Isolierung und Identifizierung anaerober Bakterien

Die Isolierung und Identifizierung von anaeroben Bakterien stellt einen Test zur Trennung und Identifizierung von Bakterien mit hoher Sauerstoffempfindlichkeit dar. Da anaerobe Mikroorganismen in der Natur weit verbreitet und vielfältig sind, haben ihre physiologischen Funktionen zunehmend Beachtung gefunden. Obligate anaerobe Bakterien sind sehr sauerstoffempfindlich. Daher ist der Schlüssel zu ihrer Trennung, Kultur und Lebensfähigkeit die Bereitstellung einer sauerstofffreien Kulturumgebung mit geringem Redoxpotential. Grundlegende Informationen Fachklassifizierung: Wachstums- und Entwicklungskontrolle Klassifizierung: Biochemische Untersuchung Anwendbares Geschlecht: ob Männer und Frauen Fasten anwenden: Fasten Tipps: Wenn die Kolonie zu klein ist, verwenden Sie eine Lupe, um die Kolonien zu beobachten. Normalwert Die Art und der Anteil der Flora im Körper sind normal und der menschliche Körper befindet sich in einem Zustand des dynamischen Gleichgewichts und der Gesundheit. Klinische Bedeutung Die anaerobe Rollrohrtechnologie von Hengate, die anaerobe Rollrohrtechnologie von Hengate, ist eine anaerobe Kulturtechnologie, die erstmals 1950 vom amerikanischen Mikrobiologen Hengate vorgeschlagen und in der anaeroben Mikroorganismenforschung im Pansen angewendet wurde. Abnormale Ergebnisse: durch Clostridium Anaerobics verursachte Spezialerkrankungen wie Gasbrand, Tetanus, Botulismus usw. Zu untersuchende Personen: Patienten mit Diabetes, schwerer Lebererkrankung, Leberzirrhose, Urämie, Hämorrhoiden, Gliedmaßenbrand, Botulismus und anderen Symptomen. Vorsichtsmaßnahmen Bei der Trennung und Identifizierung von anaeroben Bakterien sind folgende Punkte zu beachten: (1) Anaerobe Proben müssen während der Entnahme und des Transports von der Luft isoliert und innerhalb von 30 Minuten fertiggestellt sein, wobei eine Kontamination der normalen Flora zu vermeiden ist. (2) Das Medium sollte frisch zubereitet werden.Wenn es zu lange gelagert wird, löst sich Sauerstoff an der Oberfläche oder Peroxid befindet sich im Medium, was das Wachstum von anaeroben Bakterien nicht fördert. (3) Wenn die Kolonie zu klein ist, sollte die Kolonie mit einer Lupe beobachtet werden. (4) Um einen Sauerstofftoleranztest durchzuführen, müssen 4 bis 5 Kolonien mit unterschiedlichen Merkmalen von jeder Agarplatte entnommen, aerobe und anaerobe Blutagarplatten inokuliert und in aerobe, Kohlendioxid- und anaerobe Umgebungen gebracht werden. (5) Wenn Sie eine extrazelluläre Enzymidentifikation durchführen, müssen Sie über eine ausreichende Bakterienkonzentration verfügen. Inspektionsprozess Trennung (1) Nummer Nehmen Sie fünf sterile Wasserröhrchen und markieren Sie sie mit einem Marker, um 10-1, 10-2, ... 10-5 anzuzeigen. (2) Verdünnung Verwenden Sie in einer nicht sauerstoffsterilen, ultrareinen, anaeroben Handschuhbox eine sterile Spritze, um 1 ml einer gut gemischten Flüssigkeitsprobe zu entnehmen, geben Sie diese in ein anaerobes Reagenzglas mit vorreduzierter physiologischer Kochsalzlösung und mischen Sie sie gleichmäßig mit einem Oszillator. Machen Sie eine 10-1-Verdünnung. Eine 1 ml 10-1-Verdünnung wurde unter Verwendung einer sterilen Spritze in ein separates anaerobes Röhrchen pipettiert, das 9 ml physiologische Kochsalzlösung enthielt, um eine 10-2-Verdünnung herzustellen. 10-mal seriell auf 10-6 verdünnt, um verschiedene Probenverdünnungen zu erhalten. Die Röhrchenzahl wird normalerweise durch drei Verdünnungen von 10 & supmin; & sup4 ;, 10 & supmin; & sup5; und 10 & supmin; & sup6; ausgewählt. (3) Rollentrennung 1) Rollrohr Das anaerobe sterile Agarmedium wurde in einem kochenden Wasserbad gelöst, in ein Wasserbad mit einer konstanten Temperatur von 46–50 ° C gegeben und verwendet, und als das Medium aus der Flasche entnommen wurde, wurde es mit N 2 in dem Medium aufgeblasen. Dann mit N2 im Reagenzglas aufpumpen, die gesamte Luft im Röhrchen entfernen, das Medium in das Röhrchen geben und sofort den Stopfen verschließen. Wenn der Stopfen in den Schlauch eingeführt wird, wird die Aufblasnadel rechtzeitig herausgezogen. Pipettieren Sie 0,1 ml von jeweils 10-4, 10-5 und 10-6 Verdünnungen in ein zu verwendendes Reagenzglas und legen Sie es flach auf eine Porzellanteller mit Eiswasser und rollen Sie es schnell. Der gelöste Agar bildet unmittelbar auf der Innenwand des Reagenzglases eine erstarrte Schicht. 2) Trennung und Reinigung Die resultierenden Kolonien müssen ausgewählt und auf ihre Morphologie und Reinheit untersucht werden. Wenn keine Reinkultur erhalten wurde, verdünnen Sie das Röhrchen erneut und pflücken Sie den Dickdarm erneut, bis eine Reinkultur erhalten wird. Die einzelnen zu pflückenden Kolonien werden vorab unter einer Lupe beobachtet und markiert. Das Medium-Teströhrchen wird dann an einem geeigneten Halter befestigt, und der Teströhrchen-Gummistopfen wird geöffnet, und eine gasgefüllte Stickstoffnadel mit einem geeigneten Luftstrom und flammengetöteten Bakterien wird schnell in das Röhrchen eingeführt. Gleichzeitig wird ein weiterer flüssiger anaerober Schlauch vom Gummistopfen entfernt und in eine andere sterilisierte Entlüftungsnadel eingeführt. Führen Sie die vorbereiteten Ellenbogenkapillaren vorsichtig in das feste Medium ein, identifizieren Sie die zu sammelnden Kolonien, saugen Sie sie vorsichtig ab, geben Sie sie in ein flüssiges Reagenzglas und verschließen Sie sie. Die Kultur wurde 24 Stunden oder länger bei 37 ° C oder nachdem die Trübung der Kulturlösung überprüft worden war, kultiviert, und die Reinheit der isolierten Kultur wurde untersucht. 3) Strichtrennung Ein Ende des Gummistopfens des Reagenzglases ist an der Flamme verbrannt, und die Gasansaugnadel dient zum Verstopfen der Düse. Bevor die Nadel schnell entfernt wird, wird die Luft 15 bis 20 Sekunden lang belüftet und ein Ende des Reagenzglases ist eine Weile an der Flamme verbrannt. Ziehen Sie den Rohrstopfen fest, und das gewickelte Rohr ist errichtet und isoliert. Verwenden Sie CO2: H2 = 80: 20. Da CO2 schwerer als Luft ist, weist der Rohrstopfen nach dem Öffnen keine Luftrückstände auf. Das Anreißröhrchen kann bei 34-37 Grad wachsen, um Kolonien zu züchten. Identifizierung von Stämmen 1 Zuckerfermentationstest Zuckerfermentationsexperimente sind die am häufigsten verwendeten biochemischen Reaktionen und besonders wichtig für die Identifizierung von Darmbakterien. Die meisten Bakterien können Zucker als Kohlenstoff- und Energiequelle verwenden, haben jedoch große Unterschiede in ihrer Fähigkeit, Zucker abzubauen.Einige Bakterien können Zucker abbauen und Säure (wie Milchsäure, Essigsäure, Propionsäure usw.) und Gas (wie Wasserstoff, Methan, Kohlendioxid usw. Einige Bakterien produzieren nur Säure und kein Gas. Zum Beispiel kann Escherichia coli Laktose und Glukose zersetzen, um Säure und Gas zu produzieren, Salmonella typhimurium kann Glukose zersetzen, um Säure und kein Gas zu produzieren, und kann Laktose nicht zersetzen, und gewöhnlicher Proteus zersetzt Glukose, um Säure und Gas zu produzieren, das Laktose nicht zersetzen kann. Die Säureproduktion kann mit einem Indikator bestimmt werden. Bromkresolpurpur [pH 5,2 (gelb) - 6,8 (purpur)] wurde vorab zugegeben, als das Medium hergestellt wurde, und als die Säure durch Fermentation erzeugt wurde, wurde das Medium von purpur nach gelb geändert. Die Erzeugung von Gas kann durch das Vorhandensein oder Nichtvorhandensein von Blasen im umgekehrten Dehan-Rohr im Fermentationsrohr nachgewiesen werden. Spezifische experimentelle Schritte: 1 Die Bakterienflüssigkeit wird in geeigneter Weise verdünnt, und dann wird in einer sterilen Umgebung eine bestimmte Menge der verdünnten Lösung in das Röhrchen für die biochemische Identifizierung injiziert und mit einem sterilen Versiegelungsfilm versiegelt. 2 Setzen Sie das inokulierte Identifikationsröhrchen in einen anaeroben Tank und stellen Sie es in einen Inkubator mit konstanter Temperatur von 37 ° C und ausreichend Stickstoff. Die Farbänderung und die Gasproduktion jedes Röhrchens wurden nach 324 Stunden beobachtet. 2 Proteinzerlegungsexperiment 1 Die Bakterienflüssigkeit wird in geeigneter Weise verdünnt, und dann wird in einer sterilen Umgebung eine bestimmte Menge der verdünnten Lösung in das Röhrchen für die biochemische Identifizierung injiziert und mit einem sterilen Versiegelungsfilm versiegelt. 2 Setzen Sie das inokulierte Identifikationsröhrchen in einen anaeroben Tank und stellen Sie es in einen Inkubator mit konstanter Temperatur von 37 ° C und ausreichend Stickstoff. Nach 324 Stunden wurden die Röhrchen der Mirren-Reaktion, der Hydrazin-Reaktion, der Gelbreaktion bzw. der Mundwasserreaktion unterzogen. 3-Stärkehydrolyseversuch 1 Die Bakterienflüssigkeit wird in geeigneter Weise verdünnt, und dann wird in einer sterilen Umgebung eine bestimmte Menge der verdünnten Lösung in das Röhrchen für die biochemische Identifizierung injiziert und mit einem sterilen Versiegelungsfilm versiegelt. 2 Setzen Sie das beimpfte Identifikationsröhrchen in einen anaeroben Tank und stellen Sie es in einen Inkubator mit konstanter Temperatur von 37 ° C und ausreichend Stickstoff. Nach 324 Stunden wurde jedem Röhrchen eine geeignete Menge Lugols Iodlösung zugesetzt, um die Hydrolyse der Stärke zu beobachten. Nicht für die Menge geeignet Keine relevanten Informationen. Nebenwirkungen und Risiken Es wurden keine verwandten Komplikationen und Gefahren gefunden.