Immunologischer Nachweis von Helicobacter pylori

Immunologische Helicobacter-pylori-Tests erkennen eine H.-pylori-Infektion durch Messung von Helicobacter-pylori-Antikörpern im Serum, einschließlich passiver Hämagglutinationstests, Immunoblotting-Techniken und enzymgebundener Immunosorbens-Tests (ELISA). Der Patient nahm das Liquor cerebrospinalis und verdünnte das Antigen mit der 96-Well-V-Hämagglutinationsplatte, um das JE-Antigen zu verdünnen, so dass jedes Well 25 ul enthielt, und das zu testende Serum wurde mit jeder Verdünnung 1:10 verdünnt. Füge 25 ul hinzu, füge lyophilisierten monoklonalen Antikörper des japanischen Gehirns hinzu, um die roten Blutkörperchen von Schafen zu sensibilisieren, und beobachte die Ergebnisse, nachdem du mehrere Stunden bei 37ºC gestanden hast. Grundlegende Informationen Fachklassifikation: Wachstums- und Entwicklungsuntersuchung Klassifikation: Blutuntersuchung Anwendbares Geschlecht: ob Männer und Frauen Fasten anwenden: Fasten Tipps: Halten Sie einen leeren Magen von der Prüfung fern. Normalwert Das Ergebnis war negativ. Klinische Bedeutung Abnormale Ergebnisse: 1. Der Serumagglutinationstiter des Tests ist viermal oder mehr als viermal höher als die Antigenkontrolle. Der Serumantigentiter war während der Erholungsphase mindestens viermal höher als die akute Phase und positiv. 2. Es gibt eine spezielle Farbreaktion, die beweist, dass ein bestimmtes Protein vorhanden ist. 3. Das Verhältnis des zu testenden Serums zu dem bekannten negativen Serum (P / N) ≥ 2,1 und der OD-Wert des zu testenden Serums ist ≥ 0,4, dann wird es als positiv beurteilt. Notwendigkeit, die Menge zu überprüfen: Patienten mit Ulkuskrankheiten. Vorsichtsmaßnahmen Gegenanzeigen vor der Inspektion: Achten Sie auf den Schutz des Gehirns, bereiten Sie verschiedene Verpackungsflüssigkeiten vor und konfigurieren Sie die Konzentration. Tabu beim Prüfen: 1. Der Patient nimmt die Liquor cerebrospinalis zum Sitzen, um den Kopf nicht zu verletzen. 2. Monoklonale Antikörper zur Sensibilisierung der roten Blutkörperchen von Schafen, die vor der Verwendung lyophilisiert werden sollen. 3. Die Verdünnung, Wirkdauer und Temperatur der primären und sekundären Antikörper sollten vorab experimentiert werden, um die optimalen Bedingungen für verschiedene Proteine ​​zu bestimmen. 4. Die Farbentwicklungslösung muss frisch konfiguriert und schließlich zu H2O2 gegeben werden. 5. DAB kann Krebs erzeugen. Seien Sie daher vorsichtig, wenn Sie damit umgehen. 6. Kontrollieren Sie streng die Faktoren, die die Effizienz der Markierung beeinflussen, wie Temperatur, Zeit, pH-Wert, Enzym- und Antikörpermenge. 7. Wenn Sie die Säule installieren, machen Sie die Säule gleichmäßig, die Zylinderoberfläche ist flach und es gibt keine Blasen oder Risse. Inspektionsprozess Erstens passive Blutgerinnung Der Patient nahm das Liquor cerebrospinalis und verdünnte das Antigen mit der 96-Well-V-Hämagglutinationsplatte, um das JE-Antigen zu verdünnen, so dass jedes Well 25 ul enthielt, und das zu testende Serum wurde mit jeder Verdünnung 1:10 verdünnt. Füge 25 ul und 25 ul sensibilisierte rote Schafblutkörperchen durch lyophilisierten monoklonalen japanischen Hirnantikörper hinzu und beobachte die Ergebnisse nach mehrstündigem Stehen bei 37ºC. Zweitens Immunoblotting-Technologie (A) Proteinprobe erhalten: Nach bakterieller Induktion der Expression können die Zellen direkt durch Elektrophoresebeladungspuffer, eukaryotische Zellen plus Homogenisierungspuffer, mechanisches Homogenisat oder Ultraschall-Raumtemperatur-Homogenisat von 0,5 bis 1 min lysiert werden. Es wurde dann 15 Minuten bei 13.000 g und 4 ° C zentrifugiert. Nehmen Sie den Überstand als Probe. (2) Elektrophorese: Ein Elektrophoresegel wurde hergestellt und einer SDS-PAGE unterzogen. (3) Übertragung: (halbtrockene Übertragung) 1. Schneiden Sie den Streifen nach Beendigung der Elektrophorese auf die entsprechende Größe und äquilibrieren Sie ihn mit dem Membranpuffer 5 min × 3 mal. 2. Membranbehandlung: Das Filterpapier und die NC-Membran der gleichen Größe wie der Streifen wurden vorgeschnitten und 10 Minuten lang in den Transferpuffer eingetaucht. 3. Transferfolie: Die Folienübertragungsvorrichtung wird in der Reihenfolge der Anodenkohleplatte, 24 Schichten Filterpapier, NC-Folie, Gel, 24 Schichten Filterpapier und Kathodenkohleplatte von unten nach oben angeordnet, wobei Filterpapier, Gel und NC-Folie genau aufeinander abgestimmt sind. Die Blasen wurden in einem Schritt entfernt und ein Gewicht von 500 g wurde darauf aufgebracht, um die überschüssige Flüssigkeit auf der Kohlenstoffplatte zu trocknen. Schalten Sie die Stromversorgung ein, konstanter Strom 1mA / cm2, übertragen Sie 1,5 Stunden. Nachdem die Übertragung abgeschlossen ist, wird der Strom entfernt und die Membran herausgenommen, und der zu testende Streifen wird zum Immunblotting geschnitten. Die Proteinstandardstreifen wurden gefärbt, 50 s in die Membranfärbelösung gegeben und dann mehrmals in 50% igem Methanol bis zu einem klaren Hintergrund entfärbt, dann mit doppelt destilliertem Wasser gewaschen, in zwei Schichten Filterpapier luftgetrocknet und färben gelassen Die Ergebnisse werden verglichen. (4) Immunantwort: 1. Wasche die Membran 5 min x 3 mal mit 0,01 M PBS. 2. Fügen Sie die Beschichtungslösung hinzu und schütteln Sie sie 2 Stunden bei Raumtemperatur. 3. Verwerfen Sie die Lösung und waschen Sie die Membran dreimal 5 Minuten lang mit 0,01 M PBS. 4. Primärantikörper hinzufügen (verdünnt mit 0,01 M PBS in einem geeigneten Verdünnungsverhältnis, die Flüssigkeit muss die gesamte Membran bedecken) und länger als 12 Stunden bei 4 ° C stehen lassen. In der Negativkontrolle wurde der Primärantikörper durch 1% BSA ersetzt und die restlichen Schritte waren die gleichen wie in der Versuchsgruppe. 5. Den Primärantikörper und 1% BSA verwerfen und die Membran mit 0,01 M PBS 5 min × 4 mal waschen. 6. Fügen Sie Meerrettichperoxidase-konjugierten sekundären Antikörper (verdünnt mit 0,01 M PBS im geeigneten Verdünnungsverhältnis) hinzu und schütteln Sie ihn vorsichtig 2 Stunden lang bei Raumtemperatur. 7. Den sekundären Antikörper verwerfen und die Membran mit 0,01 M PBS 5 min × 4 mal waschen. 8. Fügen Sie die Farbstofflösung hinzu, meiden Sie das Licht und entwickeln Sie Farbe, bis die Bande erscheint. Geben Sie doppelt destilliertes Wasser hinein, um die Reaktion zu stoppen. Drittens, kombinierte Adsorptionsbestimmung von Enzymen Üblicherweise verwendete ELISA-Verfahren umfassen ein Doppelantikörpersandwich-Verfahren und ein indirektes Verfahren, wobei das erstere zum Nachweis makromolekularer Antigene und das letztere zum Messen spezifischer Antikörper dient. Indirekter ELISA Diese Methode wird hauptsächlich zum Nachweis von Antikörpern eingesetzt. Das Verfahren für den indirekten ELISA ist wie folgt. (1) Materialien 1 Beschichtungsflüssigkeit, Waschflüssigkeit, Wärmekonservierungsflüssigkeit, Substratflüssigkeit und Stoppflüssigkeit; 2DVH-beschichtetes Antigen, enzymmarkierter Anti-Antikörper, negatives und positives DVH-Referenzserum; 3 ELISA-Detektor, Probenehmer, Polystyrol-Mikroplatte. (2) Verfahrensschritte 1 plus Antigenüberzug → 4 ° C über Nacht, dreimal gewaschen, trocken geworfen; 2 plus zu testendes Serum → 37 ° C für 2 Stunden, dreimal gewaschen, trocken werfen; 3 plus enzymmarkierter Antikörper → 37 ° C für 2 Stunden, dreimal gewaschen, trocken werfen; 4 Substratlösung hinzufügen → 37 ° C für 30 Minuten, Stopplösung hinzufügen; 5 Der OD-Wert wurde mit einem ELISA-Detektor gemessen und das P / N-Verhältnis berechnet. 2. Doppelter Antikörper-Sandwich-ELISA Diese Methode wird hauptsächlich zum Nachweis von makromolekularen Antigenen eingesetzt. 1 plus Antikörperüberzug → 4 ° C über Nacht, dreimal gewaschen, trocken geworfen; 2 plus das zu testende Antigen → 30 Minuten bei 37 ° C, dreimal gewaschen, trocken werfen; 3 plus enzymmarkierter Antikörper → 37 ° C für 30 Minuten, dreimal gewaschen, trocken werfen; 4 Substratlösung hinzufügen → 37 ° C für 15 Minuten, Stopplösung hinzufügen; 5 Der OD-Wert wurde mit einem ELISA-Tester gemessen. Nicht für die Menge geeignet Nicht geeignet für die Überprüfung der Menge: keine. Nebenwirkungen und Risiken Keine verwandten Komplikationen oder Gefahren.