę na studzienkę (około 100-150 komórek) i umieść płytkę w inkubatorze z 5% CO2 w 37 ° C na 20 godzin. Płytkę hodowlaną wyjęto i roztwór do hodowli usunięto. Po barwieniu Wrighta zliczono średnią liczbę przylegających komórek nowotworowych na 10 studzienek. Jeśli różnica między dwiema grupami wynosiła> 1/3, błąd był zbyt duży, aby go użyć, a błąd nie był duży. Płytkę hodowlaną można formalnie przetestować. (2) Rozdzielanie limfocytów: weź antykoagulację heparyną 3 ml badanego, rozdziel limfocyty roztworem ługującym sacharozy-diazepamu, następnie przemyj je roztworem Hanka 3 razy, a następnie wymieszaj z roztworem RPMI1640 (2 ~ 3) ) × 105 / ml zawiesiny komórek. (3) Test cytotoksyczności: limfocyty i komórki docelowe miesza się w stosunku 200: 1 i (2 ~ 3) × 104 limfocytów (w objętości 0,1 ml) dodaje się do każdej studzienki i dodaje się około 20% surowicy cielęcej na studzienkę. 0,1 ml roztworu RPMI 1640 umieszczono w inkubatorze z 5% CO2 w 37 ° C na 40 godzin. Płytkę hodowlaną wyjęto i roztwór hodowlany usunięto Po barwieniu Wrighta liczbę komórek docelowych pozostających na dnie płytki zliczono pod mikroskopem. Nie nadaje się dla tłumu Nie ma tabu. Działania niepożądane i ryzyko Nie ma żadnych powiązanych komplikacji i zagrożeń.