Enzyme-linked Immunosorbent Assay

Der enzymgebundene Immunosorbens-Assay ist ein enzymgebundener Immunosorbens-Assay. Es dient zum Nachweis des zu testenden Antigens (oder Antikörpers), das in der Vertiefung der Festphasenplatte beschichtet ist. Das heißt, der Antikörper wird mit einem Enzym markiert, und das bekannte Antigen oder der bekannte Antikörper wird an der Oberfläche des Festphasenträgers adsorbiert, und die Antigen-Antikörper-Reaktion wird an der Oberfläche des Festphasenträgers durchgeführt, und die freie Komponente in der flüssigen Phase wird durch Waschen weggewaschen und schließlich von dem Enzym beaufschlagt. Die Farbe wird nach dem Substrat entwickelt, um das Ergebnis zu beurteilen. Die Tiefe der Farbreaktion ist proportional zur Menge des entsprechenden Antikörpers oder Antigens in der Probe. Diese Farbreaktion kann durch einen ELISA-Detektor quantitativ bestimmt werden, der die Empfindlichkeit der chemischen Enzymreaktion mit der Spezifität der Antigen-Antikörper-Reaktion kombiniert, wodurch die ELISA-Methode sowohl eine spezifische als auch eine empfindliche Nachweismethode darstellt. Grundlegende Informationen Fachklassifikation: Wachstums- und Entwicklungskontrolle Klassifikation: immunologische Untersuchung Anwendbares Geschlecht: ob Männer und Frauen Fasten anwenden: nicht Fasten Analyseergebnisse: Unter dem normalen Wert: Normalwert: Nein Überdurchschnittlich: Negativ: Normal. Positiv: Der menschliche Körper befindet sich in einem dynamischen Gleichgewicht und in einem ungesunden Zustand. Tipps: Entspannen Sie sich beim Überprüfen. Normalwert Die Art und der Anteil der Flora im Körper sind normal und der menschliche Körper befindet sich in einem Zustand des dynamischen Gleichgewichts und der Gesundheit. Klinische Bedeutung Der enzymgebundene Immunosorbens-Assay ist die am weitesten verbreitete Technik im Enzymimmunoassay. Üblicherweise verwendete ELISA-Verfahren umfassen ein Doppelantikörpersandwich-Verfahren und ein indirektes Verfahren, wobei das erstere zum Nachweis makromolekularer Antigene und das letztere zum Messen spezifischer Antikörper dient. In Bezug auf parasitäre Erkrankungen wird es zur serologischen Diagnose von Plasmodium, Amöbe, Liegemann, Trypanosoma, Bilharziose, Zystizerkose, Toxoplasma, Bilharziose, Leberegel, Blutwurm, Trichinose verwendet Dies ist sowohl für Ärzte als auch für Tierärzte wichtig. Es wurde zum Nachweis von Antikörpern gegen Streptococcus, Salmonella, Brucella, Mycobacterium tuberculosis, Haemophilus, Vibrio cholerae, Neisseria gonorrhoeae, Candida usw. verwendet und kann auch für Tetanus-Antitoxin und Vibrio cholerae-Antitoxin verwendet werden. Die Bestimmung und der Nachweis von Antikörpern gegen Rickettsia-Rickettsia-Infektionen kann diagnostiziert werden. Rickettsia kann auch verwendet werden, um eng verwandte Arten zu identifizieren. Es gibt auch Berichte zur Untersuchung von Antikörpern gegen Chlamydia psittaci. Influenzavirus, Mumpsvirus, Masern, Röteln, Rotavirus, Herpesvirus, Cytomegalievirus, EB-Virus, Adenovirus, Enterovirus, Enzephalitisvirus, Gelbfiebervirus, Tollwut Toxische und Polioviren usw. sind empfindlicher als die derzeit verwendeten Inspektionsmethoden. Bei immunologischen Erkrankungen gibt es Tests zum Nachweis von Autoimmunerkrankungen und zur Diagnose von Allergien, wie Antikörpern gegen verschiedene Allergene, DNA-Antikörpern und Thyreoglobulin-Antikörpern, Erythematodes-Antikörpern und dergleichen. In der Hygiene kann es zum Nachweis von Staphylokokken-Enterotoxin und Salmonellen-Toxin in Lebensmitteln verwendet werden. Positive Ergebnisse können Krankheiten sein: erworbene bullöse Epidermolyse, Trypanosomiasis, Bilharziose und Hepatobiliose, Toxoplasmose-Skleritis, Gestman-Syndrom, neugeborene angeborene Toxoplasmose, Leberegel, Sibirisches Rickettsia-Fleckfieber, Darmpiriflagellaten, Vorsichtsmaßnahmen gegen touristischen Durchfall 1. Substrat: Verschiedene Enzyme sind für das Substrat spezifisch, daher erfordert die Verwendung verschiedener Arten von Enzymen verschiedene Substrate. Sobald das Enzymkonjugat bestimmt wurde (z. B. AP oder HRP), ist der Bereich der zur Auswahl verfügbaren Substrate sehr begrenzt. Die Auswahl eines geeigneten Substrats im Rahmen dieses begrenzten Substrats sollte gemäß den folgenden Bedingungen erfolgen: (1) Das Substrat sollte farblos sein, bevor es durch das Enzym katalysiert wird, und eine offensichtliche Farbe aufweisen, nachdem es durch das Enzym katalysiert wird. Ändern, damit die Ergebnisse klar voneinander abgegrenzt werden können: (2) die Farbe ist leicht zu trocknen und zu eluieren; (3) das Produkt muss nach der Farbentwicklung stabil sein; die bei der quantitativen Bestimmung erzeugte Farbsubstanz sollte löslich sein; (4) der Preis Billig, leicht zu bekommen und ungiftig. Daher wird für das AP-Enzymkonjugat im Allgemeinen Nitrophenylphosphat verwendet, und die Farbe ist nach der Farbentwicklung orange und die Farbe ist stabil. Die Reaktion wird mit 2 mol / l NaOH beendet und der OD-Wert kann bei einer Wellenlänge von 403 nm gemessen werden. 2. Waschmittel und Verdünner: Um die Menge des spezifisch gebundenen Antikörpers zu maximieren, sollte das in der Vertiefung der Mikrotiterplatte aufgetragene Antigen einen geringen Überschuss aufweisen. Während der Inkubation oder des Waschens kann jedoch ein Teil des adsorbierten Antigens vom festen Träger abgewaschen werden. Daher ist es wahrscheinlich, dass das andere Protein als der dem Testserum zugesetzte spezifische Antikörper an der Blindprobe der ursprünglichen Antigen-beschichteten Vertiefung adsorbiert wird, wodurch die Hintergrundfarbe erhöht und eine falsch positive Reaktion erzeugt wird, was ein Faktor ist, der die Spezifität des ELISA einschränkt. Viele Wissenschaftler haben Verdünnungs- und Detergenzien verschiedene Schutzmittel zugesetzt, um die kompetitive Adsorption unspezifischer Proteine ​​zu hemmen. Inspektionsprozess Das grundlegende Verfahren besteht darin, ein bekanntes Antigen oder einen bekannten Antikörper auf der Oberfläche eines Festphasenträgers (Polystyrol-Mikroreaktionsplatte) zu adsorbieren, die enzymmarkierte Antigen-Antikörper-Reaktion auf der Oberfläche der Festphase umzusetzen und die freien Komponenten in der flüssigen Phase durch Waschen zu waschen. Außer. Entsprechend dem im ELISA verwendeten Festphasenträger wird er in drei Typen unterteilt: Einer ist der ELISA mit Polystyrol-Mikrotiterplatte als Träger, auf den wir uns normalerweise beziehen (ELISA mit Mikrotiterplatte), der andere verwendet Nitrocellulosemembran als Träger. Der ELISA wird Spot-ELISA (Dot-ELISA) genannt, der andere ELISA unter Verwendung eines hydrophoben Polyestergewebes als Träger, genannt Tuch-ELISA (C-ELISA). In dem Mikrotiterplatten-ELISA wird er weiter unterteilt in indirekten ELISA, doppelten Antikörper-Sandwich-ELISA, doppelten Sandwich-ELISA, Kompetitions-ELISA, Blockierungs-ELISA und Antikörper-Einfang-ELISA gemäß seinen Eigenschaften. Nicht für die Menge geeignet Es gibt keine besonderen Tabus. Nebenwirkungen und Risiken Es gibt keine damit verbundenen Komplikationen und Gefahren.