gonorréia
Introdução
Introdução à gonorreia A gonorréia é uma infecção purulenta do aparelho geniturinário causada por Neisseria gonorrhoeae (também conhecida como Neisseria gonorrhoeae), que também pode invadir os olhos, a faringe, o reto e a pelve, além de infecções disseminadas, sendo uma das doenças sexualmente transmissíveis mais comuns. . A gonorreia é transmitida através da relação sexual, e um pequeno número também pode ser transmitido através dos contaminantes do pus do paciente, que podem ser transmitidos para o bebê através do canal do parto. Conhecimento básico A proporção de doença: 0,012% Pessoas suscetíveis: ocorrem principalmente em homens e mulheres jovens Modo de transmissão: contato sexualmente transmitido Complicações: Prostatite, vesiculite seminal, epididimite, uretrite, estenose uretral, doença inflamatória pélvica, abscesso pélvico, dor abdominal
Patógeno
Causa de gonorreia
Morfologia e coloração (25%):
Neisseria gonorrhoeae são ovais ou em forma de feijão.O comprimento das bactérias é de 0,6-0,8 μm ea largura é de cerca de 0,5 μm.Eles são frequentemente dispostos em pares, e as faces adjacentes são planas ou ligeiramente côncavas, como dois grãos emparelhados, sem flagelos, sem esporos. No corpo da infecção aguda, sua morfologia é mais típica, principalmente no citoplasma, na fase crônica está fora da célula, a coloração gonocócica de Gram é negativa, quando corada com azul de metileno alcalino, as bactérias são azuis, coradas com Pappehheim Saathof Na época, as células são vermelhas e o fundo é azul celeste, o que é muito claro. Neisseria gonorrhoeae possui cinco diferentes formas de colônias em meio artificial, sendo T1, T2, T3, T4, T5, das quais T1 e T2 são virulência, T3 e T4 são pêlos estéreis e não podem infectar humanos.
Estrutura celular (20%):
A patogenicidade da Neisseria gonorrhoeae está intimamente relacionada com a estrutura externa das células.A estrutura externa da Neisseria gonorrhoeae é a membrana externa.Os principais componentes da membrana externa são proteínas de membrana, lipopolissacarídeos e pili, e proteínas de membrana podem aderir à mucosa humana. Através da fagocitose celular em células humanas, multiplicação nas células, levando à desintegração celular, gonococos espalhar para a submucosa para causar infecção, pili tendem a aderir à superfície da cavidade uterina e células epiteliais orais, patogênicas e infecciosas.
Resistência (25%):
Neisseria gonorrhoeae é mais delicada, mais medo de secura, adequado para o crescimento sob umidade, temperatura de 35 ~ 36 ° C, contendo 2,5% ~ 5% de dióxido de carbono, o pH ideal para o crescimento é de 7,0 ~ 7,5, os fatores físico-químicos de Neisseria gonorrhoeae A resistência é bastante baixa, morrendo dentro de 1 ~ 2h em um ambiente completamente seco, mas se for fixada na roupa íntima e na cama, pode sobreviver por 18 a 24 horas, podendo sobreviver por vários dias em pus grossos ou objetos molhados. 50 ° C só pode sobreviver por 5 min, Neisseria gonorrhoeae é muito fraco contra fungicidas mucobacterianos comumente usados, é especialmente sensível aos sais de prata solúvel, 1: 4000 solução de nitrato de prata pode causar a morrer dentro de 7min, para que Neisseria gonorrhoeae em pus 2min Dentro da morte, 1% de solução de fenol (ácido carbônico) pode matá-lo dentro de 3min.Além da cepa resistente, Neisseria gonorrhoeae é sensível a antibióticos, mas a concentração inibitória mínima de antibióticos é gradualmente melhorada.
O patógeno é a neisseria gonorrhoeae, também conhecida como gonococo, conhecida como Neisseria gonorrhoeae, pertencente à família Neisseria, Neisseria.
1. Descobriu que, em 1879, Neisser isolou a gonorréia de 35 secreções de uretrite aguda, vaginite e conjuntivite aguda neonatal.Em 1885, Bumm foi usado em meio soro de coagulação humano, bovino ou de ovelha. O cultivo de Neisseria gonorrhoeae foi bem-sucedido, e os mesmos sintomas poderiam ser produzidos pela inoculação da cepa na uretra de pessoas saudáveis.Neste ponto, a conclusão de que Neisseria gonorrhoeae é o patógeno da gonorreia foi estabelecida.
2. Cultura e características bioquímicas crescem bem em meio contendo proteína animal, como sangue, soro, gema de ovo, ascite, etc. A temperatura adequada para a cultura é 35-36 ° C, pH adequado é 7,5, e precisa ser cultivada em 5% de dióxido de carbono. .
Na uretra humana, a glicose pode ser fermentada, mas a frutose não pode ser fermentada, portanto, essa característica pode ser usada como um teste de fermentação da glicose para se identificar com o meningococo, que não produz matriz de escarro e sulfeto de hidrogênio. A produção de oxidases tem um certo significado na identificação precoce.
3. Classificação de nutrientes De acordo com a base de nutrição de aminoácidos e ácidos nucleicos necessária para a cultura gonocócica, a Neisseria gonorrhoeae pode ser dividida em 35 tipos de nutrientes, entre os quais Arg, Hyx, Ura tipo Neisseria gonorrhoeae podem causar gonorreia assintomática e gonorréia disseminada. Resistente ao soro, mas sensível à penicilina e outras drogas.
Patogênese
(1) Afinidade ao epitélio: Neisseria gonorrhoeae tem uma afinidade especial pelo epitélio colunar e o epitélio transicional, a uretra masculina e feminina, o colo do útero feminino cobre o epitélio colunar e o epitélio transicional, sendo suscetível à invasão gonocócica, enquanto o escafóide masculino e a vagina feminina O epitélio escamoso estratificado é coberto com forte resistência, geralmente não invadido, ou a inflamação é muito leve, por isso a vaginite gonocócica é rara em mulheres adultas.Porque a mucosa vaginal é epitélio colunar, a jovem é suscetível à infecção e a pele não é facilmente gonocócica. Infecção, casos raros de infecção primária da pele gonocócica, os seres humanos não têm imunidade inata a bactérias gonocócicas, a re-infecção pode ocorrer após a recuperação.
(2) Adesão: O receptor específico no pênis gonocócico pode se ligar à parte correspondente da célula da mucosa, a proteína da membrana externa II pode mediar o processo de adesão, e também pode liberar a enzima IgA em decomposição para resistir à rejeição da célula. A Neisseria gonorrhoeae e as células epiteliais aderem rapidamente umas às outras, e o pH no microambiente, a ponte iônica, a estrutura hidrofóbica e os hormônios sexuais também podem promover o processo de adesão.
(3) Invasão e infecção: Neisseria gonorrhoeae adsorve nas microvilosidades das células epiteliais, e a proteína da membrana externa I é transferida para a membrana celular, e então a Neisseria gonorrhoeae é fagocitada nas células, e a Neisseria gonorrhoeae pode ser adsorvida no esperma, que pode ser rapidamente Ascendendo ao canal cervical, o muco cervical pode prevenir temporariamente a Neisseria gonorrhoeae para a cavidade uterina, e nas células epiteliais colunares do colo uterino, causará doença, uma vez que as células gonocócicas invadem as células, elas proliferam e danificam as células epiteliais. Cocci para o espaço submucoso, causando infecção da submucosa.
(4) Formação de lesões: Neisseria gonorrhoeae invade a camada submucosa e continua proliferando, multiplicando na primeira geração em 36 horas, através da ação sinérgica do lipopolissacarídeo endotoxina, complemento e IgM, formando reação inflamatória, causando vermelhidão e inchaço da mucosa e, ao mesmo tempo, glóbulos brancos. Agregação e morte, necrose e descamação das células epiteliais, surgiram pus e as lesões foram mais graves nas glândulas e nas aberturas das criptas.
(5) espalhar propagação: inflamação causada por infecção gonocócica pode se espalhar ao longo do trato urinário, propagação do trato genital, em homens pode ser estendido para a próstata, vesículas seminais, ducto deferente e epidídimo, em mulheres pode se espalhar para o útero, trompas de falópio e pélvis, grave Neisseria gonorrhoeae pode entrar na corrente sanguínea e se espalhar para vários tecidos e órgãos por todo o corpo, levando à infecção disseminada.
Prevenção
Prevenção de gonorréia
Prevenção da gonorréia também deve ser notado que pacientes com gonorréia devem ser proibidos de dormir com crianças, especialmente meninas, banhos ou banhos públicos, toalhas de banho, etc. Em áreas com alta prevalência, todos os recém-nascidos devem ser tratados com solução de nitrato de prata ou outros antibióticos eficazes. Colírio.
1. Promover o conhecimento das doenças sexualmente transmissíveis, promover a moralidade nobre e proibir a prostituição.
2. Use preservativo para reduzir a incidência de infecção gonocócica.
3. O uso profilático de antibióticos pode reduzir o risco de infecção.Você pode tomar norfloxacina ou amoxicilina antes e depois da relação sexual, que pode efetivamente prevenir infecções sexualmente transmissíveis.
4. Parceiros sexuais são tratados ao mesmo tempo.
5. Os pacientes prestam atenção à higiene pessoal e isolamento, não para a cama com a família, crianças, especialmente meninas e banho.
6. Implemente um sistema de solução de nitrato de prata neonatal ou outras gotículas de antibiótico para prevenir a oftalmia gonocócica.
Complicação
Complicações gonorréia Complicações Prostatite Vesiculite seminal Epididimite Uretrite Estresse uretral Doença inflamatória pélvica Abscesso pélvico Dor abdominal
Complicações de gonorréia masculina
1, gonorréia combinada com sintomas de prostatite: 1 dia ou meio dia antes do início da prostatite aguda, muitas vezes parar a redução de pus ou pus, os pacientes têm febre alta, micção freqüente e dor, exame retal mostrou aumento da próstata, sensibilidade, urina Turbidez líquida, se o tratamento não é oportuna, a próstata pode formar abscessos, pacientes com prostatite crônica geralmente não têm sintomas evidentes, a primeira micção depois de acordar, a abertura uretral tem um fenômeno de vedação, uma pequena quantidade de secreções brancas são descarregadas quando o pênis é espremido, secreções O exame pode revelar células epiteliais, algumas células pus e gonococos.
2, gonorréia combinada com sintomas de vesiculite seminal: febre aguda, micção freqüente, disúria, turvação da urina terminal e sangue, o exame retal pode tocar a vesícula seminal inchada e ternura grave, sintomas crônicos, nenhum exame retal Isso mostra que a vesícula seminal é dura e fibrótica.
3, gonorréia com sintomas de epididimite: geralmente combinada com uretrite aguda, febre unilateral, principalmente baixa, inchaço epididimário e sensibilidade, virilha ipsilateral e abdome inferior têm dor reflexa, palpação mostra inchaço epididimal, existem Sensibilidade intensa, turbidez urinária.
4, a gonorreia masculina pode ser combinada com estenose uretral: a gonorréia repetida pode causar estenose uretral, um pequeno número de ductos deferentes ou mesmo infarto e, em seguida, cisto de sêmen secundário e infertilidade.
Complicações de gonorréia feminina
Gonorreia feminina e sintomas de doença inflamatória pélvica gonocócica, incluindo salpingite aguda, endometrite, abscesso ovariano secundário da tuba uterina e abscesso pélvico causado por ruptura, peritonite, etc., devido a tratamento, maus-tratos, pacientes com gonorreia do sexo feminino, extrema É fácil desenvolver a infecção geniturinária para infecções pélvicas e acessórias, causando sérias conseqüências, como infertilidade, dor abdominal e até risco de vida.
Sintoma
Sintomas de gonorréia Sintomas comuns Falta de dor nas costas, muco branco, urina, náusea, libido, dor severa, inflamação, perda de apetite, coceira anal
As manifestações clínicas da infecção gonocócica dependem do grau de infecção, da sensibilidade do organismo, da virulência da bactéria, da localização da infecção e da duração da infecção. Ao mesmo tempo, está relacionado com a saúde do corpo, se a vida sexual é excessiva e o alcoolismo. De acordo com as manifestações clínicas, a gonorréia pode ser dividida em sem gonorreia e com gonorreia comórbida, gonorreia assintomática e sintomática, gonorréia disseminada e gonorréia aguda e crônica.
Em primeiro lugar, nenhuma complicação gonorreia
(a) masculino sem complicação gonorreia
Uretrite gonocócica aguda (gonorréia aguda): O período de incubação é de 1-14 dias, geralmente 2-5 dias. Desde o início, uretrite aguda, vermelhidão, coceira e leve formigamento da uretra, seguido de efluente de muco fino, causando desconforto ao urinar.Depois de cerca de 2 dias, a secreção tornou-se pegajosa, a uretra transbordou e o pus foi profundo. Amarelo ou verde-amarelo, acompanhado de aumento dos sintomas de desconforto do trato urinário, vermelhidão e inchaço ao longo da glande e parte da uretra, micção freqüente, urgência, disúria, dificuldade para urinar, movimentação inconveniente e ereções penianas frequentes à noite. Pode haver inchaço dos gânglios linfáticos inguinais, vermelhidão e dor, e também pode ser purulenta. A primeira semana de sintomas agudos é a mais grave e, se não for tratada, os sintomas diminuem gradualmente ou desaparecem após cerca de um mês. Duas semanas após o início da uretrite anterior aguda, cerca de 50-70% dos pacientes apresentam invasão gonocócica da uretra posterior, que é caracterizada por desconforto urinário, micção frequente e retenção urinária aguda. A característica da disúria é que a dor ou dor é exacerbada no final da micção, e é semelhante à acupuntura, às vezes há dor perineal e pode não haver hematúria. Após 1-2 semanas, os sintomas desapareceram gradualmente. Os sintomas sistêmicos são geralmente leves, alguns podem ter febre até 38 ° C, mal-estar geral, perda de apetite e assim por diante.
Uretrite gonocócica crônica (gonorréia crônica): Os sintomas que duram mais de 2 meses são denominados de uretrite gonocócica crônica. Como o tratamento não é completo, a Neisseria gonorrhoeae pode ser ocultada no corpo da uretra, nas glândulas parauretrais e nas criptas uretrais para tornar o curso da doença crônico. Se a constituição do paciente é fraca, sofrendo de anemia, tuberculose, a condição começa com um processo crônico, principalmente para a infecção combinada da uretra anterior e posterior, boa invasão do bulbo uretral, membrana e próstata. As manifestações clínicas da uretra geralmente apresentam sensação de coceira, sensação de queimação ou formigamento leve, fluxo urinário fino, fraqueza da urina, gotejamento. A maioria dos pacientes apresenta uma pequena quantidade de escaras no trato urinário no início da manhã, se as raízes genitais ou penianas são espremidas, o muco fino transborda. A urina é basicamente clara, mas há seda.
(2) mulheres sem complicações gonorréia
A principal parte da infecção gonocócica primária feminina é o colo uterino, a Neisseria gonorrhoeae pode aderir ao epitélio escamoso estratificado.O local de infecção da Neisseria gonorrhoeae é observado na junção do epitélio escamoso-colunar do colo do útero. Os pacientes com cervicite por gonorréia geralmente não apresentam sintomas precocemente, portanto, o período de incubação é difícil de determinar. Congestão cervical, sensibilidade, aumento das secreções purulentas, frequentemente prurido genital e sensação de queimação, ocasionalmente dor abdominal baixa e lombalgia. Esses sintomas atípicos fazem com que os pacientes muitas vezes não vão à clínica, então eles se tornam a principal fonte de infecção; a uretrite gonocócica geralmente ocorre 2-5 dias após a relação sexual, congestão uretral, sensibilidade e secreções purulentas, leve Micção freqüente, urgência, disúria, sensação de ardor durante a micção, descarga purulenta na uretra, inflamação da glândula vestibular gonocócica, muitas vezes unilateral, vermelhidão e inchaço na abertura da glândula, dor severa, formação de abscessos graves. Há febre e outros sintomas sistêmicos, vaginite gonocócica é menos comum, os sintomas dos idosos são leves, alguns pacientes têm inchaço abdominal, dor nas costas, corrimento vaginal, alguns pacientes têm dor abdominal baixa e menorragia, mulheres vulva gonocócica Vaginite, manifestada como inflamação vulvar e vaginal. Há mais secreções purulentas vaginais, às vezes secreções amarelas e verdes na vagina e na uretra, micção dolorosa e vermelhidão na vulva. As secreções podem fluir para o ânus, causando irritação. Em casos graves, pode infectar o reto e causar proctite gonocócica.
Em segundo lugar, há complicações da gonorreia
(a) Homens com gonorreia comórbida:
A uretrite por gonorreia tem várias comorbidades, principalmente prostatite, vesiculite seminal, epididimite.
1. Prostatite: prostatite aguda é causada pelo tubo de descarga e glândula de Neisseria gonorrhoeae entrar na próstata.Existem febre, calafrios, dor perineal e infecções do trato urinário acompanhadas por disúria. A próstata está inchada e macia quando examinada. No entanto, Neisseria gonorrhoeae não é uma causa comum de prostatite aguda. A próstata causada por Neisseria gonorrhoeae é caracterizada principalmente por lesões crônicas, os sintomas são leves, há desconforto perineal, dor peniana, há um fenômeno de "boca" na abertura uretral da manhã, e a linfa na urina é vista.O fluido da massagem da próstata tem pus e lecitina. , esfregaço ou cultura para encontrar gonococo, o exame anal pode tocar pequenos nódulos na próstata, e não há desconforto ou dor, a drenagem de pus perto do tubo de drenagem para formar contração cicatricial afeta a ejaculação, resultando em infertilidade.
2. Epididimite: geralmente ocorre após a uretrite aguda, principalmente em um dos lados. Há febre baixa, dor inchaço epidídimo, virilha ipsilateral e abdome inferior têm dor reflexa, o início e limites testiculares são claras, pouco claras, sensibilidade testicular, inchaço, sensibilidade severa. A urina é frequentemente turva. Pode haver próstata e vesiculite seminal ao mesmo tempo.
3. Vesiculite seminal: febre, micção frequente, urgência, disúria, ausência de turbidez urinária e sangue. O exame retal pode tocar a vesícula seminal inchada e ter uma sensibilidade severa A vesiculite crônica seminal geralmente não apresenta sintomas O exame retal mostra que a vesícula seminal é dura e fibrosa.
4. inflamação da glândula uretral: ocorre no períneo ou ao redor, há nódulos do tamanho do dedo, dor, supuração aguda e ulceração, compressão da uretra e disúria, pode ter sintomas sistêmicos, como febre, progresso lento.
5. Estenose uretral: autores repetidos podem causar estenose da uretra, um pequeno número de canais deferentes ou obstrução pode ocorrer, disúria, afinamento do trato urinário e retenção urinária grave. Ducto deferente secundário, cisto de vesícula seminal e infertilidade.
(2) As mulheres têm gonorreia comórbida
A principal complicação da gonorréia feminina é a inflamação da caixa gonocócica, como salpingite aguda, endometrite, abscesso ovariano secundário da tuba uterina e abscesso pélvico causado por ruptura, peritonite. Início súbito após a menstruação, há febre alta, calafrios, dor de cabeça, náuseas, vômitos, dor abdominal baixa, aumento da leucorréia purulenta. Ambos os lados do anexo estão espessos e macios.
Em terceiro lugar, outras partes da gonorréia:
1. Conjuntivite gonorréia: Os recém-nascidos aparecem mais de 2-3 dias após o nascimento, principalmente bilateral, inchaço da pálpebra, secreções purulentas, principalmente adultos auto-inoculação, muitas vezes unilateral, mostrando o mesmo recém-nascido. Devido ao transbordamento de pus, se o "olho de pust" estiver atrasado, a córnea fica vaporosa e a córnea é perfurada. Levar a cegueira.
2. faringite gonocócica: principalmente visto no sexo oral, os chamados "boca" ocidental homossexual ou heterossexuais são mais comuns, manifestado como faringite aguda ou amigdalite aguda, febre ocasional e linfadenopatia cervical. Existem sintomas como desconforto na garganta, dor de garganta, dor de garganta.
3. Neisseria gonorrhoia: vista principalmente na homossexualidade masculina. As mulheres são causadas principalmente por infecções vaginais. A mesa é urgente e pesada, há pus e sangue, congestão da mucosa do canal anal, secreção purulenta, cultura gonocócica positiva.
Em quarto lugar, a infecção gonocócica disseminada
A infecção gonocócica disseminada é devida à disseminação de bactérias gonocócicas através da corrente sanguínea para todo o corpo, resultando em uma infecção sistêmica mais grave. A taxa de incidência é de cerca de 1% dos pacientes com gonorréia. A maioria das cepas causadoras de infecção gonocócica disseminada é AHU-nutritiva, a cepa apresenta resistência estável ao soro humano normal, e o soro humano normal possui anticorpos IgM contra o lipopolissacarídeo gonocócico e, com a ajuda do complemento, é grande. A maioria dos gonococos tem um efeito bactericida, e os pacientes que não possuem componentes do complemento C5, C6, C7 e C8 são propensos à sepse gonocócica ou meningite gonocócica.
(1) sepse gonocócica: o paciente começa a ter febre, a temperatura corporal pode chegar a 40 ° C, mas geralmente entre 38 ° C e 40 ° C, calafrios não são comuns, alguns pacientes apresentam pápulas cutâneas, equimoses, pústulas, hemorragias Ou lesões necrosantes da pele, algumas lesões da pele têm sintomas de dor. Nas lesões, a imunocoloração fluorescente pode ser usada para detectar o crescimento de Neisseria gonorrhoeae ou Neisseria gonorrhoeae cultivada, e PCR para detectar DNA de Neisseria gonorrhoeae positivo. O tecido patológico da lesão é úlcera superficial com formação de pus, inflamação difusa da derme e tecido subcutâneo, infiltração de leucócitos polimorfonucleares, envolvimento de pequenos vasos sanguíneos, trombose e necrose localizada.
(B) artrite gonocócica: inchaço das articulações, dor, para uma ou várias artrites sépticas. Geralmente assimétrico, raramente envolvendo as articulações do quadril, ombro e coluna. O teste do fluido articular tem a presença de gonorréia, que pode levar à fibrose causada pela destruição óssea e rigidez dos ossos e articulações.
(C) ceratose gonocócica: pode ser devido a gonococos ou suas toxinas, não pode encontrar lesões gonocócicas nas lesões da pele, muitas vezes com artrite gonocócica, as lesões da pele são boas para as mãos e pés, tornozelo e cintura . Remendos ou placas que são geralmente achatadas e ligeiramente inchadas, cônicas, amarelas ou vermelhas de cobre ou branco acinzentado. As lesões cutâneas do escarro palmar mostraram hiperplasia excitada e grande ceratinização.
(D) endocardite gonocócica: o gonococo é o principal patógeno da endocardite nas primeiras décadas do uso de antibióticos, endocardite gonocócica é quase invisível, endocardite gonocócica e outros tipos A endocardite tem as mesmas manifestações clínicas. A endocardite geralmente envolve valva aórtica ou mitral, endocardite aguda ou subaguda devido à rápida destruição da válvula, levando à morte.
(5) meningite gonocócica: incomum, pode estar associada à artrite e a uma erupção típica para distinguir a meningite meningocócica.
Em quinto lugar, o impacto da gonorréia na gravidez e recém-nascidos
Quando uma mulher vai à gonorreia com salpingite, pode levar à infertilidade. A incidência de infertilidade causada pela gonorreia feminina é de cerca de 20%, e a incidência de infertilidade aumenta com o aumento do número de infecções. Para as mulheres infectadas com gonorréia mais de três vezes, a incidência de infertilidade pode chegar a 70%. A inflamação gonocócica cervical pode levar à ruptura precoce de membranas, infecção intra-amniótica, infecção intra-uterina, retardo de crescimento intra-uterino e parto prematuro. Os recém-nascidos apresentam alta morbimortalidade por parto prematuro, baixo peso corporal e sepse. A infecção a montante da bactéria gonocócica após o nascimento pode causar endometrite, febre puerperal, sepse pós-parto grave, conjuntivite gonocócica neonatal e vulvite vaginal vaginal.
Examinar
Exame de gonorréia
Inspeção de laboratório:
Os testes laboratoriais de Neisseria gonorrhoeae incluem esfregaço, cultura para verificar Neisseria gonorrhoeae, detecção de antígeno, teste de sensibilidade a fármacos e determinação de PPNG, e diagnóstico genético.
(1) exame de esfregaço:
Tome as secreções uretrais do paciente ou secreções cervicais para coloração de Gram e encontre Gram-negativo em leucócitos polimorfonucleares
Diplococcus, esfregaço para pacientes com uretrite gonocócica anterior simples com um grande número de secreções purulentas, a taxa positiva deste método é de cerca de 90%, pode ser diagnosticada inicialmente, secreções do cólon feminino, mais bactérias, sensibilidade e especificidade fracas A taxa positiva é de apenas 50-60%, e há um falso positivo, portanto, a Organização Mundial de Saúde recomenda o uso de um método de cultura para verificar pacientes do sexo feminino.Gororréia crônica tem menos bactérias gonocócicas positivas nas secreções, portanto, a taxa positiva é baixa.Por isso, a solução de massagem da próstata deve ser tomada. Aumente a taxa de detecção.
O esfregaço faríngeo constatou que o diplococo gram-negativo não poderia diagnosticar a gonorreia, porque outras espécies de Neisseria são normais na faringe, e a baciloscopia positiva para sintomas atípicos deve ser examinada posteriormente.
(2) treinamento e inspeção:
A cultura da Neisseria gonorrhoeae é uma evidência importante para o diagnóstico, sendo um método sensível para homens com sintomas leves ou assintomáticos, desde que a cultura seja positiva, o diagnóstico pode ser confirmado e, antes do diagnóstico genético, a cultura é recomendada pela Organização Mundial da Saúde. A única maneira de rastrear a gonorréia é usar meio Thayer-Martin (TM) modificado e meio de Nova York (NYC) O uso doméstico de ágar chocolate ou meio de ágar sangue contém antibióticos, opcionalmente Inibir o crescimento de muitas outras bactérias, cultura a 36 ° C, 70% de umidade, 5% -10% CO2 (vela) ambiente, 24-48 horas de observação, morfologia da colônia, coloração de Gram, oxidação Identificação por teste enzimático e teste de fermentação de açúcar, a taxa de cultura positiva é de 80% -95% para machos e 80-90% para fêmeas.
(três) detecção de antígeno
1. Ensaio imunoenzimático em fase sólida (EIA): Pode ser usado para detectar antígenos gonocócicos em amostras clínicas, podendo ser usado em populações de mulheres em áreas com altas taxas de prevalência e não pode ser cultivado ou espécimes precisam ser enviados por um longo período. Para diagnosticar infecções gonocócicas.
2. Ensaio de imunofluorescência directa: detecção directa por detecção de anticorpos monoclonais para a proteína da membrana externa I de Neisseria gonorrhoeae
Teste de fluorescência epidêmica, mas atualmente a sensibilidade dos espécimes bipolares masculino e feminino não é alta, a especificidade é pobre, eo nível de julgamento do experimentador, de modo que o experimento não pode ser recomendado para o diagnóstico de infecção gonocócica.
(quatro) diagnóstico genético
1. Diagnóstico da sonda gênica de Neisseria gonorrhoeae
As sondas para sondas gênicas gênicas são: sondas de DNA plasmídico, sondas gênicas cromossômicas e sondas gênicas de rRNA.
(1) Sonda de DNA plasmidial
1 Sonda de DNA plasmidial oculta, o plasmídeo Neisseria gonorrhoeae é dividido em três tipos: plasmídeo de zigosidade, a maior molécula, DNA de 36 kb, plasmídeo resistente a medicamento consiste de dois plasmídeos, comprimento de DNA de 5,6 kb e 7,1 kb, respectivamente; plasmídeo oculto de 4,2 kb; O plasmídeo enigmático está presente em 96% dos isolados clínicos de Neisseria gonorrhoeae, e outras Neisserias não contêm este plasmídeo, por isso sua seqüência pode ser utilizada como sonda de DNA específica para detecção de Neisseria gonorrhoeae, utilizando tecnologia de hibridação de ácidos nucléicos para detecção de Neisseria gonorrhoeae. Para dissimular o plasmídeo, a sonda foi utilizada para detectar 134 cepas de Neisseria gonorrhoeae e 131 cepas relacionadas, sendo que 124 cepas de Neisseria gonorrhoeae foram positivas para hibridização, representando 93%, podendo também ter reação cruzada com outras espécies de Neisseria. O teste de sensibilidade da agulha mostrou que 102 CFU de Neisseria gonorrhoeae puderam ser detectados, provou-se que a seqüência do gene CPPB no crípide estava em todos os cromossomos gonocócicos (incluindo cepas sem o plasmídeo), portanto a sonda CPPB possui boa especificidade e sensibilidade. Sex, Torres e colaboradores utilizaram a sonda gênica CPPB para detectar 201 amostras clínicas usando um sistema de marcação não radioativo da digoxina com sensibilidade e especificidade de 95% e 98%, respectivamente.
2 sonda de DNA plasmidial resistente a medicamentos
Os plasmídeos resistentes à Neisseria gonorrhoeae podem ser divididos em:
1 A bactéria gonocócica produtora de toxinas (PPNG) é positiva para β-lactamase;
2 tem um alto nível de resistência mediada por plasmídeo ao gonococo de tetraciclina (TRNG).
A cepa PPNG foi isolada pela primeira vez em laboratório em 1976. A cepa contém um gene que codifica uma enzima produtora de serotonina.O gene pode ser integrado no cromossomo ou no DNA plasmidial, e este último é chamado principalmente de azul. Plasmídeo de enzima de toxina, dois tipos de plasmídeos, 7,4 kb e 5,3 kb, respectivamente.Parador projetou uma sonda específica para a detecção do gene da β-lactamase gonocócica em 1998, que foi marcada por quimioluminescência enzimática, hibridização em fase líquida. A medida fotométrica é a quantidade de híbridos específicos: 104-105 UFC da linhagem PPNG pode ser detectada dentro de 4 horas, embora a linhagem TRNG seja resistente à tetraciclina, geralmente sensível a antibióticos β-lactamases e quinolonas. O teste de susceptibilidade pode ser classificado como uma bactéria sensível, que utiliza uma sonda oligonucleotídica contra o gene tetm da tetraciclina gonocócica (TRNG), que é mediada pela tetraciclina, marcada com quimioluminescência enzimática e hibridizada na fase líquida. 1.5 × 104 CFu de Neisseria gonorrhoeae contendo o gene tetm foram diretamente detectados em amostras clínicas.
(2) sonda cromossômica
As sondas cromossômicas incluem sondas gênicas conhecidas, como sondas de DNA pili e sondas gênicas paI, que desempenham papéis importantes no processo de infecção gonocócica de células humanas; sondas gênicas de função desconhecida, essas sondas A sequência é complementar à sequência específica do cromossomo, mas a função dessas seqüências gênicas não é conhecida atualmente.As duas sondas cromossômicas acima têm baixo número de detecção devido ao baixo número de cópias da seqüência complementar em Neisseria gonorrhoeae, então a sensibilidade de detecção é baixa, então geralmente não é usada Existem fins de pesquisa especial.
(3) sonda do gene rRNA
A sonda do gene rRNA usa um DNA complementar ao rRNA como uma sonda, e a seqüência alvo da sonda é uma seqüência rRNA, e a sonda genética do rRNA é caracterizada por:
1 pode aumentar a sensibilidade da detecção da sonda, a sonda do gene rRNA pode detectar simultaneamente moléculas de rRNA e moléculas de DNA;
2rRNA é evolutivamente conservado;
3 método de hibridização é simples e rápido;
4 Como o conteúdo de rRNA é alto, a amostra não precisa ser enriquecida.A sonda de detecção gonocócica PACE C produzida por Gen-Probe nos Estados Unidos usa rRNA e seu gene como sequência alvo de detecção, e é radioativamente rotulada e pode ser detectada dentro de 2 horas. Peter usou essa sonda para detectar 395 amostras clínicas, com sensibilidade e especificidade de 92,9% e 99,4%, respectivamente. Acreditava que o sistema PACE C era um método confiável para a pesquisa de bactérias gonocócicas em amostras clínicas. Infecções gonocócicas assintomáticas, que atualmente são difíceis de alcançar.
2, detecção de amplificação do gene gonocócica
A técnica de sonda descrita acima detecta o método gonocócico, embora tenha uma grande melhora na sensibilidade, especificidade e conveniência do que o método de cultura, mas ainda tem certas limitações, como a Neisseria gonorrhoeae, que requer espécimes na maioria dos casos. A concentração é muito alta e o surgimento da tecnologia de PCR e da reação em cadeia da ligase melhora a sensibilidade da detecção da Neisseria gonorrhoeae, apresentando as vantagens de rápida, sensível, específica e simples e pode detectar diretamente uma quantidade muito pequena de patógenos em amostras clínicas.
(1) Extração do DNA de Neisseria gonorrhoeae
1 extração de DNA da cultura
A Neisseria gonorrhoeae cultivada foi dissolvida em um lisado alcalino na concentração de 102 ufc / ml, o lisado consistiu em 1 M de NaCl 1 M NaOH e 1% de dodecil sulfato de sódio, o lisado foi misturado e fervido por 1 min, em seguida 100 μl. O lisado alcalino foi neutralizado com 1 M de Tris pH 7,0, extraído uma vez com Tris de equilíbrio de fenil, extraído uma vez com fenol-clorofórmio e depois precipitado com etanol absoluto ou isopropanol.O DNA extraído foi dissolvido em 30 ul de água destilada ou tampão TE. No líquido.
2 extração de amostra de cotonete de algodão clínico
Os cotonetes com as secreções foram espremidos em 2 ml de solução salina fisiológica estéril ou tampão PBS durante 1 min para dissolver os espécimes na solução, tanto quanto possível, e os cotonetes foram descartados, e a suspensão foi a 2-3000 r / Centrifugar por 5 min em min, aspirar o sobrenadante e voltar a dissolver as células em 100 ul de 1 × PCR buffer contendo 0,4% Tween 20 e 200 mg / ml proteinase K. A suspensão de células foi aquecida a 50-60 ° C por 1 h, então aquecida a 95 ° C por 10 min. A proteinase K inactivada foi centrifugada a 12000 rpm durante 10 min e o sobrenadante continha um molde de ADN.
(2) Projeto de primers de PCR
Uma vez que o gene CPPB de Neisseria gonorrhoeae está presente no cromossoma gonocócico e no plasmídeo críptico de 4,2 kb, e em 96% de Neisseria gonorrhoeae, muitos primers de PCR são desenhados na região do gene CPPB.
Comprimento do fragmento da sequência do iniciador do gene alvo (bp)
CPPB NG1 5'GTT TGG CTG GTT GAT TCA AG 3 '633
NG2 5'GCA AGA TTT CCG ATTT GGC G 3 '
CPPB HO1 5'GCT ACG GATO ACC CGC GTT GC 3 '390
HO2 5'CGA AGA CCT TCG AGC AGA CA 3 '
Iniciador de rRNA 1 5'-AGG CTG TTG CCA ATA TCG GC-3 '206
Primer 2 5'-ACA CTC GAG TCA CCC AGT TC-3 '
CPPB GC1 5'CTT ATC GTT TGG CTG GTT TC 3 '435
GC2 5'ACC AAG ACC AAA GGT TTG ACA CTG 3 '
GC3 5'ATT TTC CAG TGT CAA CA 3 '241
GC4 5'TAT TCA AGC CCT ATC TG 3 '
(3) amplificação por PCR
Tome 2 μl de extracto de ADN de Neisseria gonorrhoeae e adicione 28 μl da solução reacional.A solução reacional de PCR contém 100 μmol / L de dNTPs, 0,5 μmol / L de iniciadores, 1 U de polimerase Taq DNA, 1,5 mmol / L de Mg2 + e óleo de parafina estéril. 30 mL, 1000 r / min centrifugação por 30 s, ciclo de amplificação por PCR, condições de reação: 94 ° C desnaturação 1 min, em seguida 94 ° C 30s, 57 ° C 1 min, 72 ° C 1 min, um total de 30 ciclos e finalmente 72 ° C extensão 5 min.
O produto amplificado foi submetido à eletroforese em gel de agarose a 2% por 30 min, corado com brometo de etídio e a banda fluorescente de DNA amplificada foi observada sob luz ultravioleta.O tamanho da molécula amplificada deve ser consistente com o tamanho da sequência alvo amplificada.
(4) Sensibilidade e especificidade da PCR
Como o CPPB também contém o gene CPPB no cromossomo gonocócico que não contém o plasmídeo críptico, 96% das bactérias gonocócicas terão um plasmídeo críptico, portanto, os primers que utilizam CPPB como seqüência alvo têm sensibilidade extremamente alta. O método de PCR em um único passo (GC1-GC2) detecta três Neisseria gonorrhoeae, enquanto o PCR monocletor (GC2-GC4) detecta ≤0,3 Neisseria gonorrhoeae (9 genes CPPB), que foram testados por especificidade. Pode amplificar o DNA de Neisseria gonorrhoeae, mas não produz produtos específicos para N. gonorrhoeae.
(5) Método de PCR aninhado em tubo único
Com base na nested PCR tradicional, dois pares de primers de PCR foram especialmente projetados.Os dois primers externos (GC1, GC2) foram 25b, a temperatura de anelamento foi relativamente alta (68 ° C) e os dois primers internos GC3-GC4 aninhados. Para a temperatura de anelamento de 17b ser menor (46), os outros componentes da soluo de reaco de PCR s os mesmos que a PCR geral, de modo que o primer externo seja amplificado primeiro controlando a temperatura de anelamento (68), ap 20-30 ciclos (primeira vez) PCR) e, em seguida, reduzir a temperatura de anelamento (46 ° C) para fazer com que os primers internos utilizem o primeiro produto de PCR como molde para amplificação aninhada, a sensibilidade da PCR pode atingir 0,3 Neisseria gonorrhoeae.
(6) método de detecção da reação em cadeia da ligase da Neisseria gonorrhoeae (LCP)
Atualmente, o método para a detecção de Neisseria gonorrhoeae por PCR é amplamente utilizado e sua especificidade e sensibilidade são continuamente melhoradas, ao mesmo tempo em que outra técnica de diagnóstico genético, a reação em cadeia da ligase (LCP) também é aplicada com alta especificidade e alta sensibilidade. Na detecção de cocos, LCP difere de PCR em que LCP usa quatro pares de primers, a enzima usada é ligase, ligase pode ligar dois primers adjacentes, e os dois primers podem ser usados como modelos para os outros dois primers. O último pode ser ligado sob a ação da ligase e pode ser usado como um modelo para 30-40 ciclos.O método de tratamento modelo usado para LCP é equivalente à preparação do modelo de PCR.A sonda usada para LCP pode ser projetada no gene CPPB. Projetado em seqüências de genes cromossômicos, como o gene opa-1, a Abbott Laboratories projetou quatro sondas LCP na região de 48 bp do gene opa-1, uma vez que o gene opa-1 é 11 vezes no cromossomo gonocócico. Repita, portanto, o conjunto de sondas LCP tem alta sensibilidade e especificidade, processo de reação LCP:
O molde foi adicionado à solução de reação LCP, solução de reação LCP: 20 mmol / L Tris-HCl pH 7,6; 100 mmol / L KCl 10 mmol / L MgCl2; 1 mmol / L EDTA; 10 mmol / L NAD +; 10 mmol / L DTT , duas sondas adjacentes com marcação de cada 40fmol / L, sonda não etiquetada a cada 40fmol / L, 15U ligase resistente ao calor, condições de reação: 97 ° C 1s, 55 ° C 1s, 62 ° C 50s, 40 ciclos 100 µl do produto da reação foram adicionados à microplaca da microplaca e a reação de coloração foi realizada.Finalmente, o valor da luz foi lido por um leitor de microplaca.de acordo com a experiência de Buimer, a sensibilidade do LCP na detecção da amostra de uretral foi de 100% e a urina foi obtida. O espécime foi de 88,9%, o espécime de esfregaço cervical feminino foi de 95,4% e a especificidade do método de LCP foi tão alta quanto 100%, que foi significativamente maior do que a especificidade da PCR e evitou a ocorrência de falsos positivos.
3. Precauções para o diagnóstico genético clínico da Neisseria gonorrhoeae
Atualmente, o método de diagnóstico genético para detecção clínica de Neisseria gonorrhoeae adota principalmente o método de PCR, mas este método deve atentar para vários problemas na detecção clínica.
(1) Projeto de primer Além dos iniciadores de PCR gonocócicos listados acima, ele também pode ser projetado a partir de outros genes, mas
É a sequência de primers que deve ser específica, porque o cromossomo da bactéria é grande, muitas seqüências de genes não são claras, ao mesmo tempo, há uma certa homologia entre as bactérias, e também há homologia entre as seqüências de plasmídeos contidas na bactéria. Portanto, primers devem ser projetados para análise comparativa de bancos de dados de genes, e experimentos de especificidade e sensibilidade devem ser realizados, e primers devem ser selecionados para a detecção clínica.
(2) Processamento de amostras clínicas Para amostras clínicas, quanto mais puros forem os requerimentos do modelo de PCR, melhor a posição a ser tomada ao coletar amostras.Para pacientes assintomáticos, uma amostragem apropriada deve ser realizada para assegurar a coleta de bactérias patogênicas. Além disso, devido à complexidade dos espécimes clínicos, algumas vezes a amplificação por PCR dos espécimes não é ideal, o que pode ser devido a impurezas excessivas, o que requer purificação adicional, por exemplo, a purificação por extração com fenol-clorofórmio irá melhorar. Este método de purificação é pesado, e um kit de purificação de DNA comercialmente disponível está atualmente disponível para extração relativamente fácil de DNA de alta pureza de amostras clínicas.
(3) Método de detecção de produtos de PCR Recentemente, a detecção clínica por PCR de Neisseria gonorrhoeae quase todos utiliza eletroforese para identificar produtos de PCR, o que tem muitos problemas, como resultados falso-positivos e falso-negativos devido à subjetividade da observação macroscópica. A colorimetria híbrida é usada atualmente em vez da eletroforese para melhorar a especificidade e a sensibilidade dos resultados.
Em conclusão, o método de PCR e o método LCP melhoraram muito a sensibilidade e especificidade em comparação com o método de cultura tradicional, e o tempo também é bastante reduzido Com a melhoria contínua da tecnologia de diagnóstico gênico, o método PCR e o método LCP são detectados no gonococo Vai se tornar um método de detecção de rotina.
(5) Teste de suscetibilidade: teste de suscetibilidade adicional após cultura positiva, teste de sensibilidade pelo método de difusão de papel ou concentração inibitória mínima (MIC) pelo método de diluição em placa de ágar para guiar a seleção de antibióticos.
(6) Detecção de PPNG : β-lactamase, usando método quantitativo de acidez do papel, usando filtro de papel Whatman I PP-NG, a cepa pode fazer sua mudança de cor de azul para amarelo, positiva para PPNG, negativa para N-PPNG.
Diagnóstico
Diagnóstico de gonorreia
1. Doenças identificadas por homens e mulheres com gonorreia
(1) Uretrite inespecífica: Existem muitas vezes causas óbvias da doença, como a inserção do cateter, sonda uretral, trato geniturinário ou inflamação de órgãos adjacentes, e a mancha de secreção pode detectar cocos Gram-positivos.
(2) NGU: os sintomas clínicos são semelhantes aos da gonorréia, mas mais leves, o período de incubação é maior que a gonorreia, até 1 a 3 semanas, a secreção é pequena e serosa, a disúria é rara, não há sintomas sistêmicos e as secreções são examinadas. A clamídia ou o micoplasma podem ser encontrados com frequência.
(3) agachamento suave: o dano é geralmente localizado na área genital externa, ocorre na uretra, a fossa escapular tem secreções purulentas, vermelhidão uretral e dor severa, úlceras podem detectar Ducrey Haemophilus.
(4) herpes genital: causada por HSV, o dano é cluster blister, geralmente localizado na genitália externa, perianal, ocasionalmente no colo do útero, ocorre na uretra, pode haver uma pequena quantidade de secreções e formigamento uretral ou desconforto, muitas vezes acompanhada de sensação local de queimação A dor é óbvia e pode ser repetida.
(5) erupção medicamentosa fixa: há uma história de medicação ou injeção medicação, causada principalmente por sulfonamidas, barbitúricos, salicilatos ou tetraciclinas, muitas vezes ocorrem na junção da mucosa da pele genital eritema, edema, bolhas, Erosão e exsudação, etc., com coceira ou dor, sem vermelhidão e valgo na uretra.
(6) uretrite tuberculosa: pode ter formigamento uretral e uma pequena quantidade de secreções, mas não há história de contato sexual, não pode encontrar gonocócica, pode ser encontrada tuberculose, acompanhada por outras partes dos sintomas da tuberculose.
2. Doenças identificadas pela gonorréia masculina
(1) Balanite do prepúcio: comum no prepúcio é muito longa ou fimose, causada principalmente por estimulação de smegma e infecção piogênica secundária, folha interna intracapsular, glande e vermelhidão do sulco coronário, mais sujeira e secreções purulentas , sem sintomas do trato urinário e vermelhidão e inchaço da uretra, pus e assim por diante.
(2) Turvação da urina: a urina é branco leitoso e há sedimentos cristalizados por sal após o repouso, sem sintomas acompanhantes.
3. Doenças identificadas pela gonorréia feminina
(1) vaginite Candida: prurido abertura genital e vaginal, mais corrimento vaginal, como aguado ou coalhada, vermelhidão da mucosa vaginal, erosão, pode ter um filme branco ligado à parede vaginal, fazer um exame microscópico baciloscopia branca exame bactérias visíveis Seda e esporos.
(2) vaginite por Trichomonas: prurido conscientemente vaginal na vagina, secreções vaginais muitas vezes espuma rosa, mucosa vaginal mais sangramento, cervical pode ter saliências parecidas com morangos e hemorragia puntiforme, secreções vaginais Trichomonas podem ser detectados.
(3) Vaginose bacteriana: principalmente leucorreia refratária, branco acinzentado, não supurativa, com odor "semelhante a peixe", bacilos de Gardner e bactérias anaeróbias podem ser detectadas a partir das secreções vaginais.
(4) vulva jovem Staphylococcus aureus feminina: mais comum em meninas pré-escolares ou escolares, ocorre no verão, vulva, vermelhidão perianal, pústulas ou secreções purulentas, acompanhadas de dor ou prurido, secreção de secreções Cocos Gram-positivos foram detectados.
4. Doenças identificadas com o GPID
Existem apendicite aguda, aborto infeccioso, endometriose pélvica, gravidez ectópica, torção do pedículo do cisto ovariano ou ruptura.
