Lymphozytentoxizitätstest

Wenn spezifische Effektor-T-Lymphozyten in vitro mit Zielzellen in Kontakt gebracht werden, können sie die Eigenschaft aufweisen, Zielzellen zu zerstören und zu lysieren, die als Lymphozytentoxizität bezeichnet wird. Die Zielzelle kann eine Tumorzelle oder eine andere Gewebezelle sein. Die Art und Weise, wie Lymphozyten Zielzellen töten, kann Zielzellen durch direktes Abtöten oder durch die Produktion von Lymphokinen zerstören. Dies ist der Lymphozytentoxizitätstest. Einige Lymphozyten wie CTL, NK, LAK usw. haben eine direkte Abtötungswirkung auf Zielzellen, und je nach Art der nachzuweisenden Effektorzellen können die entsprechenden Zielzellen wie Tumorzellen, Transplantat-Spenderzellen usw. ausgewählt werden. Dieses Experiment kann zur Erforschung der Tumorimmunität, Transplantatabstoßung, Virusinfektion und dergleichen verwendet werden. Die Verfahren umfassen: Chromfreisetzungsverfahren, Lactatdehydrogenasefreisetzungsverfahren und apoptotischen Zellassay. Grundlegende Informationen Facharztklassifikation: Onkologische Untersuchung Klassifikation: Immununtersuchung Anwendbares Geschlecht: ob Männer und Frauen Fasten anwenden: Fasten Analyseergebnisse: Unter dem normalen Wert: Normalwert: Nein Überdurchschnittlich: Negativ: Normal. Positiv: Derzeit keine relevanten Daten. Tipps: Behalten Sie eine normale Denkweise. Normalwert Die morphologische Untersuchungsmethode wurde zwischen der Testgruppe und der Kontrollgruppe verglichen, P <0,05. 125I- oder 51Cr-Methode P> 0,05. Klinische Bedeutung Abnormale Ergebnisse: Dieser Test kann als Indikator für die Messung der zellulären Immunität bei Tumorpatienten in vitro verwendet werden, er kann auch die Prognose von Tumorpatienten durch Messung der Fähigkeit von Immunzellen bestimmen, Tumorzellen abzutöten, und er kann auch funktionelle Subpopulationen von Lymphozyten identifizieren. Zu untersuchende Population: Der Lymphozyten-Toxizitätstest wird auch als Komplement-abhängiger Zytotoxizitätstest (CDC) bezeichnet. Es soll überprüft werden, ob sich im Empfänger der Organtransplantation ein Spender oder der HLA-Antikörper des Spenders gegen den Empfänger befindet, und es muss vor der Organtransplantation ein CDC-Test durchgeführt werden. Vorsichtsmaßnahmen (1) Bei der Messung der Fähigkeit der untersuchten Lymphozyten, Tumorzellen anzugreifen, wurden der Versuchsgruppe Tumorzellen und Lymphozyten der untersuchten Person zugesetzt, und der Kontrollgruppe wurden Tumorzielzellen und Kulturmedium zugesetzt. Wenn andere Proben wie Tumorantigene oder Immunogene, Therapeutika usw. an der zellulären Immunität beteiligt sind, sollte eine dritte Gruppe hinzugefügt werden: In dieser Testgruppe können Lymphozyten zuerst mit der zu testenden Probe reagieren, dann gewaschen und dann beobachtet werden. Die zytotoxische Wirkung sensibilisierter Lymphozyten auf Tumorzielzellen. Die ersten beiden Gruppen wurden zu diesem Zeitpunkt zur Kontrollgruppe. (2) Die Überlebensrate von Zielzellen und Lymphozyten sollte in einem optimalen Zustand sein, im Allgemeinen> 90%. (3) Das der Kulturlösung zugesetzte Kälberserum muss zuerst auf Toxizität geprüft werden. (4) Die Anzahl der inokulierten Zielzellen und Lymphozyten sollte genau sein. (5) Die Versuchsgruppe und die Kontrollgruppe sollten auf derselben Platine angeordnet sein, um den Fehler zu verringern. (6) Der pH-Wert der Kulturlösung beträgt am meisten bevorzugt 6,8 bis 7,2. Inspektionsprozess (1) Inokulation von Zielzellen: Wählen Sie Tumorzellen aus, die adhärent wachsen können, waschen Sie sie mit Hank-Lösung, verdauen Sie sie mit 2,5 g / l Trypsin für 2 bis 3 Minuten, gießen Sie die Trypsin-Lösung ein (die Zellen sind noch an der Flaschenwand befestigt) und verwenden Sie Hank. Die Zellen wurden dreimal leicht gewaschen und die Hank-Lösung wurde gegossen. Die anhaftenden Zellen wurden mit RPMI1640-Lösung, die 10% bis 20% Kälberserum enthielt, gewaschen, und das Zellpellet wurde durch Filtration durch ein 100-Mesh-Filter entfernt, um eine einzelne Tumorzellsuspension von 1 × 10 6 / ml herzustellen, und die Zellsuspension wurde mit einem Tropfer pipettiert. In eine Kulturplatte mit 40 Vertiefungen tropfen, 1 Tropfen pro Vertiefung (ca. 100-150 Zellen), und die Platte für 20 Stunden in einen Inkubator mit 5% CO 2 bei 37 ° C legen. Die Kulturplatte wurde herausgenommen und die Kulturlösung entfernt.Nach der Wright-Färbung wurde die durchschnittliche Anzahl anhaftender Tumorzellen pro 10 Vertiefungen gezählt.Wenn der Unterschied zwischen den beiden Gruppen> 1/3 war, war der Fehler zu groß, um verwendet zu werden, und der Fehler war nicht groß. Die Kulturplatte kann formal getestet werden. (2) Trennung von Lymphozyten: Nehmen Sie die Heparin-Antikoagulation 3 ml des Probanden, trennen Sie die Lymphozyten mit der Saccharose-Diazepam-Auslaugungslösung, waschen Sie sie dreimal mit Hank-Lösung und mischen Sie sie dann mit RPMI1640-Lösung (2 ~ 3) ) × 105 / ml Zellsuspension. (3) Zytotoxizitätstest: Lymphozyten und Zielzellen werden in einem Verhältnis von 200: 1 gemischt, und (2 ~ 3) × 104 Lymphozyten (in 0,1 ml Volumen) werden zu jeder Vertiefung gegeben, und ungefähr 20% Kälberserum werden pro Vertiefung zugegeben. 0,1 ml RPMI 1640-Lösung wurden 40 Stunden in einen Inkubator mit 37 ° C und 5% CO 2 gegeben. Die Kulturplatte wurde herausgenommen und die Kulturlösung entfernt.Nach der Wright-Färbung wurde die Anzahl der am Boden der Platte verbleibenden Zielzellen unter einem Mikroskop gezählt. Nicht für die Menge geeignet Es gibt keine Tabus. Nebenwirkungen und Risiken Es gibt keine damit verbundenen Komplikationen und Gefahren.